<p class="jove_content"&gt; הלימודים הנוכחית נתמכים על ידי הלאומי ללב, ריאות, ודם המכון גרנט R01-HL0921, R01-DK083385 ו R01HL098294 כדי HK Eltzschig, 1K08HL102267-01 ל ט Eckle, ואת הקרן לחינוך הרדמה מענקי מחקר ל ט Eckle ו HK Eltzschig, ו American Heart Association גרנט ט Eckle ו HK Eltzschig ודויטשה Forschungsgemeinschaft (DFG) מלגת מחקר מ Koeppen.</p

הערות כלליות: כל הפעולות צריכות להתבצע תחת מיקרוסקופ לנתח זקוף (אולימפוס, SZX10 הודעה עם Z-Axis Crank עם סטנד בום סטנד STU2) וכן באמצעות coagulator כירורגית (11). קבוצות הניסוי צריך להיות תואם ככל האפשר גיל ומשקל כדי להבטיח את ההשוואה של התוצאות. הממשל, טמפרטורה לחץ דם, נוזל ההרדמה צריך להיות יציב לאורך כל הדרך. 1. הרדמה והכנת קנה הנשימה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש C57BL / 6 עכברים, כי הם לפחות 10 שבועות ויש לך גוף של 22-25 גרם להשרות הרדמה באמצעות נתרן pentobarbital ב 70 מנה ip מ&quot;ג / ק&quot;ג משקל גוף (6). שמור הרדמה עם כ 10 מ&quot;ג / ק&quot;ג / שעה נתרן pentobarbital. היה זהיר עם מינון יתר שכן הדבר עלול להפחית באופן משמעותי את לחץ הדם. Re-המינון של pentobarbital - גם לאחר שעות, יכולה להוביל לעלייה ברמות קשות פלזמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר אינדוקציה הרדמה, עכברים מאובטח במצב שכיבה עם הגפיים העליונות והתחתונות המצורפת השולחן באמצעות סרט דביק, תפר מהודק עד הקרסוליים. לעשות את אותו הדבר עבור הראש באמצעות השיניים. הרחקה מספיק חשוב אינטובציה מוצלחת ניתוח מבוקר היטב. לפני הניתוח, לכסות את העכבר עם שמן מינרלי כדי להפחית את הסיכון לאלרגיה שיער העכבר. על מנת להבטיח כי טמפרטורת הגוף נשאר יציב לכסות את העכברים עם לעטוף מזון זמינים מסחרית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המקום עכברים על השולחן בקרת טמפרטורה מחומם (RT, Effenberg, מינכן, גרמניה) עם בדיקה מדחום רקטלי המצורפת בקר משוב תרמי לשמירה על חום גופם על 37 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחשוף את קנה הנשימה בניתוח. לנתח הצדדים לרוחב הגב של קנה הנשימה של הרקמה החיבורית מקום שני 3.0 תפר משי כירורגית (הרווארד המנגנון, ארה&quot;ב) כל 10 ס&quot;מ מתחת לקנה הנשימה. התפרים צריך להיות כ 1 ס&quot;מ זו מזו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בזהירות לחתוך את הקנה 3-4 מ&quot;מ מתחת הגרון בין שני הסחוסים מעגלית באמצעות מקפרסון-Vannas מספריים (8 ס&quot;מ, להב ישר; Precision Instruments העולם, ארה&quot;ב). הקפד לא לגרום לדימום, שכן הדבר עלול לבלבל את הפרמטרים התוצאה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע אינטובציה לקנה הנשימה באמצעות פוליאתילן cannulae בוטה (Insyte 22g, Beckton דיקינסון, ארה&quot;ב). הכנס את קצה cannulae פוליאתילן בזווית של 85 מעלות לתוך קנה הנשימה. ואז להטות את cannulae כך עולה בקנה אחד עם לומן קנה הנשימה. לאט לאט לקדם את הצינור בהמשך קנה הנשימה עד קצה cannulae נעלם בתוך הפתח החזה. לקבע את הצינורית בתנוחה זו עם תפר שתי משי כירורגית להציב הגבי של קנה הנשימה (ראה 1.4). </li></ol> 2. טכניקה של פגיעה ההנשמה-Induced ריאות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חבר את צינור ההנשמה. כדי לגרום פגיעה ריאות אנו משתמשים בטכניקה נשלטת לחץ אוורור באמצעות C סרוו 900 מסימנס (DRE וטרינרית, ארה&quot;ב). בעלי חיים יהיה מאוורר באמצעות לחץ inspiratory שיא של 45 תדר, mbar של 80 נשימות / דקה לבין לחץ חיובי בסוף הנשיפה של 0-3 mbar עם FiO 2 = 1.0. ההשראה יחס תפוגה צריכים להיות 01:01. למרות העובדה כי ה-C סרוו 900 בנוי כמו מאוורר לבני אדם, השימוש בו הגדרה ההנשמה נשלט הלחץ עובד מצוין אוורור של עכברים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מוניטור קצב הלב עם א.ק.ג. (למשל Hewlett Packard, B blingen, גרמניה). ודא כי קצב הלב לא לרדת מתחת 400. אחד צריך לראות שינוי של ציר הלב בצד ימין, כאשר אוורור מכני הוא הנהיג כסימן גדל הלחצים בעורק הריאה בעקבות עלייה בלחץ intrathoracic. אם העכבר מפתח ברדיקרדיה, לבדוק את הטמפרטורה ואת המינון הרדמה / ריכוז. Xylacin / Ketamin הרדמה מעוררת בלב ליבו של 250 / דקה ולכן אינו מומלץ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החלת החלפת נוזלים תקין. עירוי תמיסת מלח רגיל עם 0.1 מ&quot;ל / שעה באמצעות קטטר עורקי או ורידי יש לבצע לפני אוורור כדי להבטיח הגשת ורידי מספיק. בשל הלחצים אוורור גבוהה החזרה ורידית ללב נפגעת, דבר שעשוי להוביל לירידה קריטית של לחץ עורקי ממוצע. כמו כן, בולוס מלוחים של μl 500 יכול להינתן ip לפני הניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המקום קטטר בעורק הראש עבור הקלטה רציפה של לחץ דם (27). צרף את הזרוע לגוף לפני שאתה מתחיל לנתח את העורק. עורק הצוואר חשוף דרך לנתיחה בוטה של ​​שרירי paratracheal. בעקבות חשיפת נוסף והימנעות קפדנית של טראומה כל רקמות (במיוחד של העצב מחנק), קטטר מוכנס לתוך הכלי באמצעות שני התפרים ואת מלחציים קטן (37). זה יחשוף עוד קטע של העורק. מניחים ליגטורה בסוף מאוד של עורק הצוואר. צרף מהדק גדול לסוף תפר כדי להשיג ה מתח או לקבעדואר תפר לשולחן באמצעות קלטת. מקום אחר תפר סביב העורק לנתח את העורק עד הסוף דיסטלי מאוד. כאן, במקום מהדק קטן. השתמש במספריים מיקרו לחתוך פתח אלכסוני קטן לתוך העורק. החזק את הפתיחה עם מלקחיים קנס (דומון, WPI) ולקדם את הקטטר בגודל תקין עם הידיים / מלקחיים. צור קשר עם תפר השני שלך ולהבטיח את העורק. שחרר את מהדק ולקדם את הקטטר יותר. Secure את הקטטר קשרים עם כמה קלטות. לחילופין את הקטטר העורק הראשי יכול להיות מקום בסוף הניסוי כדי לאסוף דגימות דם עורקי לניתוח גז דם. </li></ol> 3. שחזור של דגימות רקמה אחרי 3 שעות של אוורור מכני, נאספות דגימות כדי להעריך את מידת הפגיעה ריאות. אנו ממליצים על איסוף נוזל שטיפה brochnoalveolar (BAL), הדם בעורקים רקמת הריאה. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השג נוזל BAL בסוף הניסוי. לאחר העמקה של הרדמה, שטוף את צינור לקנה הנשימה עם פוספט 1 מ&quot;ל בופר סליין (PBS). הנוזל צריך להישאר קנה הנשימה / הריאות למשך שלוש שניות לפני זה הוא התאוששות באמצעות מזרק המחובר. BAL היא Snap-קפואים בחנקן נוזלי המאוחסן ב -80 ° C לניתוח נוסף. שים לב כי נפח התאושש יכול להיות משמעותית פחות מ&quot;ל 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע גז בדיקות דם בסוף הניסוי. כדי לעשות זאת, חתך צריכה להיעשות ממש מתחת לעצם החזה. החזק את החזה עם מלקחיים במידה חתך לאורך כלוב הצלעות. בשלב הבא, הסרעפת היא חרות בקצוות והוא לגזור מן הצלעות. עכשיו יש נוף פתוח לתוך הפתח התחתון של החזה. הרם את החזה עם מלקחיים ולפתוח את בית החזה על ידי חתכים ארוכים בצד ימין ושמאל (לרוחב ככל האפשר) כדי להשלים את קיר בית החזה הקדמי מופנה מעלה במחלקות. זה צריך להיעשות, בעוד בעלי החיים עדיין ניסיוני מאוורר מכאני. החדר השמאלי הוא ניקב באמצעות מחט 27 ½ G וניתוח דם עורקי מתבצע באמצעות מערכת i-STAT (אבוט, ארה&quot;ב). אם ניתוח עורקי גז דם יש לבצע, BAL לא ניתן להשיג, שכן זו תהיה confounder משמעותית את התוצאות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחילופין שיטה לעיל, דגימות דם עורקי ניתן לאסוף באמצעות קטטר העורק הראשי. אולם זה צריך להיעשות לפני BAL מתקבל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> והבלו הריאות en-הגוש ידי משיכת את לב לחתוך את קנה הנשימה. האם פיסת רקמה מוכנה לספוג דם, כך באתר כירורגית גלוי. משוך את הלב לכיוון הבטן לחתוך בזהירות לאורך עמוד השדרה לגייס את כל איברי החזה. חותכים את אבי העורקים, להסיר את איברי החזה ומניחים אותם על שולחן הניתוח נקיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחתוך את הלב ואת כלי מרכזי של המדגם רקמות. ודא כי אין כל רקמת בלוטת התימוס מחוברת עדיין הריאה. הפרד את הריאות עם מספריים ומניחים צינורות בודדים Snap-להקפיא. חנות ב -80 ° C לניתוח נוסף. </li></ol> 4. מדידה של פגיעה ריאות אנו ממליצים להשתמש בפרמטרים התוצאה הבאה כדי להעריך את מידת הפגיעה ריאות: ביצוע ELISA אלבומין (Bethyl מעבדות, ארה&quot;ב) ו myeloperoxidase (MPO) ELISA (Hycult ביוטכנולוגיה, ארה&quot;ב) כדי להעריך את מידת תפקוד מחסום וכמות דלקתיות תאים בנוזל BAL. בצע ELISA MPO גם בצורת רקמת הריאה. אם רטוב עד יבש יחס נמדדת איננו להשיג נוזל BAL ואת מחזור הדם הריאתי אינו סמוק (ראה 3.3). מדדו את המשקל של הריאות לאחר כריתה. ואז הריאות הם lyophilized עבור 48 שעות ו רקמת הריאות שוב נמדד. אז היחס רטוב אל היבשה, כפי שהיא נמדדת מ&quot;ג של מים לכל מיליגרם של רקמה יבשה (5). <img src="/files/ftp_upload/2525/2525fig1.jpg" alt="איור 1" /> באיור 1. התוכן חלבון BAL בתגובה וילי. עכברים היו מורדמים עם pentobarbital, אוורור מכני הונהג ועכברים היו מאוורר באמצעות לחץ שבשליטת הגדרות (לחץ inspiratory של 45 mbar, חיובי בסוף exspiratory לחץ mbar 3, 100% השראה ריכוז החמצן). לאחר 0, 1, 2 ו - 3 שעות של אוורור BAL היה לקצור את תכולת החלבון היה לכמת באמצעות assay חומצה bicinchoninic (assay BCA). השינוי היחסי של התוכן חלבון מוצג מנורמל ל -0 שעות של אוורור (n = 4 לכל קבוצה, * מציין p &lt;0.05 לעומת שליטה, ממוצע ± SEM)

<ol>
	<li>Eckle, T., Faigle, M., Grenz, A., Laucher, S., Thompson, L. F., Eltzschig, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A2B+adenosine+receptor+dampens+hypoxia-induced+vascular+leak.">A2B adenosine receptor dampens hypoxia-induced vascular leak.</a> Blood. 111, 2024-2035 (2008).</li><li>Eckle, T., Fullbier, L. G. r. e. n. z., A, ., Eltzschig, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Usefulness+of+pressure-controlled+ventilation+at+high+inspiratory+pressures+to+induce+acute+lung+injury+in+mice.">Usefulness of pressure-controlled ventilation at high inspiratory pressures to induce acute lung injury in mice.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 295, 718-724 (2008).</li><li>Eckle, T., Fullbier, L., Wehrmann, M., Khoury, J., Mittelbronn, M., Ibla, J., Rosenberger, P., Eltzschig, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+ectonucleotidases+CD39+and+CD73+in+innate+protection+during+acute+lung+injury.">Identification of ectonucleotidases CD39 and CD73 in innate protection during acute lung injury.</a> J Immunol. 178, 8127-8137 (2007).</li><li>Eckle, T., Grenz, A., Kohler, D., Redel, A., Falk, M., Rolauffs, B., Osswald, H., Kehl, F., Eltzschig, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systematic+evaluation+of+a+novel+model+for+cardiac+ischemic+preconditioning+in+mice.">Systematic evaluation of a novel model for cardiac ischemic preconditioning in mice.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. 291, 2533-2540 (2006).</li><li>Eckle, T., Grenz, A., Laucher, S., Eltzschig, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A2B+adenosine+receptor+signaling+attenuates+acute+lung+injury+by+enhancing+alveolar+fluid+clearance+in+mice.">A2B adenosine receptor signaling attenuates acute lung injury by enhancing alveolar fluid clearance in mice.</a> J Clin Invest. 118, 3301-3315 (2008).</li><li>Eckle, T., Krahn, T., Grenz, A., Kohler, D., Mittelbronn, M., Ledent, C., Jacobson, M. A., Osswald, H., Thompson, L. F., Unertl, K., Eltzschig, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardioprotection+by+ecto-5'-nucleotidase+(CD73)+and+A2B+adenosine+receptors.">Cardioprotection by ecto-5'-nucleotidase (CD73) and A2B adenosine receptors.</a> Circulation. 115, 1581-1590 (2007).</li><li>Eltzschig, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adenosine:+an+old+drug+newly+discovered.">Adenosine: an old drug newly discovered.</a> Anesthesiology. 111, 904-915 (2009).</li><li>Eltzschig, H. K., Eckle, T., Mager, A., Kuper, N., Karcher, C., Weissmuller, T., Boengler, K., Schulz, R., Robson, S. C., Colgan, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ATP+release+from+activated+neutrophils+occurs+via+connexin+43+and+modulates+adenosine-dependent+endothelial+cell+function.">ATP release from activated neutrophils occurs via connexin 43 and modulates adenosine-dependent endothelial cell function.</a> Circ Res. 99, 1100-1108 (2006).</li><li>Eltzschig, H. K., Ibla, J. C., Furuta, G. T., Leonard, M. O., Jacobson, K. A., Enjyoji, K., Robson, S. C., Colgan, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coordinated+adenine+nucleotide+phosphohydrolysis+and+nucleoside+signaling+in+posthypoxic+endothelium:+role+of+ectonucleotidases+and+adenosine+A2B+receptors.">Coordinated adenine nucleotide phosphohydrolysis and nucleoside signaling in posthypoxic endothelium: role of ectonucleotidases and adenosine A2B receptors.</a> J Exp Med. 198, 783-796 (2003).</li><li>Eltzschig, H. K., Kohler, D., Eckle, T., Kong, T., Robson, S. C., Colgan, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Central+role+of+Sp1-regulated+CD39+in+hypoxia/ischemia+protection.">Central role of Sp1-regulated CD39 in hypoxia/ischemia protection.</a> Blood. 113, 224-232 (2009).</li><li>Frick, J. S., MacManus, C. F., Scully, M., Glover, L. E., Eltzschig, H. K., Colgan, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contribution+of+adenosine+A2B+receptors+to+inflammatory+parameters+of+experimental+colitis.">Contribution of adenosine A2B receptors to inflammatory parameters of experimental colitis.</a> J Immunol. 182, 4957-4964 (2009).</li><li>Grenz, A., Eckle, T., Zhang, H., Huang, D. Y., Wehrmann, M., Kohle, C., Unertl, K., Osswald, H., Eltzschig, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+a+hanging-weight+system+for+isolated+renal+artery+occlusion+during+ischemic+preconditioning+in+mice.">Use of a hanging-weight system for isolated renal artery occlusion during ischemic preconditioning in mice.</a> Am J Physiol Renal Physiol. 292, 475-485 (2007).</li><li>Grenz, A., Osswald, H., Eckle, T., Yang, D., Zhang, H., Tran, Z. V., Klingel, K., Ravid, K., Eltzschig, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Reno-Vascular+A2B+Adenosine+Receptor+Protects+the+Kidney+from+Ischemia.">The Reno-Vascular A2B Adenosine Receptor Protects the Kidney from Ischemia.</a> PLoS Medicine. 5, e137-e137 (2008).</li><li>Grenz, A., Zhang, H., Eckle, T., Mittelbronn, M., Wehrmann, M., Kohle, C., Kloor, D., Thompson, L. F., Osswald, H., Eltzschig, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+role+of+ecto-5'-nucleotidase+(CD73)+in+renal+ischemia.">Protective role of ecto-5'-nucleotidase (CD73) in renal ischemia.</a> J Am Soc Nephrol. 18, 833-845 (2007).</li><li>Grenz, A., Zhang, H., Hermes, M., Eckle, T., Klingel, K., Huang, D. Y., Muller, C. E., Robson, S. C., Osswald, H., Eltzschig, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contribution+of+E-NTPDase1+(CD39)+to+renal+protection+from+ischemia-reperfusion+injury.">Contribution of E-NTPDase1 (CD39) to renal protection from ischemia-reperfusion injury.</a> FASEB J. 21, 2863-2873 (2007).</li><li>Grenz, A., Zhang, H., Weingart, J., von Wietersheim, S., Eckle, T., Schnermann, J. B., Kohle, C., Kloor, D., Gleiter, C. H., Vallon, V., Eltzschig, H. K., Osswald, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lack+of+effect+of+extracellular+adenosine+generation+and+signalling+on+renal+erythropoietin+secretion+during+hypoxia.">Lack of effect of extracellular adenosine generation and signalling on renal erythropoietin secretion during hypoxia.</a> Am J Physiol Renal Physiol. , (2007).</li><li>Haeberle, H. A., Durrstein, C., Rosenberger, P., Hosakote, Y. M., Kuhlicke, J., Kempf, V. A., Garofalo, R. P., Eltzschig, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxygen-independent+stabilization+of+hypoxia+inducible+factor+(HIF)-1+during+RSV+infection.">Oxygen-independent stabilization of hypoxia inducible factor (HIF)-1 during RSV infection.</a> PLoS ONE. 3, e3352-e3352 (2008).</li><li>Hart, M. L., Gorzolla, I. C., Schittenhelm, J., Robson, S. C., Eltzschig, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SP1-dependent+induction+of+CD39+facilitates+hepatic+ischemic+preconditioning.">SP1-dependent induction of CD39 facilitates hepatic ischemic preconditioning.</a> J Immunol. 184, 4017-4024 (2010).</li><li>Hart, M. L., Henn, M., Kohler, D., Kloor, D., Mittelbronn, M., Gorzolla, I. C., Stahl, G. L., Eltzschig, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+extracellular+nucleotide+phosphohydrolysis+in+intestinal+ischemia-reperfusion+injury.">Role of extracellular nucleotide phosphohydrolysis in intestinal ischemia-reperfusion injury.</a> FASEB J. 22, 2784-2797 (2008).</li><li>Hart, M. L., Jacobi, B., Schittenhelm, J., Henn, M., Eltzschig, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cutting+Edge:+A2B+Adenosine+receptor+signaling+provides+potent+protection+during+intestinal+ischemia/reperfusion+injury.">Cutting Edge: A2B Adenosine receptor signaling provides potent protection during intestinal ischemia/reperfusion injury.</a> J Immunol. 182, 3965-3968 (2009).</li><li>Hart, M. L., Kohler, D., Eckle, T., Kloor, D., Stahl, G. L., Eltzschig, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+treatment+of+mouse+or+human+blood+with+soluble+5'-nucleotidase+inhibits+platelet+aggregation.">Direct treatment of mouse or human blood with soluble 5'-nucleotidase inhibits platelet aggregation.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 28, 1477-1483 (2008).</li><li>Hart, M. L., Much, C., Gorzolla, I. C., Schittenhelm, J., Kloor, D., Stahl, G. L., Eltzschig, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+adenosine+production+by+ecto-5'-nucleotidase+protects+during+murine+hepatic+ischemic+preconditioning.">Extracellular adenosine production by ecto-5'-nucleotidase protects during murine hepatic ischemic preconditioning.</a> Gastroenterology. 135, 1739-1750 (2008).</li><li>Hart, M. L., Much, C., Kohler, D., Schittenhelm, J., Gorzolla, I. C., Stahl, G. L., Eltzschig, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+a+hanging-weight+system+for+liver+ischemic+preconditioning+in+mice.">Use of a hanging-weight system for liver ischemic preconditioning in mice.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 294, 1431-1440 (2008).</li><li>Hartmann, H., Eltzschig, H. K., Wurz, H., Hantke, K., Rakin, A., Yazdi, A. S., Matteoli, G., Bohn, E., Autenrieth, I. B., Karhausen, J., Neumann, D., Colgan, S. P., Kempf, V. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypoxia-independent+activation+of+HIF-1+by+enterobacteriaceae+and+their+siderophores.">Hypoxia-independent activation of HIF-1 by enterobacteriaceae and their siderophores.</a> Gastroenterology. 134, 756-767 (2008).</li><li>Heinzelmann, F., Jendrossek, V., Lauber, K., Nowak, K., Eldh, T., Boras, R., Handrick, R., Henkel, M., Martin, C., Uhlig, S., Kohler, D., Eltzschig, H. K., Wehrmann, M., Budach, W., Belka, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Irradiation-induced+pneumonitis+mediated+by+the+CD95/CD95-ligand+system.">Irradiation-induced pneumonitis mediated by the CD95/CD95-ligand system.</a> J Natl Cancer Inst. 98, 1248-1251 (2006).</li><li>Koeppen, M., Eckle, T., Eltzschig, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+deletion+of+the+A1+adenosine+receptor+abolishes+heart-rate+slowing+effects+of+intravascular+adenosine+in+vivo.">Selective deletion of the A1 adenosine receptor abolishes heart-rate slowing effects of intravascular adenosine in vivo.</a> PLoS One. 4, e6784-e6784 (2009).</li><li>Kohler, D., Eckle, T., Faigle, M., Grenz, A., Mittelbronn, M., Laucher, S., Hart, M. L., Robson, S. C., Muller, C. E., Eltzschig, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD39/ectonucleoside+triphosphate+diphosphohydrolase+1+provides+myocardial+protection+during+cardiac+ischemia/reperfusion+injury.">CD39/ectonucleoside triphosphate diphosphohydrolase 1 provides myocardial protection during cardiac ischemia/reperfusion injury.</a> Circulation. 116, 1784-1794 (2007).</li><li>Kuhlicke, J., Frick, J. S., Morote-Garcia, J. C., Rosenberger, P., Eltzschig, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypoxia+Inducible+Factor+(HIF)-1+Coordinates+Induction+of+Toll-Like+Receptors+TLR2+and+TLR6+during+Hypoxia.">Hypoxia Inducible Factor (HIF)-1 Coordinates Induction of Toll-Like Receptors TLR2 and TLR6 during Hypoxia.</a> PLoS ONE. 2, e1364-e1364 (2007).</li><li>Morote-Garcia, J. C., Rosenberger, P., Kuhlicke, J., Eltzschig, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HIF-1-dependent+repression+of+adenosine+kinase+attenuates+hypoxia-induced+vascular+leak.">HIF-1-dependent repression of adenosine kinase attenuates hypoxia-induced vascular leak.</a> Blood. 111, 5571-5580 (2008).</li><li>Morote-Garcia, J. C., Rosenberger, P., Nivillac, N. M., Coe, I. R., Eltzschig, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypoxia-inducible+factor-dependent+repression+of+equilibrative+nucleoside+transporter+2+attenuates+mucosal+inflammation+during+intestinal+hypoxia.">Hypoxia-inducible factor-dependent repression of equilibrative nucleoside transporter 2 attenuates mucosal inflammation during intestinal hypoxia.</a> Gastroenterology. 136, 607-618 (2009).</li><li>Reutershan, J., Vollmer, I., Stark, S., Wagner, R., Ngamsri, K. C., Eltzschig, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adenosine+and+inflammation:+CD39+and+CD73+are+critical+mediators+in+LPS-induced+PMN+trafficking+into+the+lungs.">Adenosine and inflammation: CD39 and CD73 are critical mediators in LPS-induced PMN trafficking into the lungs.</a> FASEB J. 23, 473-482 (2009).</li><li>Schingnitz, U., Hartmann, K., Macmanus, C. F., Eckle, T., Zug, S., Colgan, S. P., Eltzschig, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Signaling+through+the+A2B+adenosine+receptor+dampens+endotoxin-induced+acute+lung+injury.">Signaling through the A2B adenosine receptor dampens endotoxin-induced acute lung injury.</a> J Immunol. 184, 5271-5279 (2010).</li><li>Thompson, L. F., Eltzschig, H. K., Ibla, J. C., Van De Wiele, C. J., Resta, R., Morote-Garcia, J. C., Colgan, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crucial+role+for+ecto-5'-nucleotidase+(CD73)+in+vascular+leakage+during+hypoxia.">Crucial role for ecto-5'-nucleotidase (CD73) in vascular leakage during hypoxia.</a> J. Exp. Med. 200, 1395-1405 (2004).</li><li>Aherne, C. M., Kewley, E. M., Eltzschig, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+resurgence+of+A2B+adenosine+receptor+signaling.">The resurgence of A2B adenosine receptor signaling.</a> Biochim Biophys Acta. , (2010).</li><li>Eckle, T., Koeppen, M., Eltzschig, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+extracellular+adenosine+in+acute+lung+injury.">Role of extracellular adenosine in acute lung injury.</a> Physiology (Bethesda). 24, 298-306 (2009).</li><li>Koeppen, M., Feil, R., Siegl, D., Feil, S., Hofmann, F., Pohl, U., de Wit, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=cGMP-dependent+protein+kinase+mediates+NO-+but+not+acetylcholine-induced+dilations+in+resistance+vessels+in+vivo.">cGMP-dependent protein kinase mediates NO- but not acetylcholine-induced dilations in resistance vessels in vivo.</a> Hypertension. 44, 952-955 (2004).</li></ol>

המחקר הנוכחי מתאר טכניקה של ביצוע ההנשמה-Induced פגיעה ריאות בעכברים. מודל זה מדגים פגיעה לשעתקו מאוד בשל אוורור בלחץ גבוה. חוקרים הרואים בלימוד פציעה ריאות חריפה, בעכברים עשויים להפיק תועלת ממודל זה.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><th> שם מגיב </th><th> חברה </th><th> מספר קטלוגי </th><th> הערות (אופציונלי) </th></tr><tr><td> נתרן Pentobarbital (פלוס קטלניות) </td><td> Vortech Ls פרמצבטיות בע&quot;מ, </td><td> VPL 9372 </td><td> 4mg/mL ב מלוחים </td></tr><tr><td> Insyte 22 G </td><td> Beckton דיקינסון </td><td> n / a </td><td></td></tr><tr><td> תפר, משי 4.0 </td><td> הרווארד Apparatus </td><td> 517698 </td><td></td></tr><tr><td> תפר, Prolene 8.0 </td><td> Ethicon, ארה&quot;ב </td><td> M8739 </td><td> לשימוש חוזר </td></tr><tr><td> סימנס 900 ° C </td><td> DRE וטרינרית, ארה&quot;ב </td><td> # 336 </td><td> שיפוץ </td></tr><tr><td> מיקרוסקופ לנתח (SZX10) </td><td> אולימפוס </td><td> n / a </td><td> לשקול ומרחק עבודה נדיבה </td></tr><tr><td> חימום טבלה </td><td> RT, Effenberger, גרמניה </td><td> n / a </td><td> רק ספק אחד </td></tr><tr><td> לחץ דם במכשיר </td><td> Sense Cyber, Inc </td><td> BPM02 </td><td></td></tr><tr><td> אני STAT </td><td> אבוט </td><td> n / a </td><td></td></tr></tbody></table>

pressure controlled ventilation to induce acute lung injury in mice

מודלים Murine נמצאים בשימוש נרחב לחקור פציעות חריפה של מערכות ואיברים שונים (1-34). פציעה ריאות חריפה (עלי), אשר מתרחשת עם להנשמה מלאכותית ממושכת, תורמת התחלואה והתמותה של מחלה קריטית, מחקרים על מטרות גנטי או תרופתי הרומן הם אזורים של חקירה אינטנסיבית (1-3, 5, 8, 26, 30, 33 -36). ALI מוגדרת על ידי התפרצות חריפה של המחלה, אשר מוביל בצקת שאינם לב ריאתי ליקוי הבאות של ריאתי גז החליפין (36). פיתחנו מודל Murine של עלי באמצעות אוורור לחץ שבשליטת לגרום ההנשמה-Induced פגיעה ריאה (2). למטרה זו, עכברים C57BL / 6 מורדמים ו ההנשמה מתבצעת ואחריו אינדוקציה של עלי באמצעות אוורור מכני. עכברים הם מאוורר בקביעת הלחץ שבשליטת עם הלחץ inspiratory שיא של 45 mbar מעל 1 - 3 שעות. כפי פרמטרים התוצאה, בצקת ריאות (רטוב על יבש יחס), תוכן נוזל ברונכואלוואולרית אלבומין, נוזל ברונכואלוואולרית ותוכן ריאתי myeloperoxidase רקמות חילוף הגזים ריאתי מוערכים (2). באמצעות טכניקה זו נוכל להראות שזה מספיק גורם לדלקת ריאות חריפה יכולה להבחין בין קבוצות הטיפול השונות או גנוטיפים (1-3, 5). לכן טכניקה זו עשויה לסייע לחוקרים מי לרדוף המנגנונים המולקולריים המעורבים עלי באמצעות גישה גנטיות בעכברים עם מחיקת הגן במיקוד.

Watch this Scientific Journal Video about Pressure Controlled Ventilation to Induce Acute Lung Injury in Mice at JoVE.com

Pressure Controlled Ventilation to Induce Acute Lung Injury in Mice

מודל Murine לפגיעה ריאות הנגרמת ההנשמה הוא כלי חשוב ללמוד פציעה ריאות חריפה<em&gt; In vivo</em&gt;. כאן אנו מדווחים החלים קל<em&gt; באתרו</em&gt; מודל פציעה ריאות חריפה שימוש בלחץ גבוה להנשמה מלאכותית כדי לגרום לכישלון חריף של הריאה.

לחץ אוורור מבוקר כדי לגרום פגיעה ריאות חריפה על עכברים

Murine models are extensively used to investigate acute injuries of different organs systems (1-34). Acute lung injury (ALI), which occurs with prolonged ...

pressure-controlled-ventilation-to-induce-acute-lung-injury-in-mice

Research

JoVE Journal

Medicine

18.2K Views.  University of Colorado. מודל Murine לפגיעה ריאות הנגרמת ההנשמה הוא כלי חשוב ללמוד פציעה ריאות חריפה In vivo. כאן אנו מדווחים החלים קל באתרו מודל פציעה ריאות חריפה שימוש בלחץ גבוה להנשמה מלאכותית כדי לגרום לכישלון חריף של הריאה.

Video: Pressure Controlled Ventilation to Induce Acute Lung Injury in Mice

The CYP2D6 Animal Model: How to Induce Autoimmune Hepatitis in Mice

Autoimmune hepatitis is a rare but life threatening autoimmune disease of the liver of unknown etiology1,2. In the past many attempts have been made to generate an animal model that reflects the characteristics of the human disease 3-5. However, in various models the induction of disease was rather complex and often hepatitis was only transient3-5. Therefore, we have developed a straightforward mouse model that uses the major human autoantigen in type 2 autoimmune hepatitis (AIH-2), namely hCYP2D6, as a trigger6. Type 1 liver-kidney microsomal antibodies (LKM-1) antibodies recognizing hCYP2D6 are the hallmark of AIH-27,8. Delivery of hCYP2D6 into wildtype FVB or C57BL/6 mice was by an Adenovirus construct (Ad-2D6) that ensures a direct delivery of the triggering antigen to the liver. Thus, the ensuing local inflammation generates a fertile field9 for the subsequent development of autoimmunity. A combination of intravenous and intraperitoneal injection of Ad-2D6 is the most effective route to induce a long-lasting autoimmune damage to the liver (section 1). Here we provide a detailed protocol on how autoimmune liver disease is induced in the CYP2D6 model and how the different aspects of liver damage can be assessed. First, the serum levels of markers indicating hepatocyte destruction, such as aminotransferases, as well as the titers of hCYP2D6 antibodies are determined by sampling blood retroorbitaly (section 2). Second, the hCYP2D6-specific T cell response is characterized by collecting lymphocytes from the spleen and the liver. In order to obtain pure liver lymphocytes, the livers are perfused by PBS via the portal vein (section 3), digested in collagen and purified over a Percoll gradient (section 4). The frequency of hCYP2D6-specific T cells is analyzed by stimulation with hCYP2D6 peptides and identification of IFN&gamma;-producing cells by flow cytometry (section 5). Third, cellular infiltration and fibrosis is determined by immunohistochemistry of liver sections (section 6). Such analysis regimen has to be conducted at several times after initiation of the disease in order to prove the chronic nature of the model. The magnitude of the immune response characterized by the frequency and activity of hCYP2D6-specific T and/or B cells and the degree of the liver damage and fibrosis have to be assessed for a subsequent evaluation of possible treatments to prevent, delay or abrogate the autodestructive process of the liver.

Infection of mice with an Adenovirus expressing the major human autoantigen cytochrome P450 2D6 (hCYP2D6) recognized by sera of patients suffering from type 2 autoimmune hepatitis results in a persistent form of autoimmune-mediated liver disease characterized by extensive hepatitis, fibrosis and generation of a CYP2D6-specific immune response.

CYP2D6 מודל החיה: כיצד לגרום דלקת כבד אוטואימונית עכברים

Autoimmune hepatitis is a rare but life threatening autoimmune disease of the liver of unknown etiology1,2. In the past many attempts have been made to ...

Controlled Cervical Laceration Injury in Mice

Use of genetically modified mice enhances our understanding of molecular mechanisms underlying several neurological disorders such as a spinal cord injury (SCI). Freehand manual control used to produce a laceration model of SCI creates inconsistent injuries often associated with a crush or contusion component and, therefore, a novel technique was developed. Our model of cervical laceration SCI has resolved inherent difficulties with the freehand method by incorporating 1) cervical vertebral stabilization by vertebral facet fixation, 2) enhanced spinal cord exposure, and 3) creation of a reproducible laceration of the spinal cord using an oscillating blade with an accuracy of &plusmn;0.01 mm in depth without associated contusion. Compared to the standard methods of creating a SCI laceration such as freehand use of a scalpel or scissors, our method has produced a consistent lesion. This method is useful for studies on axonal regeneration of corticospinal, rubrospinal, and dorsal ascending tracts.

A novel technique to create a reproducible in vivo model of cervical spinal cord laceration injury in the mouse is described. This technique is based on spine stabilization by fixation of the cervical facets and laceration of the spinal cord using an oscillating blade with an accuracy of &plusmn;0.01 mm.

פגיעה קריעת צוואר הרחם מבוקרת בעכברים

Use of genetically modified mice enhances our  understanding of molecular mechanisms underlying several neurological disorders  such as a spinal cord ...

Ischemia-reperfusion Model of Acute Kidney Injury and Post Injury Fibrosis in Mice

Ischemia-reperfusion induced acute kidney injury (IR-AKI) is widely used as a model of AKI in mice, but results are often quite variable with high, often unreported mortality rates that may confound analyses. Bilateral renal pedicle clamping is commonly used to induce IR-AKI, but differences between effective clamp pressures and/or renal responses to ischemia between kidneys often lead to more variable results. In addition, shorter clamp times are known to induce more variable tubular injury, and while mice undergoing bilateral injury with longer clamp times develop more consistent tubular injury, they often die within the first 3 days after injury due to severe renal insufficiency. To improve post-injury survival and obtain more consistent and predictable results, we have developed two models of unilateral ischemia-reperfusion injury followed by contralateral nephrectomy. Both surgeries are performed using a dorsal approach, reducing surgical stress resulting from ventral laparotomy, commonly used for mouse IR-AKI surgeries. For induction of moderate injury BALB/c mice undergo unilateral clamping of the renal pedicle for 26 min and also undergo simultaneous contralateral nephrectomy. Using this approach, 50-60% of mice develop moderate AKI 24 hr after injury but 90-100% of mice survive. To induce more severe AKI, BALB/c mice undergo renal pedicle clamping for 30 min followed by contralateral nephrectomy 8 days after injury. This allows functional assessment of renal recovery after injury with 90-100% survival. Early post-injury tubular damage as well as post injury fibrosis are highly consistent using this model.

We describe models of moderate and severe ischemia-reperfusion-induced kidney injury in which the mice undergo unilateral renal pedicle clamping followed by simultaneous or delayed contralateral nephrectomy, respectively. These models consistently give rise to renal dysfunction and post-injury fibrosis, but injury severity and survival are dependent on mouse background, age and surgical equipment.

דגם איסכמיה reperfusion של פגיעה חריפה בכליות ופגיעים ההודעה פיברוזיס בעכברים

Ischemia-reperfusion induced acute kidney injury (IR-AKI) is widely used as a model of AKI in mice, but results are often quite variable with high, often ...

Controlled Cortical Impact Model for Traumatic Brain Injury

Every year over a million Americans suffer a traumatic brain injury (TBI). Combined with the incidence of TBIs worldwide, the physical, emotional, social, and economical effects are staggering. Therefore, further research into the effects of TBI and effective treatments is necessary. The controlled cortical impact (CCI) model induces traumatic brain injuries ranging from mild to severe. This method uses a rigid impactor to deliver mechanical energy to an intact dura exposed following a craniectomy. Impact is made under precise parameters at a set velocity to achieve a pre-determined deformation depth. Although other TBI models, such as weight drop and fluid percussion, exist, CCI is more accurate, easier to control, and most importantly, produces traumatic brain injuries similar to those seen in humans. However, no TBI model is currently able to reproduce pathological changes identical to those seen in human patients. The CCI model allows investigation into the short-term and long-term effects of TBI, such as neuronal death, memory deficits, and cerebral edema, as well as potential therapeutic treatments for TBI.

Traumatic brain injuries (TBIs) remain a serious health problem. Using the controlled cortical impact surgery model, research on the effects of TBI and possible treatment methods may be performed.

השפעת דגם קליפת המוח מבוקר לפגיעה מוחית טראומטית

Every year over a million Americans suffer a traumatic brain injury (TBI).  Combined with the incidence of TBIs worldwide, the physical, emotional, ...

Cardiac Catheterization in Mice to Measure the Pressure Volume Relationship: Investigating the Bowditch Effect

Animal models that mimic human cardiac disorders have been created to test potential therapeutic strategies. A key component to evaluating these strategies is to examine their effects on heart function. There are several techniques to measure in vivo cardiac mechanics (e.g., echocardiography, pressure/volume relations, etc.). Compared to echocardiography, real-time left ventricular (LV) pressure/volume analysis via catheterization is more precise and insightful in assessing LV function. Additionally, LV pressure/volume analysis provides the ability to instantaneously record changes during manipulations of contractility (e.g., &#946;-adrenergic stimulation) and pathological insults (e.g., ischemia/reperfusion injury). In addition to the maximum (+dP/dt) and minimum (-dP/dt) rate of pressure change in the LV, an accurate assessment of LV function via several load-independent indexes (e.g., end systolic pressure volume relationship and preload recruitable stroke work) can be attained. Heart rate has a significant effect on LV contractility such that an increase in the heart rate is the primary mechanism to increase cardiac output (i.e., Bowditch effect). Thus, when comparing hemodynamics between experimental groups, it is necessary to have similar heart rates. Furthermore, a hallmark of many cardiomyopathy models is a decrease in contractile reserve (i.e., decreased Bowditch effect). Consequently, vital information can be obtained by determining the effects of increasing heart rate on contractility. Our and others data has demonstrated that the neuronal nitric oxide synthase (NOS1) knockout mouse has decreased contractility. Here we describe the procedure of measuring LV pressure/volume with increasing heart rates using the NOS1 knockout mouse model.

This article describes the measurement of murine left ventricular function via pressure/volume analysis at different heart rates.

צנתור לב בעכברים כדי למדוד את יחסי נפח לחץ: חקירת אפקט Bowditch

Animal models that mimic human cardiac disorders have been created to test potential therapeutic strategies. A key component to evaluating these ...

Open Tracheostomy Gastric Acid Aspiration Murine Model of Acute Lung Injury Results in Maximal Acute Nonlethal Lung Injury

Acid pneumonitis is a major cause of sterile acute lung injury (ALI) in humans. Acid pneumonitis spans the clinical spectrum from asymptomatic to acute respiratory distress syndrome (ARDS), characterized by neutrophilic alveolitis, and injury to both alveolar epithelium and vascular endothelium. Clinically, ARDS is defined by acute onset of hypoxemia, bilateral patchy pulmonary infiltrates and non-cardiogenic pulmonary edema. Human studies have provided us with valuable information about the physiological and inflammatory changes in the lung caused by ARDS, which has led to various hypotheses about the underling mechanisms. Unfortunately, difficulties determining the etiology of ARDS, as well as a wide range of pathophysiology have resulted in a lack of critical information that could be useful in developing therapeutic strategies.
Translational animal models are valuable when their pathogenesis and pathophysiology accurately reproduce a concept proven in both in vitro and clinical settings. Although large animal models (e.g., sheep) share characteristics of the anatomy of human trachea-bronchial tree, murine models provide a host of other advantages including: low cost; short reproductive cycle lending itself to greater data acquisition; a well understood immunologic system; and a well characterized genome leading to the availability of a variety of gene deletion and transgenic strains. A robust model of low pH induced ARDS requires a murine ALI that targets mainly the alveolar epithelium, secondarily the vascular endothelium, as well as the small airways leading to the alveoli. Furthermore, a reproducible injury with wide differences between different injurious and non-injurious insults is important.
The murine gastric acid aspiration model presented here using hydrochloric acid employs an open tracheostomy and recreates a pathogenic scenario that reproduces the low pH pneumonitis injury in humans. Additionally, this model can be used to examine interaction of a low pH insult with other pulmonary injurious entities (e.g., food particles, pathogenic bacteria).

This protocol induces acute lung injury in a mouse that has close fidelity to the pathogenesis of acid pneumonitis observed in humans. We generate a maximal acute nonlethal low pH lung injury and account for differences in rodent-human anatomic respiratory structure using an open tracheostomy coupled with circumferential pressure release.

להרחיב הנשמת קיבת חומצה שאיפת Murine הדגם של פגיעה החריפה ריאות תוצאות ב מקסימלי חריפה קטלנית פגיעת ריאות

Acid pneumonitis is a major cause of sterile acute lung injury (ALI) in humans. Acid pneumonitis spans the clinical spectrum from asymptomatic to acute ...

Balloon-based Injury to Induce Myointimal Hyperplasia in the Mouse Abdominal Aorta

The use of animal models is essential for a better understanding of MH, one major cause for arterial stenosis.In this article, we demonstrate a murine balloon denudation model, which is comparable with established vessel injury models in large animals. The aorta denudation model with balloon catheters mimics the clinical setting and leads to comparable pathobiological and physiological changes. Briefly, after performing a horizontal incision in the aorta abdominalis, a balloon catheter will be inserted into the vessel, inflated, and introduced retrogradely. Inflation of the balloon will lead to intima injury and overdistension of the vessel. After removing the catheter, the aortic incision will be closed with single stiches. The model shown in this article is reproducible, easy to perform, and can be established quickly and reliably. It is especially suitable for evaluating expensive experimental therapeutic agents, which can be applied in an economical fashion. By using different knockout-mouse strains, the impact of different genes on MH development can be assessed.

This article demonstrates a murine model to study the development of myointimal hyperplasia (MH) after aortic balloon injury.

מבוסס על בלון פציעה לזירוז היפרפלזיה Myointimal באבי העורקים בטן העכבר

The use of animal models is essential for a better understanding of MH, one major cause for arterial stenosis.In this article, we demonstrate a murine ...

A Closed-chest Model to Induce Transverse Aortic Constriction in Mice

Research on cardiac hypertrophy and heart failure is frequently based on pressure overload mouse models induced by TAC. The standard procedure is to perform a partial thoracotomy to visualize the transverse aortic arch. However, the surgical trauma caused by the thoracotomy in open-chest models changes the respiratory physiology as the ribs are dissected and left unattached after chest closure. To prevent this, we established a minimally invasive, closed chest approach via lateral thoracotomy. Herein we approach the aortic arch via the 2nd intercostal space without entering the chest cavities, leaving the mouse with a less traumatic injury to recover from. We perform this operation using standard laboratory settings for open chest TAC procedures with equal survival rates. Apart from maintaining physiological breathing patterns due to the closed chest approach, the mice seem to benefit by showing rapid recovery, as the less invasive technique appears to facilitate a fast healing process and to reduce immune response after trauma.

Here, we present a protocol of Transverse Aortic constriction (TAC) via a lateral thoracotomy. This technique is a minimally invasive, closed chest surgical procedure aiming to simulate pressure overload and heart failure in mice utilizing standard TAC laboratory settings.

דגם סגור-החזה לזירוז רוחבי. התרחבות אבי העורקים בעכברים

Research on cardiac hypertrophy and heart failure is frequently based on pressure overload mouse models induced by TAC. The standard procedure is to ...

Real-time Pressure-volume Analysis of Acute Myocardial Infarction in Mice

Acute myocardial infarction can lead to acute heart failure and cardiogenic shock. The evaluation of hemodynamics is critical for the evaluation of any potential therapeutic approach directed against acute left ventricular (LV) dysfunction. Current imaging modalities (e.g., echocardiography and magnetic resonance imaging) have several limitations since data on LV pressure cannot directly be measured. LV catheterization in mice undergoing coronary artery occlusion could serve as a novel method for a real-time evaluation of LV function.
At the beginning of the procedure, mice were anesthetized followed by endotracheal intubation. For LV catheterization, the right carotid artery was exposed via middle-neck incision. The catheter was introduced and placed into the LV cavity. Left thoracotomy was conducted and the left main coronary artery (LCA) was ligated. To induce reperfusion, the suture was released after 45 min. Pressure-volume data was recorded at all times.
Ligation of the LCA caused a decrease in LV systolic function as evidenced by a 30% reduction in stroke volume, LV ejection fraction (EF), and cardiac output. Maximum dP/dt as a parameter for LV contractility was also significantly reduced and diastolic function was severely impaired (minimum dP/dt -40%). Reperfusion over a period of 20 min did not lead to a complete recovery of LV function.
Real-time pressure-volume analysis served as a valid procedure for monitoring cardiac function during acute myocardial infarction in mice. Maintaining stable anesthesia and a standardized surgical approach was crucial to ensure valid results. As the early phase of acute myocardial infarction is critical for morbidity and mortality, the delineated method could be beneficial for preclinical evaluation of new strategies for cardioprotection.

Acute myocardial infarction in mice induces acute but incompletely characterized changes in left ventricular (LV) function. LV catheterization in mice undergoing coronary artery occlusion serves as a novel method for a real-time evaluation of LV function.

ניתוח בזמן אמת לחץ-נפח של אוטם אקוטי בעכברים

Acute myocardial infarction can lead to acute heart failure and cardiogenic shock. The evaluation of hemodynamics is critical for the evaluation of any ...

Lung Fixation under Constant Pressure for Evaluation of Emphysema in Mice

Emphysema is a significant feature of chronic obstructive pulmonary disease (COPD). Studies involving an emphysematous mouse model require optimal lung fixation to produce reliable histological specimens of the lung. Due to the nature of the lung&rsquo;s structural composition, which consists largely of air and tissue, there is a risk that it collapses or deflates during the fixation process. Various lung fixation methods exist, each of which has its own advantages and disadvantages. The lung fixation method presented here utilizes constant pressure to enable optimal tissue evaluation for studies using an emphysematous mouse lung model. The main advantage is that it can fix many lungs with the same condition at one time. Lung specimens are obtained from chronic cigarette smoke-exposed mice. Lung fixation is performed using specialized equipment that enables the production of constant pressure. This constant pressure maintains the lung in a reasonably inflated state. Thus, this method generates a histological specimen of the lung that is suitable to evaluate cigarette smoke-induced mild emphysema.

Presented here is a useful protocol for lung fixation that creates a stable condition for histological evaluate of lung specimens from a mouse model of emphysema. The main advantage of this model is that it can fix many lungs with the same constant pressure without lung collapse or deflation.

קיבעון ריאה תחת לחץ מתמיד על הערכה של אמפיזמה בעכברים

Emphysema is a significant feature of chronic obstructive pulmonary disease (COPD). Studies involving an emphysematous mouse model require optimal lung ...