עבודה זו נתמכה על ידי מכוני הבריאות הלאומיים (R01 AR061164-01A1).

כל ההליכים ניסיוני אושרו על ידי טיפול בעלי חיים מוסדיים ועל שימוש הוועדה-מכון המחקר מיין מרכז רפואי.
1. אוסף מנורות הכנה
<ol><li>להפוך את המדיה תרבות BMSC על ידי שכשהם בינוני חיוני מינימום α (MEM α) עם 10% סרום שור בעובר ו 1% של פניצילין/סטרפטומיצין.</li>
	<li>מקום µL 100 BMSC תרבות המדיה 1.5 mL microcentrifuge צינורות. 3 עצמות יתאימו בדרך כלל באחד צינור בודד אז התכוננו בהתאם.</li>
	<li>חותכים את הקצוות של 200 µL פיפטה טיפים מספיק כדי שיתאימו את החצוצרות שלה צנטריפוגה. הוסף את הטיפים בתוך הצינורות ולהבטיח כי המכסים יכולים לסגור לפני הנחת הצינורות על קרח. הערה: לחלופין, 0.75 מ ל צינורות microcentrifuge עם קצוות החתך יכול להיות מוכנס לתוך הצינור microcentrifuge 1.5 mL.</li>
</ol>2. הקציר של עצמות של עכברים
<ol><li>המתת חסד החיות באמצעות CO2 ואחריו נקע בצוואר הרחם, לרסס אותם עם 70% אתנול. הערה: ודא כי משמשים בעלי חיים מאותו המין, רצוי באותו הגיל. אנו משתמשים באופן שגרתי חיות בגילאי 7-8 שבועות. אנו ממליצים באגירת תאים בעלי חיים לפחות 3 לכל קבוצות ניסיוני להניב אוכלוסיה תא נציג, לשחזור טוב יותר.</li>
	<li>
הנח את העכבר לאללה על גבו על קרש החיתוך. נורא. להשתמש מלקחיים ליצירת אוהל של העור על הבטן. עושים חתך קטן (בערך 1 ס מ) בעזרת מספריים ויבתר סטרילי. לקלף העור לעבר הגפיים ואת כפות הרגליים של החתך כדי לחשוף את הבטן התחתונה ואת הרגליים.
	<ol>
<li>לחתוך מתחת לקרסול משותפת כדי להסיר את כף הרגל. חתך לאורך האגן-הירך. כדי להפריד את הראש של עצם הירך עצם הכסל. בעוד העכבר הוא עדיין על גבו, לעשות חתך באמצע עצם הכסל כדי להפריד בין שתי העצמות iliac.</li>
	</ol>
</li>
	<li>באמצעות מגבונים ללא מוך, הסר בזהירות את השריר מן עצמות הירך, tibias, ו- iliac עצמות. הערה: חיתוך באותה מידה של גידים, שרירים מן העצם כמו גורם אפשרי הניקוי למהירה וקלה עם המחיקות נטולת מוך (למשל, kimwipes). פעל בזהירות בעת הדחת את העצמות כפי שהם נוטים לשבור בקלות, ניתן להגדיל את השבריריות שלהם עם אחרים מסוימים.</li>
	<li>ברגע שיש כבר גזור כל הדגימות, למקם אותם ב- PBS בקרח ולהעביר אל ברדס תרבות סטרילי עבור השלבים הנותרים של בידוד. הערה: עובד גילוח ורחיצה כירורגית ככל האפשר יקטין את פוטנציאל זיהום בתרבויות.</li>
	<li>לבצע חתכים קטנים (כ 1-2 מ"מ) בשני קצותיו לקרע, העצמות לפני הכנסתם הטיפים משרטוטי בתוך הצינורות צנטריפוגה. הערה: ודא לחתוך מספיקה כך מח יכול להיות centrifuged עם זאת, יש לנקוט כדי למנוע חיתוך מדי כמו תא אוכלוסיות נוטים להשתנות בהתבסס על הקרבה בתוך החלל מח.</li>
	<li>צנטריפוגה ב 10,000 x g 15 s בטמפרטורת החדר. ודא כי כל לשד סמוקות, מגורען בחלק התחתון של צינור 1.5 mL אמנם העצמות בתוך השרוול (גם 200 µL pipet עצה או 0.75 מ ל microcentrifuge tube). לאחר כל לשד נאסף, הסר את הכיסויים עם העצמות הצינורות אוסף. הערה: אם כל לשד התרוקן, העצמות יופיעו לבן. עם זאת, אם מח נותר בעצמות מסוימות, חיתוך הקצוות שוב ולנסות צנטריפוגה.</li>
</ol>3. תא השעיה
<ol><li>באמצעות מחט 25 גרם, למשוך התא. גללים למעלה ולמטה לאט לשבור את הגושים, לשלב את כל הדגימות לתוך צינור חרוטי בודד 15 מ"ל. להוסיף 10 מ של BMSC תרבות המדיה לכל µL 500 דוגמאות.</li>
	<li>מקום מסנן מיקרומטר 70 על גבי צינור חרוטי 50 מ ל, עוברים התליה תא במסנן זה כדי להסיר את שברי העצם אפשרי.</li>
</ol>4. ציפוי והתרבות של אוכלוסיות מעורבות של תאים במח העצם (כולל BMCs)
הערה: תאים מתורבתים ב 37 מעלות צלזיוס בתוך אינקובטור עם 5% CO2.
<ol><li>לחשב את מספר התאים, צלחת אותם ב- 1.0 x 10 תאים/ס מ6 2 בתקשורת תרבות. לאפשר 72 h של מעורב תרבות עבור תאים לצרף. הערה: אנו ממליצים דילול תא ההשעיה x 20 תרבות בתקשורת ודילול שוב ב- trypan כחול לפני ספירת התאים באמצעות hemocytometer. עבור עכברים C57Bl6/J זכר בן שבוע 7, אנחנו באופן שגרתי תשואות מספר התא בסביבות 50 x 106 תאים אבל גיל, מין ו זן יכול להשפיע על מספר הטלפון הנייד באופן משמעותי. הערה: אוכלוסיה מיקס של תאים צריך לצרף בחלק התחתון של התרבות היטב.</li>
	<li>לאחר 72 h, מסיר את המדיה ולהחליף אותו עם מדיה טריים. להמשיך לשנות את המדיה כל יום, בדוק אם confluency אחרים. כאשר התאים מגיעים 80-100% confluency, הם מוכנים בידול. הערה: כי תרבות זו הוא מעורב עם BMSCs וגם HSCs, זה יכול ישירות לשמש osteoblastogenesis, adipogenesis, כמו גם osteoclastogenesis.</li>
</ol>5. ציפוי והתרבות של האוכלוסייה פיצול של BMSCs (BMSCs חסיד)
הערה: תאים מתורבתים ב 37 מעלות צלזיוס בתוך אינקובטור עם 5% CO2.
<ol><li>צלחת כל התאים שנאספו מן עצמות הירך, tibias, עצמות iliac עכבר אחד לתוך תבשיל תרבות 10 ס מ (55 ס מ2 של תרבות). הערה: בעת צירוף 2-3 C57BL/6J עכברים, אנחנו צלחת בדרך כלל אוכלוסייה זו 'סה כ' מח עצם בבקבוקון2 150 ס"מ.</li>
	<li>לאחר 48 שעות של תרבות מעורבת, מסיר את המדיה תרבות (המכיל את הלא-מחסידי HSCs). אם osteoclastogenesis ניסויים שיש לבצע, להגדיר את אוכלוסיית תאים שאינם מחסידי הצידה (ראו סעיף 7), אם לא, וביופסיה ולמחוק את התאים האלה.</li>
	<li>לשטוף את הבקבוק/הצלחת עם PBS בזהירות כדי לא להפריע את התאים המצורפת.</li>
	<li>הסר PBS והרם את התאים על ידי הוספת 0.25% טריפסין המקננת ב 37 מעלות צלזיוס במשך 1-3 מינימלית כבאות טריפסין על-ידי הוספת מדיה תא התליה תא. בשלב זה, BMSCs, אשר מוסרות כעת, ניתן לספור (שלב קודם לכן בוצע ב 4.1) מצופה לניסויים עתידיים.</li>
	<li>לחשב את מספר התאים הדרושים עבור ציפוי. Centrifuge הנפח הנדרש של תא ההשעיה-1000 g x עבור 5 דקות בטמפרטורת החדר. הערה: תאים הם בדרך כלל מצופה בהתבסס על ניסויים מובילים. לדוגמה, אם חלבון/רנ א היא להיות מבודד אנחנו בדרך כלל לוחית רישוי-צפיפות גבוהה יותר (~1.0-2.0 x 106 תאים/טוב בצלחת. ובכן 6).</li>
	<li>הסר את המדיה, resuspend בגדר תא בהיקף של תרבות התקשורת לצורך ציפוי. צלחת התאים בתקשורת תרבות על פי הניסויים ולאפשר להם לצרף לכמה ימים. כאשר BMSCs מגיעים confluency, להמשיך לבצע בידול.</li>
</ol>6. הבידול של BMSCs
<ol><li>
תאי העצם
	<ol>
<li>לבצע אוסטאובלסט בידול מדיה על-ידי הוספת µL 800 של 1 מ' β-גליצרול פוספט PBS ו 200 µL של 0.5 M חומצה אסקורבית ב- PBS 99 מ של BMSC תרבות המדיה (ראה צעד 1.1 ההרכב של התקשורת התרבות BMSC).<ol>
<li>לאחר BMSCs תרבויות (סה כ BMCs מ שלב 4.3) או מחסידי BMSCs מהשלב 5.6 confluent, להבדיל אותם לתוך תאי העצם על ידי מיתוג התקשורת תרבות אוסטאובלסט בידול מדיה.</li>
		</ol>
</li>
		<li>החלף את המדיה בידול בכל יום אחר. התאים להתחיל בהפקת גושים לבנים של מינרליזציה. דמיינו אותם בעין בלתי מזוינת בתחתית הבאר; תהליך זה יכול להתרחש תוך מספר ימים עד שלושה שבועות.<ol>
<li>על מנת להעריך osteoblastogenesis, לבצע צביעת phosphatase אלקליין ו/או פון Kossa מכתים בכל הנוגע לבארות כמתואר בסעיף 8. הערה: לשנות את התקשורת בקפידה על-ידי הטיית הלוחות בזווית קלה על מנת למנוע שיבוש טפט תא.</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Adipocytes
	<ol>
<li>הפוך מדיה הבסיס adipocyte על ידי ערבוב יחד 90 מ"ל של גלוקוז גבוהה Dulbecco ששינה נשר בינוני (DMEM), 10 מ של העובר סרום שור, 1 מ"ל של פניצילין/סטרפטומיצין, 100 µL 20 מ מ רוזיגליטזון 100 µL של 2 מ מ אינסולין. אם יש צורך, לאחסן מדיה זו ב 4 מעלות צלזיוס במשך השבוע במהלך הניסוי בידול.</li>
		<li>להפוך את המדיה אינדוקציה adipocyte על-ידי הוספת µL 200 של 62.5 מ מ 3-איזובוטיל-1-methylxanthine (IBMX), µL 25 של 1 מ מ דקסמתזון 25 מ של Adipocyte בסיס מדיה.</li>
		<li>לאחר BMSCs תרבויות (סה כ BMCs מ שלב 4.3) או מחסידי BMSCs מהשלב 5.6 confluent, לשנות את המדיה מדיה אינדוקציה adipocyte. שקול את? היום הזה 0 של בידול.</li>
		<li>לאחר 48 שעות, מסיר את המדיה ולרענן את התרבות עם מדיה אינדוקציה adipocyte.</li>
		<li>ביום הרביעי, לעבור מדיה הבסיס adipocyte. הערה: טיפות השומנים יכול להתחיל להופיע מוקדם ככל יום 2 או 4 ביום.</li>
		<li>יום 7, להתבונן כי תאים הצטברו טיפות השומנים המרבי ולהציג את הפנוטיפ דומה adipocyte בוגר. לא תרבות מעבר לנקודה הזאת, זה עלול לגרום לתא המוות/ניתוק.</li>
	</ol>
</li>
</ol>7. הבידול של HSCs לתוך Osteoclasts
<ol><li>להפוך אוסטאוקלסט בידול מדיה על-ידי הוספת µL 50 µg 25/mL של קולטן Activator של NFKB ליגנד (רנקל) ו 15 µL של µg/mL 25 של מקרופאג גורם מגרה המושבה (mCSF) 25 מ של BMSC תרבות המדיה.</li>
	<li>ברגע של BMCs הכולל (מתוך שלב 4.3) או את התאים שאינם מחסידי (מתוך שלב 5.2) מחוברים היטב, ניתן להחזירו תרבות המדיה אוסטאוקלסט בידול מדיה. לחדש בידול מדיה בכל יום אחר.</li>
	<li>להתבונן התרבויות אוסטאוקלסט כל יום תחת מיקרוסקופ בהגדלה X 10. שים לב כי osteoclasts נתיך ויוצרים תאים multinucleated, בדרך כלל סביב יום 5-7 של בידול.</li>
</ol>8. מכתים
<ol><li>
תאי העצם הערה: אלקליין פוספטאז (AP) ההכתמה, אנחנו לעתים קרובות להשתמש AP צביעת קיט (ראה טבלה של חומרים) על פי ההנחיות.<ol>
<li>לבצע AP צביעת על-ידי ביצוע ההנחיות של ערכת היצרן.<ol>
<li>האחות מדיה ולשטוף תאים עם PBS. לתקן את התאים עם 4% Paraformaldehyde (PFA) ב- PBS במשך 12 דקות בטמפרטורת החדר.</li>
			<li>בינתיים, להפוך את הפתרון AP באמצעות של ריאגנטים מנקודת הגישה מכתים הערכה על-ידי הוספת 500 µL נתרן חנקיתי כדי פתרון FRV-אלקליין 500 µL ולערבב בעדינות; משהים 2 דק להוסיף 22.5 מ ל dH2O ו- 500 µL Naphthol AS-BI אלקליין. מערבבים בעדינות. התראה: PFA הוא רעיל, יש לטפל בזהירות.</li>
			<li>ברגע התאים קבועים, לשטוף עם PBS ולהוסיף AP פתרון מכל קידוח (1-2 מ לכל טוב). מכסים בנייר כסף ומכניסים הכתם לתת למשך 30 דקות בטמפרטורת החדר מוגן מפני אור. וארוקן את הפתרון, לשטוף עם מים מזוקקים, ולאפשר את הצלחת לייבש.</li>
		</ol>
</li>
		<li>לרכוש תמונות של המושבות מוכתם בעזרת מצלמה על מנת לצפות תאים חיוביים phosphatase אלקליין.</li>
		<li>לחלופין, לבצע פון Kossa במקום phosphatase אלקליין מכתים. בשביל זה, בארות לשטוף ביסודיות עם מים מזוקקים כמו כל PBS הנותרים לזרז עם חנקת הכסף.
		<ol>
<li>לתקן את התאים עם 4% מחברים ב- PBS במשך 12 דקות בטמפרטורת החדר. לאחר מכן, להוסיף 5% מספיק כסף חנקתי לפתרון מכסה הבאר, לחשוף בפני אור חזק לשעה בטמפרטורת החדר.</li>
		</ol>
</li>
		<li>להסיר את חנקת ולשטוף כל טוב עם מים מזוקקים. להוסיף 5% נתרן תיוסולפט פתרון לתאים, משהים 3 דקות.</li>
		<li>האחות של נתרן תיוסולפט, לשטוף עם מים מזוקקים. תן את הצלחת לייבש ולבחון את הפיקדון מינרלים צבעונית בחום כהה/שחור בעין בלתי מזוינת.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Adipocytes
	<ol>
<li>עבור צביעת שמן אדום O (אורו), לתקן את התאים באמצעות 10% נייטרלי Buffered פורמלין לשעה בטמפרטורת החדר.</li>
		<li>בינתיים, להפוך את הפתרון מניות אורו על ידי המסת 0.035 g ב- 10 מ"ל של אלכוהול איזופרופיל. . זה מספיק בשביל צלחת 6-. טוב. לערבב ולהעביר את הפתרון באמצעות נייר סינון אחד (נקבוביות בגודל 11 מיקרומטר).</li>
		<li>הפוך את הפתרון עובד אורו על ידי דילול 9 מ של פתרון מניות אורו, עם 6 מ של מים מזוקקים. לעזוב את הפתרון על כיסא נדנדה עד מוכן לשימוש.</li>
		<li>להכין 60% אלכוהול איזופרופיל במים מזוקקים (מרוויח מספיק כדי לכסות את כל טוב).</li>
		<li>לאחר התאים קבועים, להסיר את פעם אחת לשבועיים, תשטוף עם מים מזוקקים. להחליף את המים עם הפתרון אלכוהול איזופרופיל 60% 1 דקות. הערה: להוסיף נוזלים באיטיות תוך המפנה את הצלחת; adipocytes מכך בקלות רבה.</li>
		<li>להסיר את אלכוהול איזופרופיל ולהוסיף פתרון עובד מספיק אורו כדי לכסות את כל התאים. תקופת דגירה של 15 דקות על כיסא נדנדה במהירות נמוכה בטמפרטורת החדר. להסיר את אורו, לשטוף פעמיים עם מים מזוקקים. הערה: בשלב זה, השומנים שהוכתמו אורו טיפות ניתן לאבחן מתחת למיקרוסקופ.</li>
		<li>כדי לכמת את אורו, destain את אורו על-ידי הוספת 1 מ"ל של 100% אלכוהול איזופרופיל כל טוב ועל ידי מתנדנד באיטיות במשך 10 דקות.</li>
		<li>בינתיים, להכין סדרה דילול ליצירת עיקול רגיל המבוסס על תקני 8 הבאים באמצעות פתרון עובד אורו (2,100 µg/mL), אלכוהול איזופרופיל כמו diluent: 500, 350, 300, 250, 150, 100, 75 ו 0 µg/mL.</li>
		<li>לטעון µL 200 של הסטנדרטים ודוגמאות destained ב triplicates בצלחת ולקרוא את ספיגת 490 nm.<ol>
<li>לקבוע ריכוז של אורו עבור כל דגימה בהתבסס על העקומה סטנדרטי. הערה: מומלץ נרמול הריכוז אורו אל מספר הטלפון הנייד. ניתן לכמת את המספר על ידי קריסטל ויולט להכתים או כמות ה-DNA.</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Osteoclasts הערה: כשאתה מוכן, אנו מציעים מכתים osteoclasts עבור שימוש ההכתמה מלכודת פוספטאז חומצה Tartrate עמידים (השמנה) קיט (ראה טבלה של חומרים).<ol>
<li>על מלכודת מכתים, לתקן תאים למשך 30 דקות בטמפרטורת החדר עם גלוטראלדהיד 2.5% ב- PBS. בינתיים, להפוך את הפתרון מלכודת על ידי ערבוב יחדיו. µL 50 בפתרון מהיר נופך בסיס, 50 µL של נתרן חנקיתי, 4.55 מ ל מים מזוקקים, µL 50 Napthol AS-Biphosphate, µL 200 של אצטט פתרון, פתרון Tartrate µL 100.</li>
		<li>האחות הנחה לשבועיים, ולשטוף את התאים עם PBS פעמיים לפני הוספת פתרון מלכודת 1 h ב- 37 מעלות צלזיוס.</li>
		<li>לשטוף עם מים מזוקקים לפני שספר osteoclasts תחת מיקרוסקופ (הגדלה 10 X). התאים מלכודת+ מופיעים סגול עם 3 או יותר גרעינים.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol>
	<li>Friedenstein, A. J., Latzinik, N. W., Grosheva, A. G., Gorskaya, U. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Marrow+microenvironment+transfer+by+heterotopic+transplantation+of+freshly+isolated+and+cultured+cells+in+porous+sponges.">Marrow microenvironment transfer by heterotopic transplantation of freshly isolated and cultured cells in porous sponges.</a> Exp Hematol. 10 (2), 217-227 (1982).</li><li>Chen, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+growth+and+differentiation+of+osteoprogenitors+in+mouse+bone+marrow+stromal+cell+cultures+by+increased+donor+age+and+glucocorticoid+treatment.">Inhibition of growth and differentiation of osteoprogenitors in mouse bone marrow stromal cell cultures by increased donor age and glucocorticoid treatment.</a> Bone. 35 (1), 83-95 (2004).</li><li>Kokabu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=BMP3+suppresses+osteoblast+differentiation+of+bone+marrow+stromal+cells+via+interaction+with+Acvr2b.">BMP3 suppresses osteoblast differentiation of bone marrow stromal cells via interaction with Acvr2b.</a> Mol Endocrinol. 26 (1), 87-94 (2012).</li><li>Ghali, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dexamethasone+in+osteogenic+medium+strongly+induces+adipocyte+differentiation+of+mouse+bone+marrow+stromal+cells+and+increases+osteoblast+differentiation.">Dexamethasone in osteogenic medium strongly induces adipocyte differentiation of mouse bone marrow stromal cells and increases osteoblast differentiation.</a> BMC Cell Biol. 16, 9 (2015).</li><li>Kretlow, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Donor+age+and+cell+passage+affects+differentiation+potential+of+murine+bone+marrow-derived+stem+cells.">Donor age and cell passage affects differentiation potential of murine bone marrow-derived stem cells.</a> BMC Cell Biol. 9, 60 (2008).</li><li>DeMambro, V. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Igfbp2+Deletion+in+Ovariectomized+Mice+Enhances+Energy+Expenditure+but+Accelerates+Bone+Loss.">Igfbp2 Deletion in Ovariectomized Mice Enhances Energy Expenditure but Accelerates Bone Loss.</a> Endocrinology. 156 (11), 4129-4140 (2015).</li><li>Maridas, D. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IGFBP-4+regulates+adult+skeletal+growth+in+a+sex-specific+manner.">IGFBP-4 regulates adult skeletal growth in a sex-specific manner.</a> J Endocrinol. 233 (1), 131-144 (2017).</li><li>Nadri, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+efficient+method+for+isolation+of+murine+bone+marrow+mesenchymal+stem+cells.">An efficient method for isolation of murine bone marrow mesenchymal stem cells.</a> Int J Dev Biol. 51 (8), 723-729 (2007).</li><li>Sreejit, P., Dilip, K. B., Verma, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+mesenchymal+stem+cell+lines+from+murine+bone+marrow.">Generation of mesenchymal stem cell lines from murine bone marrow.</a> Cell Tissue Res. 350 (1), 55-68 (2012).</li><li>Abdallah, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD34+defines+an+osteoprogenitor+cell+population+in+mouse+bone+marrow+stromal+cells.">CD34 defines an osteoprogenitor cell population in mouse bone marrow stromal cells.</a> Stem Cell Res. 15 (3), 449-458 (2015).</li><li>Akiyama, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+bone+marrow+derived+mesenchymal+stem+cells+in+suspension.">Characterization of bone marrow derived mesenchymal stem cells in suspension.</a> Stem Cell Res Ther. 3 (5), 40 (2012).</li><li>Lin, C. S., Ning, H., Lin, G., Lue, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Is+CD34+truly+a+negative+marker+for+mesenchymal+stromal+cells?.">Is CD34 truly a negative marker for mesenchymal stromal cells?.</a> Cytotherapy. 14 (10), 1159-1163 (2012).</li></ol>

המחברים לחשוף כי להם אין אינטרסים כספיים.

במאמר זה, שתי שיטות של התרבות של BMSCs מוצגים עם המגבלות והיתרונות שלהן. בידוד תאים מגיע ממח העצם הוא תהליך יחסית ללא מאמץ. עם זאת, קבלת אוכלוסיה תא נציג של גזע mesenchymal או אבות osteoclastic יכול להיות מאתגר בשל הסביבה התאית מגוונות של חלל מח.
Culturing מכלול של התכנים מח עצם מספק ייצוג קרוב ש...

BMSCs מאתר ראשי משמשות כמודל במבחנה של גזע mesenchymal מאז גילוין בתחילת שנות השמונים1. אכן, תרביות של תאים פלסטיק-חסיד מבניין את חלל מוח העצם של עצמות ארוכות לשמר את היכולת להיות מבודלים לתוך תאי העצם, osteoclasts, chondrocytes או adipocytes הרבה מחקרים2,3, 4 , 5. עם זאת, מח העצם היא רקמה ייחודית המורכבת רבים אוכלוסיות תאים שונים, לרבות אך לא מוגבל, BMSCs, HSCs, תאי אנדותל, ואת המערכת החיסונית. לפיכך, בידוד וטכניקות תרבות יכולות להניב תא אוכלוסיות בעלות הומוגניות שונות. שימוש בטכניקות כאלה כדי לבדוק את הבידול פוטנציאליים מתאי יכול להיות מאתגר. לדוגמה, בעת השוואה בין תאים של עכברים עם אחרים שונים, החל עם אוכלוסיה לתא מעורב מגביל את הפרשנות של הנתונים. לעומת זאת, קבלת אוכלוסיות הומוגנית של BMSCs ו- HSCs יכול להיות מבחינה טכנית קשה ולא ניתן גם נציג של דגם ex-vivo .
במעבדה שלנו, אנו מעוניינים בעיקר הניצול של BMSCs בשל הפוטנציאל שלהם כדי להיות מבודלים לתוך תאי העצם, osteoclasts ו- adipocytes. כאן, אנו מציגים שיטות בידוד BMSCs ו- HSCs והתרבות להערכת osteoblastogenesis או adipogenesis במבחנה, כמו גם תרבויות HSCs כדי להתמיין osteoclasts. שיטה אחת משתמשת אוכלוסייה מעורבת של תאים במח העצם (BMCs) המכילה BMSCs ו HSCs ישירות מתאים adipogenesis, osteoblastogenesis, osteoclastogenesis (נקרא BMCs סה כ). שיטה זו היא קרובה יותר ex-vivo ייצוג של הטרוגניות מצא בין התאים של microenvironment מח העצם. שיטה נוספת מפרידה מחסידי מתאי שאינו חסיד, בניסיון אוכלוסיות "מזוכך" תרבות של BMSCs ו- HSCs (נקרא חסיד BMSCs). שיטת מאוחר יותר מאפשרת התרבות התא ניסויים כדי להתחיל עם מספר מדויק יותר של BMSCs או HSCs ומפחית את הפוטנציאל של מורכבות השפעות עקיפות של אוכלוסיות אחרות-תא שנותרו בתרבות. שתי השיטות יש כבר בעבר לאור ולא להשתמש בו כדי לטפל מחקריות שונות שאלות6,7,8,9.

<table><tbody><tr><td>200&amp;mu;L pipet tips&amp;nbsp;</td><td>Rainin</td><td>17014401</td><td></td></tr><tr><td>1.5 mL centrifuge tubes</td><td>USA Scientific</td><td>1615-5500</td><td></td></tr><tr><td>15 mL conical tube&amp;nbsp;</td><td>VWR</td><td>89039-668</td><td></td></tr><tr><td>50 mL conical tube</td><td>VWR</td><td>89039-660</td><td></td></tr><tr><td>Phosphate Buffered Saline (PBS)&amp;nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>21-040-CM</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Fisher Science</td><td>04-355-451</td><td></td></tr><tr><td>Dissection tools</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>70 &amp;mu;m filters</td><td>BD Falcon</td><td>352350</td><td></td></tr><tr><td>0.25% trypsin</td><td>Gibco</td><td>25200</td><td></td></tr><tr><td>Kimwipe</td><td>VWR</td><td>82003-820</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyde (PFA)</td><td>Electron Microscopy Science</td><td>15710</td><td></td></tr><tr><td>Alkaline Phosphatase kit</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>86R</td><td></td></tr><tr><td>Silver Nitrate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S6506</td><td></td></tr><tr><td>Sodium Thiosulfate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S7026</td><td></td></tr><tr><td>Oil Red O</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>O0625</td><td></td></tr><tr><td>Isopropanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>190764</td><td></td></tr><tr><td>10% Neutral Buffered Formalin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F5554-4L</td><td></td></tr><tr><td>Whatman filter Grade 1</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Z274852</td><td></td></tr><tr><td>Tartrate-Resistant Acid Phosphatase kit</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>387A</td><td></td></tr><tr><td>Glutaraldehyde</td><td>Electron</td><td>16220</td><td></td></tr><tr><td>MEM&amp;alpha;</td><td>Gibco</td><td>12571</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum</td><td>VWR</td><td>97068-085</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin/Streptomycin</td><td>Invitrogen</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>&amp;beta;-glycerol phosphate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G9891</td><td></td></tr><tr><td>Ascorbic acid</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A4544</td><td></td></tr><tr><td>DMEM High Glucose&amp;nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D5796</td><td></td></tr><tr><td>Rosiglitazone</td><td>Cayman Chemical</td><td>717410</td><td></td></tr><tr><td>Insulin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I6634</td><td></td></tr><tr><td>IBMX</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I5879</td><td></td></tr><tr><td>Dexamethasone</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D4902</td><td></td></tr><tr><td>RANKL</td><td>Peprotech</td><td>310-01</td><td></td></tr><tr><td>mCSF</td><td>Peprotech</td><td>315-02</td><td></td></tr><tr><td>Axio Observer inverter microscope</td><td>Zeiss</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

isolation, culture, and differentiation of bone marrow stromal cells and osteoclast progenitors from mice

מח עצם סטרומה תאים (BMSCs) מהווים אוכלוסיה תא בשימוש שגרתי כייצוג של גזע mesenchymal אין ויטרו. הם מתגוררים בתוך החלל מח העצם לצד hematopoietic תאי גזע (HSCs), אשר יכולים להצמיח תאי דם אדומים, מחוסן. אבות ו osteoclasts. לפיכך, עקירות של אוכלוסיות תאים מתוצאות מח עצם תערובת הטרוגנית מאוד של אוכלוסיות תאים שונים, אשר ניתן להציג את האתגרים בעיצוב ניסיוני, וחיסול פרשנות הנתונים. מספר בידוד וטכניקות תרבות פותחו במעבדות כדי לקבל אוכלוסיות פחות או יותר הומוגנית של BMSCs ו- HSCs invitro. כאן, אנו מציגים שתי שיטות בידוד של BMSCs ו- HSCs של עצמות ארוכות העכבר: שיטה אחת המניבה אוכלוסייה מעורבת של BMSCs ו- HSCs ובשיטת אחד שמנסה להפריד בין האוכלוסיות תא שני המבוסס על הדבקות. שתי השיטות מספקות תאים מתאים osteogenic ו- adipogenic בידול ניסויים מבחני גם פונקציונלית.

סקירה של התרבויות תא טכניקות תרבות שני אפשר לפצל ההערכה של בידול על אוכלוסייה מעורבת של BMCs של BMSCs ו- HSCs (סה כ BMCs, איור 1A) או אוכלוסייה של BMSCs מ- HSCs (מחסידי BMSCs, איור 1B). hr 48 לאחר בתאים ממח מבודדים, מצופה (איור 1C), הם במהיר?...

Watch this Scientific Journal Video about Isolation, Culture, and Differentiation of Bone Marrow Stromal Cells and Osteoclast Progenitors from Mice at JoVE.com

Isolation, Culture, and Differentiation of Bone Marrow Stromal Cells and Osteoclast Progenitors from Mice

במאמר זה, נציג שיטות כדי לבודד, להבדיל תאי סטרומה מח עצם של תאי גזע hematopoietic עצמות ארוכות העכבר. שני פרוטוקולים שונים מוצגים מניב אוכלוסיות תאים שונים עבור הרחבת ובידול לתוך תאי העצם, adipocytes ו osteoclasts.

בידוד, תרבות, התמיינות של תאי סטרומה מח עצם ו אוסטאוקלסט אבות של עכברים

Bone marrow stromal cells (BMSCs) constitute a cell population routinely used as a representation of mesenchymal stem cells in vitro. They reside within ...

isolation-culture-differentiation-bone-marrow-stromal-cells

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

30.8K Views.  Maine Medical Center Research Institute. במאמר זה, נציג שיטות כדי לבודד, להבדיל תאי סטרומה מח עצם של תאי גזע hematopoietic עצמות ארוכות העכבר. שני פרוטוקולים שונים מוצגים מניב אוכלוסיות תאים שונים עבור הרחבת ובידול לתוך תאי העצם, adipocytes ו osteoclasts.

Video: Isolation, Culture, and Differentiation of Bone Marrow Stromal Cells and Osteoclast Progenitors from Mice

Stimulation of Notch Signaling in Mouse Osteoclast Precursors

Notch signaling is a key component of multiple physiological and pathological processes. The nature of Notch signaling, however, makes in vitro investigation of its varying and sometimes contradictory roles a challenge. As a component of direct cell-cell communication with both receptors and ligands bound to the plasma membrane, Notch signaling cannot be activated in vitro by simple addition of ligands to culture media, as is possible with many other signaling pathways. Instead, Notch ligands must be presented to cells in an immobilized state. 
Variations in methods of Notch signaling activation can lead to different outcomes in cultured cells. In osteoclast precursors, in particular, differences in methods of Notch stimulation and osteoclast precursor culture and differentiation have led to disagreement over whether Notch signaling is a positive or negative regulator of osteoclast differentiation. While closer comparisons of osteoclast differentiation under different Notch stimulation conditions in vitro and genetic models have largely resolved the controversy regarding Notch signaling and osteoclasts, standardized methods of continuous and temporary stimulation of Notch signaling in cultured cells could prevent such discrepancies in the future.
This protocol describes two methods for stimulating Notch signaling specifically in cultured mouse osteoclast precursors, though these methods should be applicable to any adherent cell type with minor adjustments. The first method produces continuous stimulation of Notch signaling and involves immobilizing Notch ligand to a tissue culture surface prior to the seeding of cells. The second, which uses Notch ligand bound to agarose beads allows for temporary stimulation of Notch signaling in cells that are already adhered to a culture surface. This protocol also includes methods for detecting Notch activation in osteoclast precursors as well as representative transcriptional markers of Notch signaling activation.

Notch signaling is a form of cellular communication that relies upon direct contact between cells. To properly induce Notch signaling in vitro, Notch ligands must be presented to cells in an immobilized state. This protocol describes methods for in vitro stimulation of Notch signaling in mouse osteoclast precursors.

גירוי של מערכת איתות Notch עכבר osteoclast המבשר

Notch signaling is a key component of multiple physiological and pathological processes. The nature of Notch signaling, however, makes in vitro ...

Identification and Isolation of Oligopotent and Lineage-committed Myeloid Progenitors from Mouse Bone Marrow

Myeloid progenitors that yield neutrophils, monocytes and dendritic cells (DCs) can be identified in and isolated from the bone marrow of mice for hematological and immunological analyses. For example, studies of the cellular and molecular properties of myeloid progenitor populations can reveal mechanisms underlying leukemic transformation, or demonstrate how the immune system responds to pathogen exposure. Previously described flow cytometry strategies for myeloid progenitor identification have enabled significant advances in many fields, but the fractions they identify are very heterogeneous. The most commonly used gating strategies define bone marrow fractions that are enriched for the desired populations, but also contain large numbers of &#34;contaminating&#34; progenitors. Our recent studies have resolved much of this heterogeneity, and the protocol we present here permits the isolation of 6 subpopulations of oligopotent and lineage-committed myeloid progenitors from 2 previously described bone marrow fractions. The protocol describes 3 stages: 1) isolation of bone marrow cells, 2) enrichment for hematopoietic progenitors by magnetic-activated cell sorting (lineage depletion by MACS), and 3) identification of myeloid progenitor subsets by flow cytometry (including fluorescence-activated cell sorting, FACS, if desired). This approach permits progenitor quantification and isolation for a variety of in vitro and in vivo applications, and has already yielded novel insight into pathways and mechanisms of neutrophil, monocyte, and DC differentiation.

We demonstrate how to identify and isolate 6 subsets of myeloid progenitors from murine bone marrow using a combination of magnetic and fluorescence sorting (MACS and FACS). This protocol can be used for in vitro culture assays (methylcellulose or liquid cultures), in vivo adoptive transfer experiments, and RNA/protein analyses.

זיהוי ובידוד של Oligopotent, ביצע לשושלת אבות מיאלואידית ממח העצם העכבר

Myeloid progenitors that yield neutrophils, monocytes and dendritic cells (DCs) can be identified in and isolated from the bone marrow of mice for ...

Immunology and Infection

Phenotypic Analysis and Isolation of Murine Hematopoietic Stem Cells and Lineage-committed Progenitors

The bone marrow is the principal site where HSCs and more mature blood cells lineage progenitors reside and differentiate in an adult organism. HSCs constitute a minute cell population of pluripotent cells capable of generating all blood cell lineages for a life-time1. The molecular dissection of HSCs homeostasis in the bone marrow has important implications in hematopoiesis, oncology and regenerative medicine. We describe the labeling protocol with fluorescent antibodies and the electronic gating procedure in flow cytometry to score hematopoietic progenitor subsets and HSCs distribution in individual mice (Fig. 1). In addition, we describe a method to extensively enrich hematopoietic progenitors as well as long-term (LT) and short term (ST) reconstituting HSCs from pooled bone marrow cell suspensions by magnetic enrichment of cells expressing c-Kit. The resulting cell preparation can be used to sort selected subsets for in vitro and in vivo functional studies (Fig. 2).
Both trabecular osteoblasts2,3 and sinusoidal endothelium4 constitute functional niches supporting HSCs in the bone marrow. Several mechanisms in the osteoblastic niche, including a subset of N-cadherin+ osteoblasts3 and interaction of the receptor tyrosine kinase Tie2 expressed in HSCs with its ligand angiopoietin-15 concur in determining HSCs quiescence. "Hibernation" in the bone marrow is crucial to protect HSCs from replication and eventual exhaustion upon excessive cycling activity6. Exogenous stimuli acting on cells of the innate immune system such as Toll-like receptor ligands7 and interferon-&alpha;6 can also induce proliferation and differentiation of HSCs into lineage committed progenitors. Recently, a population of dormant mouse HSCs within the lin- c-Kit+ Sca-1+ CD150+ CD48- CD34- population has been described8. Sorting of cells based on CD34 expression from the hematopoietic progenitors-enriched cell suspension as described here allows the isolation of both quiescent self-renewing LT-HSCs and ST-HSCs9. A similar procedure based on depletion of lineage positive cells and sorting of LT-HSC with CD48 and Flk2 antibodies has been previously described10. In the present report we provide a protocol for the phenotypic characterization and ex vivo cell cycle analysis of hematopoietic progenitors, which can be useful for monitoring hematopoiesis in different physiological and pathological conditions. Moreover, we describe a FACS sorting procedure for HSCs, which can be used to define factors and mechanisms regulating their self-renewal, expansion and differentiation in cell biology and signal transduction assays as well as for transplantation.

A method to analyse the distribution of bone marrow hematopoietic progenitors in flow cytometry as well as to efficiently isolate highly purified hematopoietic stem cells (HSCs) is described. The isolation procedure is essentially based on magnetic enrichment of c-Kit+ cells and cell sorting to purify HSCs for cellular and molecular studies.

ניתוח בידוד פנוטיפי של Murine בתאי גזע hematopoietic ו-Lineage מחויבים אבות

The bone marrow is the principal site where HSCs and more mature blood cells lineage progenitors reside and differentiate in an adult organism. HSCs ...

Biology

Economical and Efficient Protocol for Isolating and Culturing Bone Marrow-derived Dendritic Cells from Mice

The demand for dendritic cells (DCs) is gradually increasing as immunology research advances. However, DCs are rare in all tissues. The traditional method for isolating DCs primarily involves inducing bone marrow (BM) differentiation into DCs by injecting large doses (&#62;10 ng/mL) of granulocyte-macrophage colony-stimulating factor/interleukin-4 (GM-CSF/IL-4), making the procedure complex and expensive. In this protocol, using all BM cells cultured in 10 ng/mL GM-CSF/IL-4 medium, after 3-4 half-culture exchanges, up to 2.7 x 107 CD11c+ cells&#160;(DCs) per mouse (two femurs) were harvested with a purity of 80%-95%. After 10 days in culture, the expression of CD11c, CD80, and MHC II increased, whereas the number of cells decreased. The number of cells peaked after 7 days of culture. Moreover, this method only took 10 min to harvest all bone marrow cells, and a high number of DCs were obtained after 1 week of culture.

Here, we present an economical and efficient method to isolate and generate high-purity bone marrow-derived dendritic cells from mice after 7 days of culture with 10 ng/mL GM-CSF/IL-4.

פרוטוקול חסכוני ויעיל לבידוד וגידול תאים דנדריטיים שמקורם במח העצם מעכברים

The demand for dendritic cells (DCs) is gradually increasing as immunology research advances. However, DCs are rare in all tissues. The traditional method ...

Isolation and Culture of Bone Marrow-Derived Macrophages from Mice

Macrophages have important effector functions in homeostasis and inflammation. These cells are present in every tissue in the body and have the important ability to change their profile according to the stimuli present in the microenvironment. Cytokines can profoundly affect macrophage physiology, especially IFN-&#947; and interleukin 4, generating M1 and M2 types respectively. Because of the versatility of these cells, the production of a population of bone marrow-derived macrophages can be a basic step in many experimental models of cell biology. The aim of this protocol is to help researchers in the isolation and culture of macrophages derived from bone marrow progenitors. Bone marrow progenitors from pathogen-free C57BL/6 mice are transformed into macrophages upon exposure to macrophage colony-stimulating factor (M-CSF) that, in this protocol, is obtained from the supernatant of the murine fibroblast lineage L-929. After incubation, mature macrophages are available for use from the 7th to the 10th day. A single animal can be the source of approximately 2 x 107 macrophages. Therefore, it is an ideal protocol for obtaining large amounts of primary macrophages using basic methods of cell culture.

The present protocol describes the isolation and culture of bone marrow-derived macrophages from mice.

בידוד ותרבית של מקרופאגים שמקורם במח עצם מעכברים

Macrophages have important effector functions in homeostasis and inflammation. These cells are present in every tissue in the body and have the important ...

מיטוב בידוד תאי סטרומה מבלוטת התימוס וממח העצם

Stromal Cell Isolation From Hematopoietic Organs

Single-cell sequencing has enabled the mapping of heterogeneous cell populations in the stroma of hematopoietic organs. These methodologies provide a lens through which to study previously unresolved heterogeneity at steady state, as well as changes in cell type representation induced by extrinsic stresses or during aging. Here, we present step-wise protocols for the isolation of high-quality stromal cell populations from murine and human thymus, as well as murine bone and bone marrow. Cells isolated through these protocols are suitable for generating high-quality single-cell multiomics datasets. The impacts of sample digestion, hematopoietic lineage depletion, FACS analysis/sorting, and how these factors influence compatibility with single-cell sequencing are discussed here. With examples of FACS profiles indicating successful and inefficient dissociation and downstream stromal cell yields in post-sequencing analysis, recognizable pointers for users are provided. Considering the specific requirements of stromal cells is crucial for acquiring high-quality and reproducible results that can advance knowledge in the field.

מחבר זרקור: קידום מחקר המטופויטי באמצעות בידוד תאי סטרומה לריצוף תא בודד

Here we present protocols that enable isolation of stromal cells from murine bone, bone marrow, thymus and human thymic tissue compatible with single-cell multiomics.

בידוד תאי סטרומה מאיברים המטופויטיים

Single-cell sequencing has enabled the mapping of heterogeneous cell populations in the stroma of hematopoietic organs. These methodologies provide a lens ...

Osteoclast Derivation from Mouse Bone Marrow

Osteoclasts are highly specialized cells that are derived from the monocyte/macrophage lineage of the bone marrow. Their unique ability to resorb both the organic and inorganic matrices of bone means that they play a key role in regulating skeletal remodeling. Together, osteoblasts and osteoclasts are responsible for the dynamic coupling process that involves both bone resorption and bone formation acting together to maintain the normal skeleton during health and disease.
As the principal bone-resorbing cell in the body, changes in osteoclast differentiation or function can result in profound effects in the body. Diseases associated with altered osteoclast function can range in severity from lethal neonatal disease due to failure to form a marrow space for hematopoiesis, to more commonly observed pathologies such as osteoporosis, in which excessive osteoclastic bone resorption predisposes to fracture formation.
An ability to isolate osteoclasts in high numbers in vitro has allowed for significant advances in the understanding of the bone remodeling cycle and has paved the way for the discovery of novel therapeutic strategies that combat these diseases. 
Here, we describe a protocol to isolate and cultivate osteoclasts from mouse bone marrow that will yield large numbers of osteoclasts.

Osteoclasts are the principal bone-resorbing cell in the body. An ability to isolate osteoclasts in large numbers has resulted in significant advances in the understanding of osteoclast biology. In this protocol, we describe a method for isolation, cultivating and quantifying osteoclast activity in vitro.

גזירה האוסטאוקלסטים מעכבר מח עצם

Osteoclasts are highly specialized cells that are derived from the monocyte/macrophage lineage of the bone marrow. Their unique ability to resorb both the ...

Isolation, Purification, and Differentiation of Osteoclast Precursors from Rat Bone Marrow

Osteoclasts are large, multinucleated, and bone-resorbing cells of the monocyte-macrophage lineage that are formed by the fusion of monocytes or macrophage precursors. Excessive bone resorption is one the most significant cellular mechanisms leading to osteolytic diseases, including osteoporosis, periodontitis, and periprosthetic osteolysis. The main physiological function of osteoclasts is to absorb both the hydroxyapatite mineral component and the organic matrix of bone, generating the characteristic resorption appearance on the surface of bones. There are relatively few osteoclasts compared to other cells in the body, especially in adult bones. Recent studies have focused on how to obtain more mature osteoclasts in less time, which has always been a problem. Several improvements in the isolation and culture techniques have developed in laboratories in order to obtain more mature osteoclasts. Here, we introduce a method that isolates bone marrow in less time and with less effort compared to the traditional procedure, using a special and simple device. With the use of density gradient centrifugation, we obtain large amounts of fully differentiated osteoclasts from rat bone marrow, which are identified by classical methods.

Osteoclasts are tissue-specific macrophage polykaryons derived from the monocyte-macrophage lineage of hematopoietic stem cells. This protocol describes how to isolate bone marrow cells so that large quantities of osteoclasts are obtained while reducing the risk of accidents found in traditional methods.

בידוד, תרבות, התמיינות של תאי סטרומה מח עצם ו אוסטאוקלסט אבות של עכברים

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video

גירוי של מערכת איתות Notch עכבר osteoclast המבשר

זיהוי ובידוד של Oligopotent, ביצע לשושלת אבות מיאלואידית ממח העצם העכבר

ניתוח בידוד פנוטיפי של Murine בתאי גזע hematopoietic ו-Lineage מחויבים אבות

פרוטוקול חסכוני ויעיל לבידוד וגידול תאים דנדריטיים שמקורם במח העצם מעכברים

בידוד ותרבית של מקרופאגים שמקורם במח עצם מעכברים

בידוד תאי סטרומה מאיברים המטופויטיים

בידוד תאי סטרומה מאיברים המטופויטיים

בידוד תאי סטרומה מאיברים המטופויטיים

גזירה האוסטאוקלסטים מעכבר מח עצם

בידוד, טיהור, והבידול של אוסטאוקלסט מקדים של מח עצם חולדה