تم تمويل هذا العمل من وكالة النهوض بالبحوث النمساوية (فج؛ المشروع رقم 850681)، ومبادرة جامعة التطبيقية العلوم العليا النمسا التمويل الأساسي (مشروع جلوكوستار) والمركز "الابتكار التكنولوجي" في مجال الطب (مركز موقوت) أن يتلقى التمويل الأساسية بمقاطعة النمسا العليا.

وفقا للتوجيه رقم 2010/63/الاتحاد الأوروبي، تجارب على أجنة الطيور غير دبرت خلال الثلثين الأول من التنمية الجنينية لا تحتاج الإذن من قبل لجنة أخلاقيات.
1-تخزين والإكثار من البيض
<ol><li>الحصول على بيض الدجاجة المخصبة (جدول المواد) من مربي محلية. ملاحظة: يمكن تخزين البيض في 14 درجة مئوية في جو هوميديفيد لمدة تصل إلى 10 أيام بعد زرع قبل استخدامها لإجراء التجارب.</li>
	<li>احتضان البيض في 38 درجة مئوية مع رطوبة متوسط 40-60 في المائة لمدة 10 أو 11 يوما في حاضنة أن يتحول باستمرار البيض.</li>
</ol>2-اختيار البيض
<ol><li>فحص البيض للاخصاب بعد الحضانة لمدة تصل إلى 11 يوما. استخدام ضوء كاندلينج لهذه الخطوة. تراجع هامش مصباح كاندلينج في إينكباد وشمعة الجانب أشار البيض.</li>
	<li>لتحديد المثانة الهواء، تحقق من وجود الاختلافات في السطوع على رأس البيضة. ملاحظة: يظهر المثانة الهواء كمنطقة جولة، وأكثر شفافية، وفي حين الزلال أكثر قتامة عندما يتم كاندليد البيض.</li>
	<li>بعد الكشف عن المثانة الهواء، وضع علامة على موقع بالضغط على المصباح قليلاً ضد البيض بالحبر تم تطبيقه مسبقاً.</li>
	<li>استبعاد البيض غير المخصب في هذه الخطوة، التي لا تظهر فرقا في السطوع بين الزلال والمثانة الهواء.</li>
</ol>3-حقن المواد
<ol><li>إعداد مضمون الفائدة (مثلاً، انتزاع الأعشاب أو الأنسولين) بتمييع المضمون في تركيز المطلوب في المخزن المؤقت لحل متوازن الملح (حبس) هانك. على سبيل المثال، 3.3 U/mL الأنسولين المتاحة تجارياً التناظرية في حبس.</li>
	<li>لتطبيق المجمع المحدد، بعناية بيك قشر البيض مع زوج أشار من ملاقط في مجال ملحوظ المثانة الهواء. ولا تشكل حفرة أكبر من قطر الإبرة للمحاقن. حقن المخزن المؤقت الحل (300 ميليلتر) يحتوي على مضمون الفائدة في منطقة بيكيد عن طريق حقنه. ملاحظة: استخدم العقيمة، 1 مل من المحاقن تستخدم مرة واحدة، ونصائح ماصة، والسفن. ارتداء القفازات ومعطف مختبر للتجارب.</li>
	<li>لتحديد مدى تأثير خفض جلوكوز الدم من مادة، وضع البيض مرة أخرى إلى الحاضنة ل 60 و 120 و 180 دقيقة، على التوالي. لتحديد مستويات الجلوكوز في الدم القاعدية، تشمل على الأقل 10-15 مراقبة معاملة غير البيض.</li>
</ol>4. اختبارات السمية
<ol><li>وبعد تطبيق المجمع المحدد ح 24، حجته الغشاء كثافة قشرة مع المخزن المؤقت مخزنة المالحة (PBS) الفوسفات (ما يكفي لتغطية الغشاء كله كثافة قشرة) لمالا يقل عن 30 ثانية.</li>
	<li>إزالة الزائدة المخزن المؤقت لبرنامج تلفزيوني بصب ذلك بعيداً.</li>
	<li>سحب قبالة الغشاء كثافة قشرة بعناية مع زوج أشار من الملقط.</li>
	<li>فحص الأوعية الدموية للآفات والتأكد من حيوية الجنين الفرخ (مثلاً، الحركة). ملاحظة: انظر الشكل 1 للمقارنة الحيوية مقابل غير حيوية الأجنة بعد التطبيق لانتزاع الأعشاب السامة.</li>
</ol>5-قياس قيمة الجلوكوز في الدم
<ol><li>في هذه النقطة الزمنية الخاصة بكل منها، بعناية إزالة قشر البيض في أعلاه المثانة الهواء وحجته الغشاء كثافة قشرة مع المخزن المؤقت لبرنامج تلفزيوني (ما يكفي لتغطية الغشاء كله كثافة قشرة).</li>
	<li>إزالة الزائدة المخزن المؤقت لبرنامج تلفزيوني بصب ذلك بعيداً.</li>
	<li>سحب بعناية قبالة الغشاء كثافة قشرة مع زوج أشار من الملقط.</li>
	<li>قطع وإزالة الغشاء تشوريوالانتويك مع مايكرو-مقص، لتمكين الوصول إلى الأوعية الدموية مناسبة. قص الغشاء 2-3 سم على الأقل. لا تقطع أي سفن كبيرة في الغشاء نفسه لتجنب فقدان الدم غير المرغوب فيها للجنين.</li>
	<li>تحديد موقع السفينة الكبيرة التي تنشأ من البطن للجنين. رفع هذه السفينة من بياضه مع الصغرى-مقص مغلق ووضعه على درجة حموضة-شريط من بلاستيك. نقل قطاع الأس الهيدروجيني تحت السفينة، التي تعقد مع مايكرو-مقص، والانسحاب الجزئي-مقص بعيداً بعناية.</li>
	<li>إزالة 1-2 مل السائل تحت الغشاء تشوريوالانتويك مع ماصة لتجنب تمييع الدم في الخطوة التالية. الجاف في السفينة والأس الهيدروجيني-قطاع مع أوراق الترشيح، قبل أن يتم قطع السفينة.</li>
	<li>قطع الأوعية الدموية بعناية مع الصغرى-مقص على جانب واحد. لا تقطع عن طريق السفينة تماما. ملاحظة: السفينة سمكها حوالي 1 ملم. لا تقطع أكثر من نصف السفينة تجنب قطع من خلال السفينة تماما، كما أنها قد تنزلق قبالة قطاع غزة وليس جمع الدم من الممكن.</li>
	<li>جمع الدم تسرب في قطاع الأس الهيدروجيني باستخدام ماصة. ميكروليتيرس عشرة من الدم مطلوبة لتحديد مستويات الجلوكوز في استخدام مقياس جلوكوز الدم.</li>
</ol>6-إحصائية التقييم
<ol><li>حساب قيمة يعني على الأقل 10 بيضة الفردية في النقطة الزمنية وتطبيع هذه القيم إلى واحدة من البيض التحكم (غير أو المخزن المؤقت-المعالجة بيض).</li>
	<li>وفي وقت لاحق، تحديد النسبة المئوية للانخفاض. وبالإضافة إلى ذلك، استخدام الأنسولين كعنصر إيجابي. ملاحظة: تكرار التجربة كل ثلاث مرات على الأقل.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Defronzo, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Banting+Lecture.+From+the+triumvirate+to+the+ominous+octet:+a+new+paradigm+for+the+treatment+of+type+2+diabetes+mellitus.">Banting Lecture. From the triumvirate to the ominous octet: a new paradigm for the treatment of type 2 diabetes mellitus.</a> Diabetes. 58 (4), 773-795 (2009).</li><li>American_Diabetes_Association. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnosis+and+classification+of+diabetes+mellitus.">Diagnosis and classification of diabetes mellitus.</a> Diabetes Care. 37, S81-S90 (2014).</li><li>Han Cho, N., Cavan, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> IDF Diabetes Atlas. 7, (2015).</li><li>Bailey, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Individualized+glycaemic+targets+and+pharmacotherapy+in+type+2+diabetes.">Individualized glycaemic targets and pharmacotherapy in type 2 diabetes.</a> Diabetes &amp; vascular disease research. 10 (5), 397-409 (2013).</li><li>Maruthur, N. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diabetes+Medications+as+Monotherapy+or+Metformin-Based+Combination+Therapy+for+Type+2+Diabetes:+A+Systematic+Review+and+Meta-analysis.">Diabetes Medications as Monotherapy or Metformin-Based Combination Therapy for Type 2 Diabetes: A Systematic Review and Meta-analysis.</a> Annals of internal medicine. 164 (11), 740-751 (2016).</li><li>Aleman-Gonzalez-Duhart, D., Tamay-Cach, F., Alvarez-Almazan, S., Mendieta-Wejebe, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+Advances+in+the+Biochemical+and+Physiological+Aspects+of+the+Treatment+of+Type+2+Diabetes+Mellitus+with+Thiazolidinediones.">Current Advances in the Biochemical and Physiological Aspects of the Treatment of Type 2 Diabetes Mellitus with Thiazolidinediones.</a> PPAR research. , 7614270 (2016).</li><li>Cohen, F. J., Neslusan, C. A., Conklin, J. E., Song, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+antihyperglycemic+prescribing+trends+for+US+privately+insured+patients+with+type+2+diabetes.">Recent antihyperglycemic prescribing trends for US privately insured patients with type 2 diabetes.</a> Diabetes care. 26 (6), 1847-1851 (2003).</li><li>Desai, N. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patterns+of+medication+initiation+in+newly+diagnosed+diabetes+mellitus:+quality+and+cost+implications.">Patterns of medication initiation in newly diagnosed diabetes mellitus: quality and cost implications.</a> The American journal of medicine. 125 (3), e301-e307 (2012).</li><li>Martel, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anti-obesogenic+and+antidiabetic+effects+of+plants+and+mushrooms.">Anti-obesogenic and antidiabetic effects of plants and mushrooms.</a> Nature reviews. Endocrinology. , (2016).</li><li>Lanzerstorfer, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+novel+insulin+mimetic+drugs+by+quantitative+total+internal+reflection+fluorescence+(TIRF)+microscopy.">Identification of novel insulin mimetic drugs by quantitative total internal reflection fluorescence (TIRF) microscopy.</a> British journal of pharmacology. 171 (23), 5237-5251 (2014).</li><li>Onur, S., St&#246;ckmann, H., Zenthoefer, M., Piker, L., D&#246;ring, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Plant+Extract+Collection+Kiel+in+Schleswig-Holstein+(PECKISH)+Is+an+Open+Access+Screening+Library.">The Plant Extract Collection Kiel in Schleswig-Holstein (PECKISH) Is an Open Access Screening Library.</a> Journal of Food Research. 2 (4), (2013).</li><li>Haselgrubler, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gluc-HET,+a+complementary+chick+embryo+model+for+the+characterization+of+antidiabetic+compounds.">Gluc-HET, a complementary chick embryo model for the characterization of antidiabetic compounds.</a> PloS one. 12 (8), e0182788 (2017).</li><li>Stadlbauer, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biomolecular+Characterization+of+Putative+Antidiabetic+Herbal+Extracts.">Biomolecular Characterization of Putative Antidiabetic Herbal Extracts.</a> PloS one. 11 (1), e0148109 (2016).</li><li>Greywe, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Applicability+and+robustness+of+the+hen's+egg+test+for+analysis+of+micronucleus+induction+(HET-MN):+results+from+an+inter-laboratory+trial.">Applicability and robustness of the hen's egg test for analysis of micronucleus induction (HET-MN): results from an inter-laboratory trial.</a> Mutation research. 747 (1), 118-134 (2012).</li><li>Manakova, E., Hubickova, L., Kostalova, J., Zemanova, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryotoxicity+of+mirtazapine:+a+study+using+Chick+Embryotoxicity+Screening+Test.">Embryotoxicity of mirtazapine: a study using Chick Embryotoxicity Screening Test.</a> Neuro endocrinology letters. 31, 8-10 (2010).</li><li>Ribatti, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chick+embryo+chorioallantoic+membrane+as+a+useful+tool+to+study+angiogenesis.">Chick embryo chorioallantoic membrane as a useful tool to study angiogenesis.</a> International review of cell and molecular biology. 270, 181-224 (2008).</li><li>Yoshiyama, Y., Sugiyama, T., Kanke, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+diabetes+model+in+chick+embryos+treated+with+streptozotocin.">Experimental diabetes model in chick embryos treated with streptozotocin.</a> Biological &amp; pharmaceutical bulletin. 28 (10), 1986-1988 (2005).</li><li>Wolf, T., Niehaus-Rolf, C., Luepke, N. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Some+new+methodological+aspects+of+the+hen's+egg+test+for+micronucleus+induction+(HET-MN).">Some new methodological aspects of the hen's egg test for micronucleus induction (HET-MN).</a> Mutation research. 514 (1-2), 59-76 (2002).</li></ol>

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

والرزن HET-كام نظام اختبار بديلة مستخدمة على نطاق واسع للتجارب الحيوانية في الصناعة12. ويمثل النظام في ovo الموصوفة هنا نسخة معدلة من الإنزيم HET-كام. بينما في شكلها الأصلي، يتم إجراء تجارب كام HET لدراسة خصائص مزعجة للمركبات وصياغة أو تحليل الأوعية14،،من1516، وعلينا تكييف النهج لاختبار المركبات ذات الخصائص المفترضة الأنسولين ميميتيك12. تجارب غير فقست أجنة الطيور خلال الثلثين الأول من التنمية الجنينية وفقا للتوجيه رقم 2010/63/الاتحاد الأوروبي، لا تحتاج الإذن من قبل لجنة أخلاقية حيث لا تعتبر هذه التجارب تجارب على الحيوانات. وقد أثبتت الدراسات الحديثة مدى ملاءمة النظام في ovo توصيف نجاعة الأعشاب مقتطفات مختارة، التي تم تحديدها في شاشة أساسية المستندة إلى إزفاء GLUT410، للحد من مستويات الجلوكوز في الدم في نظراً لغياب الأنسولين12،13. وتشمل النقاط الحرجة لأداء جيد للنظام في ovo : أولاً، مولده موثوق بها إيصال البيض المخصب. الدجاج البنى الكلاسيكي لومان خيار جيد لسلالة. ثانيا، تنفيذ سمية اختبارات استبعاد التأثيرات السمية لاحتياجات مجمع التحقيق يتعين القيام به. وبالإضافة إلى ذلك، من المهم إعداد وعاء الدم مناسب لجمع الدم. من المهم لتجنب قطع السفن الكبيرة في غشاء تشوريوالانتويك نفسها، وهذا يمكن أن يؤدي إلى فقدان الدم غير أفضل. وعلاوة على ذلك، قبل أن يتم قطع السفينة إلى قطاع غزة درجة الحموضة، يجب أن تكون يربت الجافة باستخدام ورق الترشيح لمنع تمييع الدم التي تم جمعها. وأخيراً، يبدو عددا كافياً من التجارب الهامة. نوصي باستخدام البيض 10 على الأقل لكل نقطة من الوقت، وتكرار التجربة كل منها ثلاثة إضعاف.
وبطبيعة الحال، هناك بعض القيود المفروضة على هذا النهج في ovo . حيث يستغرق مدة تصل إلى 30 دقيقة حتى يتم استيعابها عبر غشاء كثافة قشرة المواد التي تأتي في اتصال وثيق مع الغشاء تشوريوالانتويك، من غير الممكن التحديد الكمي لاستجابة سريعة للجنين إلى مجمع التطبيقية. وعلاوة على ذلك، قد تكون بعض المركبات السامة في تركيز التطبيقية، الذي كثيرا ما يتسبب في آفات الأوعية الدموية في غشاء تشوريوالانتويك. وهكذا، سيتوتوكسيسيتي الاختبار استناداً إلى حضانة طويلة الأجل من المركبات لمدة حوالي 24 ساعة يبدو معقولاً. وأخيراً، وجدنا أن النظام المخزن المؤقت المستخدم لتطبيق المركبات أثر كبير على أداء المقايسة. 12 حاليا، هبس المخزن المؤقت يستخدم نظراً لأنه يؤدي إلى تأثير أصغر على مستويات السكر في الدم للجنين.
للتطبيقات المستقبلية، قد يكون اختبار نظم المخزن المؤقت الإضافي كبديل لحبس. وعلاوة على ذلك، يمكن أن يكون تأثير مستخلصات الأعشاب على معلمات إضافية الدم مثل الكوليسترول والشحوم الثلاثية أو البروتينات الدهنية مسألة جذابة.
نظامنا في ovo الجديد أداة هامة وواعدة لاختبار المواد ذات الخصائص الأنسولين ميميتيك في حي دون الحاجة إلى تجربة الحيوان. ولذلك، أنه يسد الفجوة بين النهجين في المختبر و في فيفو . بالمقارنة مع القائمة في ovo نموذج نظم17 ليس هناك حاجة للحث على مرض السكري بالعلاج بالستريبتوزوتوسين (STZ)، كما يمكننا استخدام الأجنة في يوم 10 أو 11 من الحضانة. وفي هذه المرحلة، لم يبدأ إنتاج الأنسولين، ولكن الأجنة بالفعل الأنسولين الحساسة. بالإضافة إلى ذلك، إذن بإنشاء لجنة أخلاقيات قد تكون مطلوبة إذا الأجنة الذين تتراوح أعمارهم بين 14-17 يوما تكون المستعملة17. وعلاوة على ذلك، بالمقارنة مع الاستراتيجيات البديلة18، تطبيق مجمع كما هو موضح هنا ضارة وشاقة، زيادة تجريبية عن طريق وضع معدلات أقل.
مجتمعة، هذه في ovo نهج نظام جذابة إذا كان تأثير انخفاض الدم من مادة الأنسولين mimetic يحتاج إلى اختبار في حي.

السكري من الأمراض ايضية تتميز بارتفاع السكر في الدم، ويحدث بسبب خلل في إفراز الأنسولين أو الأنسولين الإجراء1. تسعين في المئة من جميع حالات السكري هي فئة نوع 2 السكري (T2DM)، التي تظهر فيها الأفراد مقاومة الأنسولين و نقص الأنسولين معظمها2. هناك عدة عوامل معروفة لزيادة انتشار عالمي من T2DM، بما في ذلك التغييرات في نمط الحياة، ولا سيما تلك المتصلة بالإفراط في التغذية، والشيخوخة، والخمول البدني. ما يقرب من 400 مليون شخص بمرض البول السكري في العالم وفقا لاتحاد السكري الدولي (جيش الدفاع الإسرائيلي). هذا العدد من المتوقع أن تصل إلى 600 مليون خلال ال 20 سنة القادمة3.
السكري المضاعفات الناجمة عن ارتفاع السكر في الدم ومقاومة الأنسولين، مثل ارتفاع ضغط الدم، دسليبيدميا، الجلوكوز التعصب وأمراض القلب والشرايين، وأمراض الأوعية الدموية الدماغية، يؤدي إلى انخفاض كبير متوسط العمر المتوقع ونوعية4. الأفراد المتضررين تتطلب تخفيض مستوى السكر العلاج الصيدلاني؛ ومع ذلك، استخدام المخدرات، مثل الميتفورمين5 وكثيراً ما يرتبط مع آثار جانبية دراماتيكية6،،من78. ولذلك، كذلك ضرورية antidiabetic النهج التي آمنة ومتاحة على نطاق واسع وغير مكلفة.
تم المسند إلى ميزة الأنسولين mimetic خصائص المركبات العشبية المختلفة ومقتطفات، والنباتات، والمغذيات بتحوير الوظائف الخلوية المختلفة. سمة هامة حفز نقل جسد الجلوكوز الناقل 4 (GLUT4) لغشاء البلازما من أماكن تخزين داخل الخلايا، مما أدى استيعاب زيادة الجلوكوز في العضلات والأنسجة الدهنية في غياب الأنسولين، المعروفة باسم إلى خصائص الأنسولين ميميتيك9. في السابق، قمنا بتنفيذ نهج قائم على الفحص المجهري الأسفار التحديد الكمي لعملية نقل جسد GLUT410. وأسفر تحليل للمستخلصات النباتية العديد من مكتبة استخراج11 استخدام هذا الفحص تحديد المرشحين الواعدين. ومع ذلك، تلزم مزيد من الاختبارات في الكائنات الحية. النهج الذي وصف بالتفصيل في هذه الورقة، نموذج جنين فرخ معدلة، ثبت أن تكون نموذجا واعداً لتحديد المواد مع خصائص الأنسولين ميميتيك. وهو يمثل أداة جذابة سد الفجوة الواسعة بين الدراسات في المختبر و في فيفو ويوفر العديد من المزايا مقارنة بالنظم القائمة مثل تكاليف مقبولة، وإجراءات معالجة بسيطة ومعدلات الإنتاجية الكافية. وباﻹضافة إلى ذلك، إذن من لجنة أخلاقية غير مطلوب.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="621">
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:279px;">Phosphate buffered saline (PBS)</td>
			<td style="width:140px;">Biochrom</td>
			<td style="width:123px;">L1825</td>
			<td style="width:80px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Hank&#8217;s balanced salt solution (HBSS)</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>SH30268.02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">NovoRapid</td>
			<td>Novo Nordisk</td>
			<td>8-0905-82-304-6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Hens eggs (Lohmann classic brown chicken)</td>
			<td>Local Breeder</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Accu-check performa</td>
			<td>Roche</td>
			<td>6454011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Accu-check Inform II Teststreifen</td>
			<td>Roche&#160;</td>
			<td>5942861</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Incubator&#160; HEKA- Turbo 288</td>
			<td>HEKA Brutger&#228;te</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Syringe Omnican F 1 mL</td>
			<td>Braun</td>
			<td>09161502S&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Extracts</td>
			<td>PEKISH extract library</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Lamp Tempo Nr. 119</td>
			<td>ORBAN</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an in ovo model for testing insulin-mimetic compounds

مستويات السكر في الدم مرتفعة في نوع 2 السكري (T2DM)، أمراض ايضية المعقدة والمتعددة العوامل، ناجمة عن عدم المقاومة وخلايا بيتا الأنسولين. اتبعت استراتيجيات مختلفة، بما في ذلك حقن الأنسولين أو استخدام المخدرات توعية الأنسولين، لعلاج T2DM أو على الأقل الحد من الأعراض. وبالإضافة إلى ذلك، تطبيق المركبات العشبية وقد اجتذب اهتماما متزايداً. وبالتالي، من الضروري إيجاد نظم اختبار الكفاءة تحديد وتوصيف المركبات الأنسولين ميميتيك. هنا قمنا بتطوير نموذج جنين فرخ معدلة، التي تمكن من اختبار المركبات الاصطناعية ومقتطفات من الأعشاب مع خصائص الأنسولين ميميتيك. استخدام fluorescence المستندة إلى الفحص المجهري شاشة الأولية، التي يوضحها نقل جسد الجلوكوز الناقل 4 (Glut4) لغشاء البلازما، كنا قادرين على تحديد المركبات، أساسا من مستخلصات الأعشاب، التي تؤدي إلى زيادة الجلوكوز داخل الخلايا التركيزات في adipocytes. بيد أن فعالية هذه المواد يتطلب المزيد من التحقق في حي. وهكذا، استخدمنا نهج في ovo إلى التعرف على خصائص خفض جلوكوز الدم. لا تلزم موافقة لجنة أخلاقيات بحيث لا يعتبر استخدام أجنة الدجاج خلال الثلثين الأول من التنمية الجنينية تجربة حيوان. ويرد هنا، تطبيق هذا النموذج بالتفصيل.

وصف نهج جلوك-HET:
بعد الحضانة مع المواد التي تهم، يتم فتح البيض المخصب وعلى استعداد لجمع الدم بإزالة قشر البيض (الشكل 2). ويشمل زيادة إعداد الموازنة وإزالة الغشاء كثافة قشرة للوصول إلى الغشاء تشوريوالانتويك. ثم قطع هذا الغشاء بعناية لتوفير الوصول إلى الأوعية الدموية مناسبة لجمع الدم. يفضل أن يكون ذلك، يتم وضع السفينة الكبيرة التي تنشأ من البطن للجنين على درجة حموضة-شريط من بلاستيك. تفاديا لتمييع الدم أثناء جمع، هو يربت على السفينة والأس الهيدروجيني-قطاع الجافة بورق الترشيح. ثم يتم قطع الأوعية الدموية، ويتم جمع الدم يتسرب إلى قطاع الأس الهيدروجيني للتحليل باستخدام ماصة.
آثار مقتطفات مختارة من الأعشاب على مستويات الجلوكوز في الدم:
مع المنشأة حديثا إزفاء GLUT4 المستندة إلى كوانتيتيشن الرئيسي شاشة، نحن قادرون على تحديد المواد مع مميزة الأنسولين ميميتيك10. فحص المئات من مستخلصات الأعشاب للذوبان في الماء أسفرت عن تحديد عدة مرات. تم اختبار هذه المستخلصات في نموذجنا فيovo. مقتطفات أعدت من هندي كومبريتوم (رانجون الزاحف) وخلاصة غير المكشوف عنها (يطلق عليها استخراج 0845) استخدمت لهذه التجارب. ونحن حل المقتطفات في المخزن المؤقت لحبس في 300 مغ/لتر، بتركيز اتضح أن يكون مناسباً في الدراسات السابقة12،13. تم تطبيق المواد على الأجنة المحتضنة لمدة 11 يوما. وكما هو مبين في الشكل 3، لم يؤد إلى المقتطف من رانغون الزاحف تخفيض جلوكوز دم كبيرة في ovo. بيد أن تركيز الجلوكوز في الدم بنجاح تخفيض مع استخراج 0845، مع انخفاض طفيف بعد 60 دقيقة، الذي يماثل تأثير لاحظ استخدام الأنسولين متاحة تجارياً تناظرية. ولوحظ أثر كبير عندما كان وقت حضانة البيض لفترات طويلة.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57237/57237fig1.jpg"> رقم 1: تأثير المركبات السامة على حيوية الأجنة. البيض كان المحتضنة لمدة 11 يوما (A و C) أو تعامل مع انتزاع الأعشاب سامة في اليوم العاشر لآخر 24 ساعة (ب ود)- وادي تطبيق الاستخراج لآفات شديدة من الأوعية الدموية في الغشاء تشوريوالانتويك (د) والجنين (ب).
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57237/57237fig2.jpg"> الشكل 2: وصف النموذج في ovo - من اليسار إلى اليمين: فتح وإزالة قشر البيض (1-2)؛ تعرض الموازنة وإزالة الغشاء كثافة قشرة مع غشاء تشوريوالانتويك (3)؛ استعداد السفينة على درجة حموضة-قطاع (4)؛ جمع الدم وقياس تركيز الجلوكوز باستخدام مقياس جلوكوز (5). مقتبس من هاسيلجرويبلير et al., 201712. <a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/57237/57237fig2large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57237/57237fig3.jpg"> الشكل 3: تأثير مستخلصات الأعشاب على مستويات الجلوكوز في الدم بالمقارنة بالبيض غير المعالجة أو المعالجة بالانسولين. البيض هي المحتضنة لمدة 11 يوما وتعامل مع المواد المشار إليها (الأنسولين المتاحة تجارياً التناظرية: 3.3 U/mL؛ مقتطفات: 300 مغ/لتر) حلت في حبس المخزن المؤقت (300 ميليلتر حجم) ليصل إلى 3 h. الدم وحددت مستويات السكر باستخدام مقياس جلوكوز دم. وتظهر نتائج دون التأثير من المخزن المؤقت. أشرطة الخطأ تقوم على الخطأ المعياري للوسط. * ف < 0.05 و * * * ف < تنخفض 0.0001، كبيرة فيما يتعلق بالمعالجة بحبس البيض في نفس الوقت الحضانة. مقتبس من هاسيلجرويبلير et al., 201712. <a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/57237/57237fig3large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>

Watch this Scientific Journal Video about An In Ovo Model for Testing Insulin-mimetic Compounds at JoVE.com

An In Ovo Model for Testing Insulin-mimetic Compounds

في هذه الدراسة، يصف لنا نظام في ovo كأداة واعدة لاختبار مركبات الأنسولين ميميتيك في حي. وتشمل المزايا الرئيسية معدلات الإنتاجية الكافية وتكاليف مقبولة، والتي تمكن من تحديد هوية المواد الكيميائية النباتية مع خصائص الأنسولين ميميتيك.

في Ovo نموذجية لاختبار مركبات الأنسولين ميميتيك

Elevated blood glucose levels in type 2 diabetes mellitus (T2DM), a complex and multifactorial metabolic disease, are caused by insulin resistance and ...

an-in-ovo-model-for-testing-insulin-mimetic-compounds

Research

Education

JoVE Core

JoVE Journal

Pharmacology

Neuroscience

Unit 1

An In Ovo Model for Testing Insulin-mimetic Compounds

Insulin and Hypoglycemic Drugs

SCIENTISTS IN ACTION

9.5K Views.  University of Applied Sciences Upper Austria. في هذه الدراسة، يصف لنا نظام في ovo كأداة واعدة لاختبار مركبات الأنسولين ميميتيك في حي. وتشمل المزايا الرئيسية معدلات الإنتاجية الكافية وتكاليف مقبولة، والتي تمكن من تحديد هوية المواد الكيميائية النباتية مع خصائص الأنسولين ميميتيك.

Video: An In Ovo Model for Testing Insulin-mimetic Compounds

Flash Photolysis of Caged Compounds in the Cilia of Olfactory Sensory  Neurons

Photolysis of caged compounds allows the production of rapid and localized increases in the concentration of various physiologically active compounds1. Caged compounds are molecules made physiologically inactive by a chemical cage that can be broken by a flash of ultraviolet light. Here, we show how to obtain patch-clamp recordings combined with photolysis of caged compounds for the study of olfactory transduction in dissociated mouse olfactory sensory neurons. The process of olfactory transduction (Figure 1) takes place in the cilia of olfactory sensory neurons, where odorant binding to receptors leads to the increase of cAMP that opens cyclic nucleotide-gated (CNG) channels2. Ca entry through CNG channels activates Ca-activated Cl channels. We show how to dissociate neurons from the mouse olfactory epithelium3 and how to activate CNG channels or Ca-activated Cl channels by photolysis of caged cAMP4 or caged Ca5. We use a flash lamp6,7 to apply ultraviolet flashes to the ciliary region to uncage cAMP or Ca while patch-clamp recordings are taken to measure the current in the whole-cell voltage-clamp configuration8-11.

Photolysis of caged compounds allows the production of rapid and localized increases in the concentration of various physiologically active compounds. Here, we show how to obtain patch-clamp recordings combined with photolysis of caged cAMP or caged Ca for the study of olfactory transduction in dissociated mouse olfactory sensory neurons.

فلاش التحلل الضوئي للمركبات محبوس في سيليا من العصبونات الحسية الشمية

Photolysis of caged compounds allows the production of rapid and localized increases in the concentration of various physiologically active compounds1. ...

In ovo Electroporation in Chick Midbrain for Studying Gene Function in Dopaminergic Neuron Development

Dopaminergic neurons located in the ventral midbrain control movement, emotional behavior, and reward mechanisms1-3. The dysfunction of ventral midbrain dopaminergic neurons is implicated in Parkinson's disease, Schizophrenia, depression, and dementia1-5. Thus, studying the regulation of midbrain dopaminergic neuron differentiation could not only provide important insight into mechanisms regulating midbrain development and neural progenitor fate specification, but also help develop new therapeutic strategies for treating a variety of human neurological disorders.
Dopaminergic neurons differentiate from neural progenitors lining the ventricular zone of embryonic ventral midbrain. The development of neural progenitors is controlled by gene expression programs6,7. Here we report techniques utilizing electroporation to express genes specifically in the midbrain of Hamburger Hamilton (HH) stage 11 (thirteen somites, 42 hours) chick embryos8,9. The external development of chick embryos allows for convenient experimental manipulations at specific embryonic stages, with the effects determined at later developmental time points10-13. Chick embryonic neural tubes earlier than HH stage 13 (nineteen somites, 48 hours) consist of multipotent neural progenitors that are capable of differentiating into distinct cell types of the nervous system. The pCAG vector, which contains both a CMV promoter and a chick &beta;-actin enhancer, allows for robust expression of Flag or other epitope-tagged constructs in embryonic chick neural tubes14. In this report, we emphasize special measures to achieve regionally restricted gene expression in embryonic midbrain dopaminergic neuron progenitors, including how to inject DNA constructs specifically into the embryonic midbrain region and how to pinpoint electroporation with small custom-made electrodes. Analyzing chick midbrain at later stages provides an excellent in vivo system for plasmid vector-mediated gain-of-function and loss-of-function studies of midbrain development. Modification of the experimental system may extend the assay to other parts of the nervous system for performing fate mapping analysis and for investigating the regulation of gene expression.

In ovo Electroporation in Chick Midbrain for Studying Gene Function in Dopaminergic Neuron Development

To assess the function and the regulation of genes during the development of midbrain dopaminergic neurons, we describe a method that involves in ovo electroporation of plasmid DNA constructs into embryonic chick ventral midbrain dopaminergic neuron progenitors. This technique can be used to achieve efficient expression of genes of interest to study different aspects of midbrain development and dopaminergic neuron differentiation.

في Electroporation البيضة في الدماغ المتوسط ​​الفرخ لدراسة وظيفة الجينات في الخلية العصبية الدوبامين التنمية

Dopaminergic neurons located in the ventral midbrain control movement, emotional behavior, and reward mechanisms1-3. The dysfunction of ventral midbrain ...

In ovo Expression of MicroRNA in Ventral Chick Midbrain

Non-coding RNAs are additional players in regulating gene expression. Targeted in ovo electroporation of specific areas provides a unique tool for spatial and temporal control of ectopic microRNA expression. However, ventral brain structures like ventral midbrain are rather difficult to reach for any manipulations. Here, we demonstrate an efficient way to electroporate miRNA into ventral midbrain using thin platinum electrodes. This method offers a reliable way to transfect specific areas of the midbrain and a useful tool for in vivo studies.

In ovo Expression of MicroRNA in Ventral Chick Midbrain

Ectopic expression is one technique to elucidate the microRNAs role in brain development. However, targeting specific areas using in ovo electroporation is challenging. Here, we show an efficient way to selectively electroporate ventral and dorsal midbrain regions.

في التعبير البيضة من الرنا الميكروي في بطني الدماغ المتوسط ​​الفرخ

Non-coding RNAs are additional players in regulating gene expression. Targeted in ovo electroporation of specific areas provides a unique tool for spatial ...

A Simple Behavioral Assay for Testing Visual Function in Xenopus laevis

Measurement of the visual function in the tadpoles of the frog, Xenopus laevis, allows screening for blindness in live animals. The optokinetic response is a vision-based, reflexive behavior that has been observed in all vertebrates tested. Tadpole eyes are small so the tail flip response was used as alternative measure, which requires a trained technician to record the subtle response. We developed an alternative behavior assay based on the fact that tadpoles prefer to swim on the white side of a tank when placed in a tank with both black and white sides. The assay presented here is an inexpensive, simple alternative that creates a response that is easily measured. The setup consists of a tripod, webcam and nested testing tanks, readily available in most Xenopus laboratories. This article includes a movie showing the behavior of tadpoles, before and after severing the optic nerve. In order to test the function of one eye, we also include representative results of a tadpole in which each eye underwent retinal axotomy on consecutive days. Future studies could develop an automated version of this assay for testing the vision of many tadpoles at once.

A Simple Behavioral Assay for Testing Visual Function in Xenopus laevis

Xenopus laevis tadpoles prefer swimming on the white side of a black/white tank. This behavior is guided by their vision. Based on this behavior, we present a simple assay to test the visual function of tadpoles.

والفحص السلوكية بسيطة لاختبار وظيفة البصرية في<em&gt; القيطم المورق</em

Measurement of the visual function in the tadpoles of the frog, Xenopus laevis, allows screening for blindness in live animals. The optokinetic response ...

An In Vitro Model for the Study of Cellular Pathophysiology in Globoid Cell Leukodystrophy

The precise function of multi-nucleated microglia, called globoid cells, that are uniquely abundant in the central nervous system of globoid cell leukodystrophy (GLD) is unclear. This gap in knowledge has been hindered by the lack of an appropriate in vitro model for study. Herein, we describe a primary murine glial culture system in which treatment with psychosine results in multinucleation of microglia resembling the characteristic globoid cells found in GLD. Using this novel system, we defined the conditions and modes of analysis for study of globoid cells. The potential use of this model system was validated in our previous study, which identified a potential role for matrix metalloproteinase (MMP)-3 in GLD. This novel in vitro system may be a useful model in which to study the formation and function, but also the potential therapeutic manipulation, of these unique cells.

An In Vitro Model for the Study of Cellular Pathophysiology in Globoid Cell Leukodystrophy

Globoid cells are a defining pathological feature of Krabbe disease, a leukodystrophy currently lacking an effective long-term therapy. We have developed a cell culture model to study the innate biology and pathogenic potential of activated microglia and their transformation into globoid cells.

و<em&gt; في المختبر</em&gt; نموذج لدراسة الفيزيولوجيا المرضية الخلوي في الخلية حثل المادة البيضاء الكروي

The precise function of multi-nucleated microglia, called globoid cells, that are uniquely abundant in the central nervous system of globoid cell ...

Simultaneous ex vivo Functional Testing of Two Retinas by in vivo Electroretinogram System

An In vivo electroretinogram (ERG) signal is composed of several overlapping components originating from different retinal cell types, as well as noise from extra-retinal sources. Ex vivo ERG provides an efficient method to dissect the function of retinal cells directly from an intact isolated retina of animals or donor eyes. In addition, ex vivo ERG can be used to test the efficacy and safety of potential therapeutic agents on retina tissue from animals or humans. We show here how commercially available in vivo ERG systems can be used to conduct ex vivo ERG recordings from isolated mouse retinas. We combine the light stimulation, electronic and heating units of a standard in vivo system with custom-designed specimen holder, gravity-controlled perfusion system and electromagnetic noise shielding to record low-noise ex vivo ERG signals simultaneously from two retinas with the acquisition software included in commercial in vivo systems. Further, we demonstrate how to use this method in combination with pharmacological treatments that remove specific ERG components in order to dissect the function of certain retinal cell types.

Simultaneous ex vivo Functional Testing of Two Retinas by in vivo Electroretinogram System

Ex vivo ERG can be used to record electrical activity of retinal cells directly from isolated intact retinas of animals or humans. We demonstrate here how common in vivo ERG systems can be adapted for ex vivo ERG recordings in order to dissect the electrical activity of retinal cells.

متزامنة<em&gt; فيفو السابقين</em&gt; اختبار وظيفي اثنين من شبكية العين من قبل<em&gt; في الجسم الحي</em&gt; نظام مخطط كهربية

An In vivo electroretinogram (ERG) signal is composed of several overlapping components originating from different retinal cell types, as well as noise ...

Electrophysiological Method for Recording Intracellular Voltage Responses of Drosophila Photoreceptors and Interneurons to Light Stimuli In Vivo

Voltage responses of insect photoreceptors and visual interneurons can be accurately recorded with conventional sharp microelectrodes. The method described here enables the investigator to measure long-lasting (from minutes to hours) high-quality intracellular responses from single Drosophila R1-R6 photoreceptors and Large Monopolar Cells (LMCs) to light stimuli. Because the recording system has low noise, it can be used to study variability among individual cells in the fly eye, and how their outputs reflect the physical properties of the visual environment. We outline all key steps in performing this technique. The basic steps in constructing an appropriate electrophysiology set-up for recording, such as design and selection of the experimental equipment are described. We also explain how to prepare for recording by making appropriate (sharp) recording and (blunt) reference electrodes. Details are given on how to fix an intact fly in a bespoke fly-holder, prepare a small window in its eye and insert a recording electrode through this hole with minimal damage. We explain how to localize the center of a cell's receptive field, dark- or light-adapt the studied cell, and to record its voltage responses to dynamic light stimuli. Finally, we describe the criteria for stable normal recordings, show characteristic high-quality voltage responses of individual cells to different light stimuli, and briefly define how to quantify their signaling performance. Many aspects of the method are technically challenging and require practice and patience to master. But once learned and optimized for the investigator's experimental objectives, it grants outstanding in vivo neurophysiological data.

Electrophysiological Method for Recording Intracellular Voltage Responses of Drosophila Photoreceptors and Interneurons to Light Stimuli In Vivo

Sharp microelectrodes enable accurate electrophysiological characterization of photoreceptor and visual interneuron output in living Drosophila. Here we show how to use this method to record high-quality voltage responses of individual cells to controlled light stimulation. This method is ideal for studying neural information processing in insect compound eyes.

الطريقة الكهربية لالردود تسجيل بين الخلايا الجهد ل<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; خلايا مستقبلة للضوء وInterneurons إلى النور المحفزات<em&gt; في فيفو</em

Voltage responses of insect photoreceptors and visual interneurons can be accurately recorded with conventional sharp microelectrodes. The method ...

An In Vivo Assessment of Blood-Brain Barrier Disruption in a Rat Model of Ischemic Stroke

Ischemic stroke leads to vasogenic cerebral edema and subsequent primary brain injury, which is mediated through destruction of the blood-brain barrier (BBB). Rats with induced ischemic stroke were established and used as in vivo models to investigate the functional integrity of the BBB. Spectrophotometric detection of Evans blue (EB) in the brain samples with ischemic injury could provide reliable justification for the research and development of novel therapeutic modalities. This method generates reproducible results, and is applicable in any laboratory without a need for special equipment. Here, we present a visualized and technical guideline on the detection of the extravasation of EB following induction of ischemic stroke in rats.

An In Vivo Assessment of Blood-Brain Barrier Disruption in a Rat Model of Ischemic Stroke

The overall goal of this procedure is to provide a highly reproducible technique for in vivo assessment of the blood-brain barrier disruption in rat models of ischemic stroke.

تقييم في فيفو لتعطيل حاجز الدم في الدماغ في نموذج الفئران من السكتة الدماغية

Ischemic stroke leads to vasogenic cerebral edema and subsequent primary brain injury, which is mediated through destruction of the blood-brain barrier ...

A Preclinical Model to Assess Brain Recovery After Acute Stroke in Rats

The purpose of this study was to establish and validate an animal brain ischemia model in the recovery and sequela stages. A middle cerebral artery occlusion/reperfusion (MCAO/R) model in male Sprague-Dawley rats was chosen. By changing the rat&#39;s weight (260&#8722;330 g), the thread bolt type (2636/2838/3040/3043) and the brain infarct time (2-3 h), a higher Longa&#39;s score, a larger infarct volume and a greater model success ratio were screened using the Longa&#39;s score and TTC staining. The optimum model condition (300 g, 3040 thread bolt, 3 h brain infarct time) was acquired and used in a 1-90 day observation period after reperfusion via assessment of sensorimotor functions and infarct volume. At these conditions, the bilateral asymmetry test had a significant difference from 1 to 90 days, and the grid-walking test had a significant difference from 1 to 60 days; both differences could be a suitable sensorimotor functional test. Thus, the most appropriate condition of a novel rat model in the recovery and sequela stages of brain ischemia was found: 300 g rats that underwent MCAO with a 3040 thread bolt for a 3 h brain infarct and then reperfused. The appropriate sensorimotor functional tests were a bilateral asymmetry test and a grid-walking test.

The&#160;purpose of this study is to establish and validate an animal model for research in the recovery and sequela stages of brain ischemia by testing brain infarction and sensorimotor function after middle cerebral artery occlusion/reperfusion (MCAO/R) after 1-90 days in rats.

نموذج قبل السريرية لتقييم تعافي الدماغ بعد السكتة الدماغية الحاده في الفئران

The purpose of this study was to establish and validate an animal brain ischemia model in the recovery and sequela stages. A middle cerebral artery ...

Dural Stimulation and Periorbital von Frey Testing in Mice As a Preclinical Model of Headache

The cranial meninges, comprised of the dura mater, arachnoid, and pia mater, are thought to primarily serve structural functions for the nervous system. For example, they protect the brain from the skull and anchor/organize the vascular and neuronal supply of the cortex. However, the meninges are also implicated in nervous system disorders such as migraine, where the pain experienced during a migraine is attributed to local sterile inflammation and subsequent activation of local nociceptive afferents. Of the layers in the meninges, the dura mater is of particular interest in the pathophysiology of migraines. It is highly vascularized, harbors local nociceptive neurons, and is home to a diverse array of resident cells such as immune cells. Subtle changes in the local meningeal microenvironment may lead to activation and sensitization of dural perivascular nociceptors, thus leading to migraine pain. Studies have sought to address how dural afferents become activated/sensitized by using either in vivo electrophysiology, imaging techniques, or behavioral models, but these commonly require very invasive surgeries. This protocol presents a method for comparatively non-invasive application of compounds on the dura mater in mice and a suitable method for measuring headache-like tactile sensitivity using periorbital von Frey testing following dural stimulation. This method maintains the integrity of the dura and skull and reduces confounding effects from invasive techniques by injecting substances through a 0.65 mm modified cannula at the junction of unfused sagittal and lambdoid sutures. This preclinical model will allow researchers to investigate a wide range of dural stimuli and their role in the pathological progression of migraine, such as nociceptor activation, immune cell activation, vascular changes, and pain behaviors, all while maintaining injury-free conditions to the skull and meninges.

The most notable symptom of migraine is severe head pain, and it is hypothesized that this is mediated by sensory neurons innervating the meninges. Here, we present a method to locally apply substances to the dura in a minimally invasive manner while using facial hypersensitivity as an output.

تحفيز الجافية واختبار فون فراي حول الحجاج في الفئران كنموذج قبل سريري للصداع

The cranial meninges, comprised of the dura mater, arachnoid, and pia mater, are thought to primarily serve structural functions for the nervous system.  ...