עבודה זו נתמכה בחלקו על ידי מענק פיתוח מדען של איגוד הלב האמריקני (14SDG18160021 כדי הסתייגות), R01 NIH ארה ב מעניקה HL 81753 HL 107304 ל XX ואת לקרן מאיו XX.

כל ההליכים המתוארים כאן בוצעו על פי המדריך על טיפוח ועל שימוש של חיות מעבדה (הלאומי באקדמיות העיתונות-2011), הן אושרו על ידי מאיו קליניק טיפול חיה מוסדיים ועל שימוש הוועדה.
1. הכנת דג זברה בגיר
<ol><li>להגדיר זוגות רבייה מספיק למעבר טנקים לרכוש לפחות כפול כמו הדגים הכולל לצורך הזרקת DOX. אם משווים דגים עם רקע גנטי שונה, מתרבים כל הדגים בתוך באותו שבוע כדי להבטיח בקרת תואמות גיל.</li>
	<li>לאסוף את העוברים דגים בבוקר שלמחרת, להעביר אותם ל 100 מ מ פטרי, ולשמור אותם בתוך חממה 28.5 ° C. לשמור על העוברים על צפיפות נמוכה (< 100 עוברי/צלחת פטרי).</li>
	<li>רענון המים העובר מדי יום כדי למנוע חוסר איזון סקס, להסיר באופן ידני את הביצים מת במועד באמצעות פיפטה של העברה.</li>
	<li>הזן את אותו המספר של העוברים בכל טנק (לדוגמה, בתחילה כל טנק בינוני עוברי/3 L 60) כדי להבטיח בקרת צפיפות התאים.</li>
	<li>להתחיל paramecia האכלה ב 4 ימים לאחר ההפריה (dpf).</li>
	<li>בדוק את הדגים מדי יום במהלך השלב לנוער. להתאים את מספר הדגים לפי הצורך כדי להבטיח דגים דומה בצפיפות.</li>
	<li>כאשר הדגים מגיעים בגיל 4 שבועות, להעביר עד 20 דגים לתוך טנק בינוני חדש אחד 3 L לצמיחה נוספת. להתחיל להאכיל את הדג עם שרימפסים המקווקו בשידור חי.</li>
</ol>2. הכנה ואיחסון של פתרון מניות DOX
הערה: DOX ניתן לרכוש מחברות ביו שונות. המתחם נרכשת בדרך כלל כאבקה במיכלים חום כהה.
<ol><li>ביסודיות להמיס את האבקה DOX במים מיוננים כדי להבטיח שגושים לא גלויים, עם ריכוז הסופי של 5 מ"ג/מ"ל כפתרון מניות. Aliquot 1 מ"ל של מניות DOX לתוך כל שפופרת מנעול כספת 1.5 mL. לעטוף את הצינורות 1.5 mL בנייר רדיד אלומיניום כדי להגן על DOX מפני חשיפה קלה. הערה: לבצע שלב זה ברדס כימי.</li>
	<li>שמור את הפתרון מניות DOX ב 4 ° C עבור אחסון. לאחסון לטווח ארוך (> 4 שבועות) של פתרון מניות DOX, לבצע את 3 המקטע אופציונלי המתוארים להלן.</li>
</ol>3. בקרת איכות של DOX באמצעות דג זברה עוברי (אופציונלי)
הערה: DOX הוא שני לחות אור-והרגיש, כך הוא יכול לאבד את יעילותה סמים עבור מידול DIC לאחר אחסון מורחבים. עבור DOX לרכוש מחברות שונות, או קבוצות שונות אפילו מאותה חברה, זה שימושי לכייל את יעילותה סמים באמצעות פראי-סוג (WT) דג זברה העוברים לפני ביצוע הניסויים על דגים למבוגרים. שיטה זו נגזרת של דג זברה שדווחה עובריים DIC דגם21.
<ol><li>לאסוף WT דג זברה עוברי לפחות 2 זוגות של דגים. Dechorionate עוברי-24 שעות לאחר ההפריה (hpf) באופן ידני באמצעות מזרק עם מחט מיקרו. לחלופין, התייחס העובר עם proteinase K-הריכוז הסופי של µg/mL 10 למשך 10-15 דקות בחממה 30 מעלות צלזיוס. רענן את המים העובר לאחר dechorionation. להסיר את עוברי המת ולשמור על עוברי לפחות 36 של כל אצווה.</li>
	<li>לדלל את הפתרון מניות DOX במים טריים העובר כדי ריכוז סופי של 100 מיקרומטר. אמצעי האחסון של פתרון נמצא µL 100 עבור כל העוברים 3. מערבבים את הפתרון DOX מדולל על ידי מערבולת. הפתרון מדולל הסופי צריך להיות אור, צבע אדום.</li>
	<li>להוסיף 100 µL טוב של פתרון DOX מדוללת של צלחת נקי 96-ובכן שקוף.</li>
	<li>לקחת 3 עוברי dechorionated עם פיפטה העברת פלסטיק, ולשמור את העוברים קרובה לסוף של קצה פיפטה. מכניסים את הטיפ פיפטה מכל קידוח בעזרת DOX פתרון. תן סוף הטיפ לגעת הפתרון ולאפשר את העוברים לשחות לתוך הבאר. הערה: להימנע באופן ידני דוחף את העוברים, אשר להוסיף עוד מים לתוך הבאר, לדלל את הפתרון DOX.</li>
	<li>לרענן את הפתרון DOX ב 48 hpf. בזמן הזה, להתבונן הבארות תחת מיקרוסקופ עם 10 X הגדלה לזיהוי עוברי המת (הפסקת פעימות הלב) או עוברי עם בצקת. לספור ולהסיר כל העוברים מת במועד, אחרת העוברים הנותרים חשופים הפתרון עם עוברי המת יכול למות מהר גם כן.</li>
	<li>בדוק את העוברים-72 hpf ולספור אותם. הטיפול DOX נחשב "יעילות התרופה טובה" אם > 25% מוות (הפסקת דופק) יכול להיות שנצפו בשתי קבוצות של העוברים.</li>
</ol>4. הזרקת טרום הכנה
הערה: דגים של 8 שבועות כדי בגיל 6 חודשים משמשים להזרקה DOX. משקל הגוף (BWs) דג התבגר קריוטיפ אינדיאני פראי (WIK) כדי להיות מוזרק יכול לנוע בין 0.2-0.5 g.
<ol><li>מהר את הדג במשך 24 שעות לפני ההזרקה.</li>
	<li>עזים ומתנגד הדג עם העובר מים המכילים tricaine 0.16 מ"ג/מ"ל. להשתמש בנייר סינון נקיה לייבוש המים משני צידי הגוף. למדוד את BW של כל דג בקנה מידה. קבוצת דגים בתוך 10% הבדל ב BW יחד להזרקה מאוחר יותר. הערה: כדי למזער את עומס העבודה בשלב זה, דג בתוך 10% הבדל ב BW נחשבים באותה המידה; לכן, להכין אחד DOX הפתרון עובד לפי הממוצע שלהן BW.</li>
	<li>תכנית להחדיר כל דג בוגר 5 µL של פתרון. חשב את הריכוז בעבודה DOX לפי BWs ובמספרים דגים. הערה: ללמוד cardiotoxicity כרונית למעלה לחצי שנה, השתמש DOX במינון של 20 מ"ג/ק"ג. ללמוד cardiotoxicity חריפה של DOX, ניתן להגדיל את המינון DOX עד 50 מ"ג/ק"ג של BW.</li>
	<li>לדלל את המניה DOX 1 x של האנק מאוזנת תמיסת מלח (HBSS) עבור ריכוזים עבודה המתאימה. מערבולת לערבב את הפתרון. בקצרה ספין למטה כדי לאסוף את הפתרון.</li>
</ol>5. DOX הזרקת בדגים הבוגרים
<ol><li>המקום נקי 100 מ"מ צלחת פטרי עם ספוג בפנים, מתחת למיקרוסקופ לנתיחה, ואז להתאים את המוקד. חותכים את הספוג לעשות חור של כ 4 ס מ אורך להחזיק דג. לעשות חור יותר עבור דג גדול יותר.</li>
	<li>מכינים מחט 34 G עם 10 µL מיקרו-מזרק. יש לשטוף את המחט עם מאגר x HBSS 1 כדי להסיר את כל הבועות של רחובות מן המזרק אבובים.</li>
	<li>עזים ומתנגד של הדגים הבוגרים העובר מים המכילים 0.16 מ"ג/מ"ל tricaine למשך 2 דקות. הערה: ההרדמה ממושכת מעל 5 דקות ולאחריו DOX הזרקת יכולה בקלות לגרום דג המוות.</li>
	<li>משרים את הספוג במים העובר עם tricaine, ולהעביר את הדג על גבי הספוג להזרקה.</li>
	<li>
לבצע הזרקת IP DOX באמצעות אחת משתי השיטות המתוארות להלן.
	<ol>
<li>IP קלאסי הזרקת29<ol>
<li>מקם את הדג עם הבטן למעלה בחלל של הספוג. במהירות הוספה המחט, עם 45° זווית לגוף דגים לתוך האמצע בין הסנפירים האגן, ולחדור כ 1-2 מ מ. לשחרר לאט לאט כל פתרון DOX. חכי 5 s לפני הוצאת המחט. בדוק את המשלוח DOX באמצעות צבע אדום גלוי בבטן הדג.</li>
		</ol>
</li>
		<li>הזרקת IP חלופית<ol>
<li>מניחים את הדג רוחבית על גבי הספוג עם הקדמי בצד ימין. בעדינות לייצב את הדג בעזרת מלקחיים הקהה של יד שמאל, והחזק את המזרק-המיקרו עם יד ימין.</li>
			<li>מקם את המחט מתחת לקו לרוחב מעל האגן סנפיר, עם שפוע פונה כלפי מעלה. מצביע על המיקום בשעה שבע בזווית של 45°, את המחט 3-4 מ"מ עד חלל דגים הממוקם בין של אגן הירכיים את הסנפירים אנאלי, ואז לאט לאט את הבוכנה. בדוק את המשלוח DOX באמצעות צבע אדום גלוי בבטן הדג.</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
	<li>במהירות העברת הדגים מוזרק מעבר נקי למיכל מלא במים טריים מערכת כדי לאפשר את הדגים לשחזר. יש לשטוף את המחט פעם אחת עם מאגר x HBSS 1 בין זריקות.</li>
</ol>6. שלאחר הזרקת דגים ניהול
<ol><li>לאחר ההזרקה, להחזיר את הדגים למערכת עם הפעלת זרימת הדם. במידת האפשר, לשמור על דגים שטופלו DOX בנפרד מהמערכת המרכזית כדי למנוע זיהום צולב בין טנקים שונים המשתפים את זרימת הדם.</li>
	<li>מהר את הדג מוזרק עוד 24 שעות להתאוששות. לבחון את הדגים מדי יום במהלך השבוע הראשון. הסר את הדג מת במועד כדי למנוע זיהום דגים אחרים. הערה: דגים מותם בתוך 24 השעות הראשונות צפויות בשל נגעים פיזיים שנגרמו על ידי ההזרקה.</li>
	<li>עוד יותר לשמור על הדגים הדגיש DOX עבור תצפיות האורך. הסר דגים מתים בזמן כדי למנוע זיהומים אחרים דגים במיכל. הערה: מספרי דגים מתועדים ליצירת עקומת הישרדות.</li>
	<li>השתמש מבחני ניסיוני שונים כדי פנוטיפ הדג הדגיש DOX, כגון אקוקרדיוגרפיה30, תפקוד הלב כתב מהונדס קו23, שחייה אתגר26, כימות של שיפוץ פתולוגיים אחרים סמני23.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Octavia, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Doxorubicin-induced+cardiomyopathy:+from+molecular+mechanisms+to+therapeutic+strategies.">Doxorubicin-induced cardiomyopathy: from molecular mechanisms to therapeutic strategies.</a> J Mol Cell Cardiol. 52 (6), 1213-1225 (2012).</li><li>Singal, P. K., Iliskovic, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Doxorubicin-induced+cardiomyopathy.">Doxorubicin-induced cardiomyopathy.</a> N Engl J Med. 339 (13), 900-905 (1998).</li><li>Angsutararux, P., Luanpitpong, S., Issaragrisil, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemotherapy-Induced+Cardiotoxicity:+Overview+of+the+Roles+of+Oxidative+Stress.">Chemotherapy-Induced Cardiotoxicity: Overview of the Roles of Oxidative Stress.</a> Oxid Med Cell Longev. , 795602 (2015).</li><li>Ichikawa, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiotoxicity+of+doxorubicin+is+mediated+through+mitochondrial+iron+accumulation.">Cardiotoxicity of doxorubicin is mediated through mitochondrial iron accumulation.</a> J Clin Invest. 124 (2), 617-630 (2014).</li><li>Zhang, Y. W., Shi, J., Li, Y. J., Wei, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiomyocyte+death+in+doxorubicin-induced+cardiotoxicity.">Cardiomyocyte death in doxorubicin-induced cardiotoxicity.</a> Arch Immunol Ther Exp (Warsz). 57 (6), 435-445 (2009).</li><li>Sawyer, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anthracyclines+and+heart+failure.">Anthracyclines and heart failure.</a> N Engl J Med. 368 (12), 1154-1156 (2013).</li><li>Zhang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+the+molecular+basis+of+doxorubicin-induced+cardiotoxicity.">Identification of the molecular basis of doxorubicin-induced cardiotoxicity.</a> Nat Med. 18 (11), 1639-1642 (2012).</li><li>Dodd, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Doxorubicin+cardiomyopathy+is+associated+with+a+decrease+in+calcium+release+channel+of+the+sarcoplasmic+reticulum+in+a+chronic+rabbit+model.">Doxorubicin cardiomyopathy is associated with a decrease in calcium release channel of the sarcoplasmic reticulum in a chronic rabbit model.</a> J Clin Invest. 91 (4), 1697-1705 (1993).</li><li>Mitry, M. A., Edwards, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Doxorubicin+induced+heart+failure:+Phenotype+and+molecular+mechanisms.">Doxorubicin induced heart failure: Phenotype and molecular mechanisms.</a> Int J Cardiol Heart Vasc. 10, 17-24 (2016).</li><li>Aminkeng, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+coding+variant+in+RARG+confers+susceptibility+to+anthracycline-induced+cardiotoxicity+in+childhood+cancer.">A coding variant in RARG confers susceptibility to anthracycline-induced cardiotoxicity in childhood cancer.</a> Nat Genet. 47 (9), 1079-1084 (2015).</li><li>Deng, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dystrophin-deficiency+increases+the+susceptibility+to+doxorubicin-induced+cardiotoxicity.">Dystrophin-deficiency increases the susceptibility to doxorubicin-induced cardiotoxicity.</a> Eur J Heart Fail. 9 (10), 986-994 (2007).</li><li>Leong, S. L., Chaiyakunapruk, N., Lee, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Candidate+Gene+Association+Studies+of+Anthracycline-induced+Cardiotoxicity:+A+Systematic+Review+and+Meta-analysis.">Candidate Gene Association Studies of Anthracycline-induced Cardiotoxicity: A Systematic Review and Meta-analysis.</a> Sci Rep. 7 (1), 39 (2017).</li><li>Wasielewski, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potential+genetic+predisposition+for+anthracycline-associated+cardiomyopathy+in+families+with+dilated+cardiomyopathy.">Potential genetic predisposition for anthracycline-associated cardiomyopathy in families with dilated cardiomyopathy.</a> Open Heart. 1 (1), e000116 (2014).</li><li>Lebrecht, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dexrazoxane+prevents+doxorubicin-induced+long-term+cardiotoxicity+and+protects+myocardial+mitochondria+from+genetic+and+functional+lesions+in+rats.">Dexrazoxane prevents doxorubicin-induced long-term cardiotoxicity and protects myocardial mitochondria from genetic and functional lesions in rats.</a> Br J Pharmacol. 151 (6), 771-778 (2007).</li><li>QuanJun, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+Effects+of+Dexrazoxane+against+Doxorubicin-Induced+Cardiotoxicity:+A+Metabolomic+Study.">Protective Effects of Dexrazoxane against Doxorubicin-Induced Cardiotoxicity: A Metabolomic Study.</a> PLoS One. 12 (1), e0169567 (2017).</li><li>Seifert, C. F., Nesser, M. E., Thompson, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dexrazoxane+in+the+prevention+of+doxorubicin-induced+cardiotoxicity.">Dexrazoxane in the prevention of doxorubicin-induced cardiotoxicity.</a> Ann Pharmacother. 28 (9), 1063-1072 (1994).</li><li>Adams, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+Galphaq+signaling:+a+common+pathway+mediates+cardiac+hypertrophy+and+apoptotic+heart+failure.">Enhanced Galphaq signaling: a common pathway mediates cardiac hypertrophy and apoptotic heart failure.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 95 (17), 10140-10145 (1998).</li><li>Bowles, N. E., Bowles, K. R., Towbin, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+&amp;#34;final+common+pathway&amp;#34;+hypothesis+and+inherited+cardiovascular+disease.+The+role+of+cytoskeletal+proteins+in+dilated+cardiomyopathy.">The &amp;#34;final common pathway&amp;#34; hypothesis and inherited cardiovascular disease. The role of cytoskeletal proteins in dilated cardiomyopathy.</a> Herz. 25 (3), 168-175 (2000).</li><li>Kroumpouzou, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Common+pathways+for+primary+hypertrophic+and+dilated+cardiomyopathy.">Common pathways for primary hypertrophic and dilated cardiomyopathy.</a> Hybrid Hybridomics. 22 (1), 41-45 (2003).</li><li>Towbin, J. A., Bowles, K. R., Bowles, N. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Etiologies+of+cardiomyopathy+and+heart+failure.">Etiologies of cardiomyopathy and heart failure.</a> Nat Med. 5 (3), 266-267 (1999).</li><li>Liu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visnagin+protects+against+doxorubicin-induced+cardiomyopathy+through+modulation+of+mitochondrial+malate+dehydrogenase.">Visnagin protects against doxorubicin-induced cardiomyopathy through modulation of mitochondrial malate dehydrogenase.</a> Sci Transl Med. 6 (266), 266ra170 (2014).</li><li>Asimaki, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+a+new+modulator+of+the+intercalated+disc+in+a+zebrafish+model+of+arrhythmogenic+cardiomyopathy.">Identification of a new modulator of the intercalated disc in a zebrafish model of arrhythmogenic cardiomyopathy.</a> Sci Transl Med. 6 (240), 240ra274 (2014).</li><li>Ding, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Haploinsufficiency+of+target+of+rapamycin+attenuates+cardiomyopathies+in+adult+zebrafish.">Haploinsufficiency of target of rapamycin attenuates cardiomyopathies in adult zebrafish.</a> Circ Res. 109 (6), 658-669 (2011).</li><li>Sun, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+hypertrophy+involves+both+myocyte+hypertrophy+and+hyperplasia+in+anemic+zebrafish.">Cardiac hypertrophy involves both myocyte hypertrophy and hyperplasia in anemic zebrafish.</a> PLoS One. 4 (8), e6596 (2009).</li><li>Sun, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+the+Nkx2.5-Calr-p53+signaling+pathway+by+hyperglycemia+induces+cardiac+remodeling+and+dysfunction+in+adult+zebrafish.">Activation of the Nkx2.5-Calr-p53 signaling pathway by hyperglycemia induces cardiac remodeling and dysfunction in adult zebrafish.</a> Dis Model Mech. 10 (10), 1217-1227 (2017).</li><li>Yang, J., Shah, S., Olson, T. M., Xu, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+GATAD1-Associated+Dilated+Cardiomyopathy+in+Adult+Zebrafish.">Modeling GATAD1-Associated Dilated Cardiomyopathy in Adult Zebrafish.</a> J Cardiovasc Dev Dis. 3 (1), (2016).</li><li>Ding, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trapping+cardiac+recessive+mutants+via+expression-based+insertional+mutagenesis+screening.">Trapping cardiac recessive mutants via expression-based insertional mutagenesis screening.</a> Circ Res. 112 (4), 606-617 (2013).</li><li>Ding, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+modifier+screen+identifies+DNAJB6+as+a+cardiomyopathy+susceptibility+gene.">A modifier screen identifies DNAJB6 as a cardiomyopathy susceptibility gene.</a> JCI Insight. 2 (8), (2017).</li><li>Kinkel, M. D., Eames, S. C., Philipson, L. H., Prince, V. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraperitoneal+injection+into+adult+zebrafish.">Intraperitoneal injection into adult zebrafish.</a> J Vis Exp. (42), (2010).</li><li>Wang, L. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Standardized+echocardiographic+assessment+of+cardiac+function+in+normal+adult+zebrafish+and+heart+disease+models.">Standardized echocardiographic assessment of cardiac function in normal adult zebrafish and heart disease models.</a> Dis Model Mech. 10 (1), 63-76 (2017).</li><li>Desai, V. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+doxorubicin-induced+chronic+cardiotoxicity+in+the+B6C3F1+mouse+model.">Development of doxorubicin-induced chronic cardiotoxicity in the B6C3F1 mouse model.</a> Toxicol Appl Pharmacol. 266 (1), 109-121 (2013).</li><li>Zhu, W., Shou, W., Payne, R. M., Caldwell, R., Field, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mouse+model+for+juvenile+doxorubicin-induced+cardiac+dysfunction.">A mouse model for juvenile doxorubicin-induced cardiac dysfunction.</a> Pediatr Res. 64 (5), 488-494 (2008).</li><li>Chatterjee, K., Zhang, J., Honbo, N., Karliner, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Doxorubicin+cardiomyopathy.">Doxorubicin cardiomyopathy.</a> Cardiology. 115 (2), 155-162 (2010).</li><li>Bang, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+fibroblast-derived+microRNA+passenger+strand-enriched+exosomes+mediate+cardiomyocyte+hypertrophy.">Cardiac fibroblast-derived microRNA passenger strand-enriched exosomes mediate cardiomyocyte hypertrophy.</a> J Clin Invest. 124 (5), 2136-2146 (2014).</li><li>Rassaf, T., Kelm, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protection+from+diabetic+cardiomyopathy+-+putative+role+of+the+retinoid+receptor-mediated+signaling.">Protection from diabetic cardiomyopathy - putative role of the retinoid receptor-mediated signaling.</a> J Mol Cell Cardiol. 59, 179-180 (2013).</li><li>Wahbi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dilated+cardiomyopathy+in+patients+with+mutations+in+anoctamin+5.">Dilated cardiomyopathy in patients with mutations in anoctamin 5.</a> Int J Cardiol. 168 (1), 76-79 (2013).</li><li>Zhou, M. D., Sucov, H. M., Evans, R. M., Chien, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinoid-dependent+pathways+suppress+myocardial+cell+hypertrophy.">Retinoid-dependent pathways suppress myocardial cell hypertrophy.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 92 (16), 7391-7395 (1995).</li><li>Hershman, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Doxorubicin,+cardiac+risk+factors,+and+cardiac+toxicity+in+elderly+patients+with+diffuse+B-cell+non-Hodgkin's+lymphoma.">Doxorubicin, cardiac risk factors, and cardiac toxicity in elderly patients with diffuse B-cell non-Hodgkin's lymphoma.</a> J Clin Oncol. 26 (19), 3159-3165 (2008).</li><li>Silber, J. H., Barber, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Doxorubicin-induced+cardiotoxicity.">Doxorubicin-induced cardiotoxicity.</a> N Engl J Med. 333 (20), 1359-1360 (1995).</li><li>Von Hoff, D. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Risk+factors+for+doxorubicin-induced+congestive+heart+failure.">Risk factors for doxorubicin-induced congestive heart failure.</a> Ann Intern Med. 91 (5), 710-717 (1979).</li><li>Pugach, E. K., Li, P., White, R., Zon, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retro-orbital+injection+in+adult+zebrafish.">Retro-orbital injection in adult zebrafish.</a> J Vis Exp. (34), (2009).</li><li>Zang, L., Morikane, D., Shimada, Y., Tanaka, T., Nishimura, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+protocol+for+the+oral+administration+of+test+chemicals+to+adult+zebrafish.">A novel protocol for the oral administration of test chemicals to adult zebrafish.</a> Zebrafish. 8 (4), 203-210 (2011).</li><li>Collymore, C., Rasmussen, S., Tolwani, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gavaging+adult+zebrafish.">Gavaging adult zebrafish.</a> J Vis Exp. (78), (2013).</li></ol>

המחברים מצהירים אין קונפליקטים של אינטרסים.

המודל של DIC מתקדמת, המינון של 20 מ"ג/ק"ג DOX נקבע ניסיוניים בתור המינון הגבוה גורם המוות דגים משמעותית במהלך 1 wpi אבל עדיין תוצאות במוות דגים וצמצום של תפקוד הלב לאחר wpi 4 (איור 3 ו איור 4C). מנה זו משולה אלה המשמשות לעתים קרובות במודלים DIC מכרסמים (15-25 מ"ג/ק"ג), המינון ה...

דוקסורוביצין (DOX), גם בשם Adriamycin, פותחה כמו תרופה אנטי-אמצעים מאז שנות ה-601,2. עכשיו זה עדיין בשימוש פעיל בשם כימותרפית חשוב עבור קשת רחבה של גידולים. עם זאת, יישום קליני של DOX היה הקשו על ידי שלה רעילות למינון, במיוחד cardiotoxicity מאופיין על ידי הסימפטומים משתנים החל שינויים electrocardiographic ללא תסמינים דלקת כרום הלב ולא מפוצה קרדיומיופתיה 1 , 2. עד כה, הועלו השערות הגדולות לפחות שלושה להסביר DIC, כולל חמצן תגובתי מופעל מינים (ROS)1,3,4,5, עיכוב של טופואיזומראז II-β ( 6,TOP2β)7, ו אפנון של סידן תאיים שחרור1,8,9. לצבירת ראיות גם מרמזת על נטייה גנטית מהווה גורם סיכון מרכזי DIC10,11,12,13. זהויות גנים הקשורים נטיות אלה DIC, לעומת זאת, נותרים אינו מודע לקיומם. Dexrazoxane הוא היחיד אדג'וונט סוכן שאושרו על ידי מינהל המזון והתרופות האמריקני (FDA) לטיפול DIC, אבל עם יישום מוגבל14,15,16, דבר המלמד את הצורך לזהות נוספים אסטרטגיות טיפוליות. מודלים חייתיים של DIC נידונות ולכן למטרות אלו. בשל הנגישות שלהם ואת הפשטות, מחקרים מכניסטית בדגמים DIC יכול באופן פוטנציאלי יש רחבה יותר השפעות על סוגים אחרים של cardiomyopathies: פתוגנזה נפוצה עשוי להיות משותף בין cardiomyopathies של חבלות מסיבות שונות, במיוחד בזמן מאוחר יותר שלבים פתולוגיים17,18,19,20.
בנוסף מודלים מכרסם של DIC, פותחו מודלים DIC דג זברה עם תפוקה גבוהה יותר כדי להקל על הגילוי של גורמים גנטיים חדשים והן הרפוי. מודל DIC עובריים הוקם העוברים דג זברה שקוף לסינון תרכובות טיפולית21. בהתחשב בכך cardiomyopathies הן מחלות תחילת למבוגרים עם הפתוגנזה פרוגרסיב, קרדיומיופתיה דג זברה בוגרת מודלים כבר פיתח22,23,24,25,26. אנחנו שנוצר המודל רכשה הראשון הנובע אנמיה כרונית24, ואחריו DIC כמודל קרדיומיופתיה רכשה השני דג זברה בוגרת23של שריר הלב. מצאנו כי הזרקה של סיילין יחיד DOX לתוך דג זברה בוגרת המניע cardiotoxicity המורכב שלב אקוטי בערך בתוך 1 בשבוע שלאחר ההזרקה (wpi), בעקבות שלב כרונית של שריר הלב עד 6 חודשים לאחר ההזרקה. בעוד haploinsufficiency של מטרת rapamycin מכניסטית(mtor) המשפרת את שריר הלב בשלב כרוני, היא מגזימה תמותת דגים בשלב אקוטי, דבר המלמד את הערך של המודל DIC למבוגרים להבחין תלויי-שלב מנגנונים23. אנחנו עוד יותר הוכיח כי המודל DIC למבוגרים יכול לשמש כדי להדגיש אוסף של דג זברה insertional לב (ZIC) המוטנטים שנוצרו באמצעות גישה המבוסס על transposon מוטגנזה מכוונת insertional27. מסך פיילוט זיהה 3 גנים ידועים של שריר הלב, כמו גם DnaJ (Hsp40) homolog, תת משפחה B וחבר 6b (dnajb6b) כמו חדש DIC הרגישות גנים28. לכן, הדור של המודל DIC למבוגרים בדג זברה הוביל מתודולוגיה חדשה המאפשרת זיהוי ממגבילי גנטיים עבור DIC, אשר משלים את הגנום כולו האגודה קיים מחקר (GWAS) ואת לוקוס תכונה כמותית (QTL באופן שיטתי ) ניתוח.
בתקופת הדור, יישומו של המודל DIC דג זברה למבוגרים, הבחנו וריאציות משמעותית בקרב חוקרים שונים ו/או אפילו בין זריקות שונות שביצע החוקר אותו. הטבע האורך של המודל מטיל אתגרים רישום תוצאות של חוקרים שונים, את תהליך פתרון הבעיות רציפים. כדי להקל על השימוש פשוט בתדר קרדיומיופתיה מתח שיטה זו על ידי קהילת המחקר, אנו מתארים את הפרוטוקול שלנו בפירוט, נוכח שני סוגים של הזרקת ה-IP, ולדון שיקולים להפחית וריאציות בקרב חוקרים שונים.

<table><tbody><tr><td>Crossing tank</td><td>Aquaneering</td><td>ZHCT100</td><td>Fish breeding</td></tr><tr><td>Incubator</td><td>ThermoFisher</td><td></td><td>Maintaining embryo</td></tr><tr><td>3 L medium tank</td><td>Aquaneering</td><td>ZT280</td><td>Maintaining fish</td></tr><tr><td>Paramecia</td><td>Carolina</td><td>131560</td><td>Food for juvenile fish</td></tr><tr><td>Live hatched brine shrimp</td><td>in house</td><td></td><td>Food for adult fish</td></tr><tr><td>Doxorubicin hydrochloride</td><td>Sigma</td><td>D1515-10MG</td><td></td></tr><tr><td>1.5 ml safe-lock tube</td><td>Eppendorf</td><td>No. 022363204</td><td>For drug storage</td></tr><tr><td>Aluminum foil paper</td><td>Fisher</td><td>1213104</td><td>For preventing light exposure</td></tr><tr><td>Proteinase K</td><td>Roche</td><td>No. 03115887001</td><td>For dechorionating embryo</td></tr><tr><td>Hank&#039;s balanced salt solution (HBBS)</td><td>ThermoFisher</td><td>14025076</td><td>Vehicle for DOX</td></tr><tr><td>100 mm petri dish</td><td>Falcon</td><td>431741</td><td></td></tr><tr><td>10 &amp;mu;L NanoFil micro-syringe</td><td>WPI</td><td>NANOFIL</td><td>For injection</td></tr><tr><td>34 gauge needle</td><td>WPI</td><td>NF34BV-2</td><td>For injection</td></tr><tr><td>Tricaine</td><td>Argent</td><td>MS-222</td><td>Anesthetizing fish</td></tr><tr><td>96 well plate</td><td>Costar</td><td>3539</td><td>For embryo drug treatment</td></tr><tr><td>Transfer pipette</td><td>Bel-art product</td><td>F37898</td><td>For transfering embryo</td></tr></tbody></table>

a doxorubicin-induced cardiomyopathy model in adult zebrafish

דג זברה בוגרת גנטית נגיש (רזבורה rerio) יותר ויותר שימש כמודל חוליות להבנת מחלות אנושיות כגון שריר הלב. בשל הנוחות amenability כדי מניפולציות גנטיות תפוקה גבוהה, הדור של קרדיומיופתיה רכשה מודלים, כגון המודל דוקסורוביצין-induced קרדיומיופתיה (DIC) בדג זברה למבוגרים, פותח את דלתות השדרות מחקר חדש, לרבות גילוי סימני פיסוק שריר הלב באמצעות בדיקה גנטית קדימה. שונה מהמודל DIC דג זברה עובריים, חריפה הראשונית והן לאחר מכן כרונית השלבים של שריר הלב יכול להיקבע במודל DIC דג זברה למבוגרים, המאפשרת לימוד מנגנוני איתות תלויי-הבמה אסטרטגיות טיפוליות. עם זאת, ניתן להשיג תוצאות משתנה עם המודל הנוכחי, אפילו בידי חוקרים מנוסים. כדי להקל על יישום העתידי של המודל DIC, אנו מציגים פרוטוקול מפורט כיצד ליצור מודל זה DIC בדג זברה בוגרת. ומתארות שתי דרכים חלופיות בקרום הבטן הזרקה (IP). בהמשך נדון אפשרויות כיצד להפחית וריאציות כדי להשיג תוצאות אמינות ואת לספק הצעות כיצד לפרש את התוצאות בהתאם.

כאן, שתי שיטות לביצוע הזרקה IP למודל DIC בדג זברה בוגרת מוצגים. תוך שימוש קלאסי, מבוססת IP הזרקת שיטת29, צוין כי הפתרון DOX מוזרק (צבע אדום) יכול לפעמים מתריסה החוצה מהמיקום שבו חדרו המחט. הזריקה IP חלופית משתמש במיקום שונה לתקוע מחט זה 3-4 מ מ בלבד הצפק איפה DOX הוא שוחרר ...

Watch this Scientific Journal Video about A Doxorubicin-induced Cardiomyopathy Model in Adult Zebrafish at JoVE.com

A Doxorubicin-induced Cardiomyopathy Model in Adult Zebrafish

מודל דוקסורוביצין-induced קרדיומיופתיה בדג זברה למבוגרים

שיטה לייצר מודל קרדיומיופתיה דוקסורוביצין-induced למבוגרים דג זברה (רזבורה rerio) מתואר כאן. שתי דרכים חלופיות של הזרקת בקרום הבטן מוצגים ואת התנאים כדי להפחית וריאציות בין קבוצות שונות ניסיוני הנדונים.

The genetically accessible adult zebrafish (Danio rerio) has been increasingly used as a vertebrate model for understanding human diseases such as ...

a-doxorubicin-induced-cardiomyopathy-model-in-adult-zebrafish

Research

JoVE Journal

Medicine

9.7K Views.  Mayo Clinic Graduate School of Biomedical Sciences. שיטה לייצר מודל קרדיומיופתיה דוקסורוביצין-induced למבוגרים דג זברה (רזבורה rerio) מתואר כאן. שתי דרכים חלופיות של הזרקת בקרום הבטן מוצגים ואת התנאים כדי להפחית וריאציות בין קבוצות שונות ניסיוני הנדונים.

Video: A Doxorubicin-induced Cardiomyopathy Model in Adult Zebrafish

Induction of Myocardial Infarction in Adult Zebrafish Using Cryoinjury

The mammalian heart is incapable of significant regeneration following an acute injury such as myocardial infarction1. By contrast, urodele amphibians and teleost fish retain a remarkable capacity for cardiac regeneration with little or no scarring throughout life2,3. It is not known why only some non-mammalian vertebrates can recreate a complete organ from remnant tissues4,5. To understand the molecular and cellular differences between regenerative responses in different species, we need to use similar approaches for inducing acute injuries.
In mammals, the most frequently used model to study cardiac repair has been acute ischemia after a ligation of the coronary artery or tissue destruction after cryoinjury6,7. The cardiac regeneration in newts and zebrafish has been predominantly studied after a partial resection of the ventricular apex2,3. Recently, several groups have established the cryoinjury technique in adult zebrafish8-10. This method has a great potential because it allows a comparative discussion of the results obtained from the mammalian and non-mammalian species.
Here, we present a method to induce a reproducible disc-shaped infarct of the zebrafish ventricle by cryoinjury. This injury model is based on rapid freezing-thawing tissue, which results in massive cell death of about 20% of cardiomyocytes of the ventricular wall. First, a small incision was made through the chest with iridectomy scissors to access the heart. The ventricular wall was directly frozen by applying for 23-25 seconds a stainless steel cryoprobe precooled in liquid nitrogen. To stop the freezing of the heart, fish water at room temperature was dropped on the tip of the cryoprobe. The procedure is well tolerated by animals, with a survival rate of 95%.
To characterize the regenerative process, the hearts were collected and fixed at different days after cryoinjury. Subsequently, the specimen were embedded for cryosectioning. The slides with sections were processed for histological analysis, in situ hybridization and immunofluorescence. This undertaking enhances our understanding of the factors that are required for the regenerative plasticity in the zebrafish, and provide new insights into the machinery of cardiac regeneration. A conceptual and molecular understanding of heart regeneration in zebrafish will impact both developmental biology and regenerative medicine.

Zebrafish represents a valuable model to study the mechanisms of heart regeneration in vertebrates. Here, we present a protocol for induction of a heart infarct in adult zebrafish using cryoinjury. This method results in massive cell death within 20% of the ventricular wall, similar to that observed in mammalian infarcts.

אינדוקציה של אוטם שריר הלב ב דג הזברה למבוגרים באמצעות Cryoinjury

The mammalian heart is incapable of significant regeneration following an acute injury such as myocardial infarction1. By contrast, urodele amphibians and ...

Displacement Analysis of Myocardial Mechanical Deformation (DIAMOND) Reveals Segmental Heterogeneity of Cardiac Function in Embryonic Zebrafish

Zebrafish are increasingly utilized as a model organism for cardiomyopathies and regeneration. Current methods evaluating cardiac function fail to reliably detect segmental mechanics and are not readily feasible in zebrafish. Here we present a semiautomated, open-source method for the quantitative assessment of four-dimensional (4D) segmental cardiac function: displacement analysis of myocardial mechanical deformation (DIAMOND). Transgenic embryonic zebrafish were imaged in vivo using a light-sheet fluorescence microscopy system with 4D cardiac motion synchronization. Acquired 3D digital hearts were reconstructed at end-systole and end-diastole, and the ventricle was manually segmented into binary datasets. Then, the heart was reoriented and isotropically resampled along the true short axis, and the ventricle was evenly divided into eight portions (I&#8211;VIII) along the short axis. Due to the different resampling planes and matrices at end-systole and end-diastole, a transformation matrix was applied for image registration to restore the original spatial relationship between the resampled systolic and diastolic image matrices. After image registration, the displacement vector of each segment from end-systole to end-diastole was calculated based on the displacement of mass centroids in three dimensions (3D). DIAMOND shows that basal myocardial segments adjacent to the atrioventricular canal undergo the highest mechanical deformation and are the most susceptible to doxorubicin-induced cardiac injury. Overall, DIAMOND provides novel insights into segmental cardiac mechanics in zebrafish embryos beyond traditional ejection fraction (EF) under both physiological and pathological conditions.

Displacement Analysis of Myocardial Mechanical Deformation DIAMOND Reveals Segmental Heterogeneity of Cardiac Function in Embryonic Zebrafish

The goal of this protocol is to detail a novel method for the assessment of segmental cardiac function in embryonic zebrafish under both physiological and pathological conditions.

ניתוח הזחה של אוטם שריר הלב מכני (יהלום) חושף Segmental של תפקוד הלב של מעובריים בדג

Zebrafish are increasingly utilized as a model organism for cardiomyopathies and regeneration. Current methods evaluating cardiac function fail to ...

Developmental Biology

High-Frequency Ultrasound Echocardiography to Assess Zebrafish Cardiac Function

The zebrafish (Danio rerio) has become a very popular model organism in cardiovascular research, including human cardiac diseases, largely due to its embryonic transparency, genetic tractability, and amenity to rapid, high-throughput studies. However, the loss of transparency limits heart function analysis at the adult stage, which complicates modeling of age-related heart conditions. To overcome such limitations, high-frequency ultrasound echocardiography in zebrafish is emerging as a viable option. Here, we present a detailed protocol to assess cardiac function in adult zebrafish by non-invasive echocardiography using high-frequency ultrasound. The method allows visualization and analysis of zebrafish heart dimension and quantification of important functional parameters, including heart rate, stroke volume, cardiac output, and ejection fraction. In this method, the fish are anesthetized and kept underwater and can be recovered after the procedure. Although high-frequency ultrasound is an expensive technology, the same imaging platform can be used for different species (e.g., murine and zebrafish) by adapting different transducers. Zebrafish echocardiography is a robust method for cardiac phenotyping, useful in the validation and characterization of disease models, particularly late-onset diseases; drug screens; and studies of heart injury, recovery, and regenerative capacity.

We describe a protocol to assess heart morphology and function in adult zebrafish using high-frequency echocardiography. The method allows visualization of the heart and subsequent quantification of functional parameters, such as heart rate (HR), cardiac output (CO), fractional area change (FAC), ejection fraction (EF), and blood inflow and outflow velocities.

אולטרסאונד בתדירות גבוהה אקו קרדיוגרפיה כדי להעריך Zebrafish תפקוד הלב

The zebrafish (Danio rerio) has become a very popular model organism in cardiovascular research, including human cardiac diseases, largely due to its ...

Heart Dissection in Larval, Juvenile and Adult Zebrafish, Danio rerio

Zebrafish have become a beneficial and practical model organism for the study of embryonic heart development (see recent reviews1-6), however, work examining post-embryonic through adult cardiac development has been limited7-10. Examining the changing morphology of the maturing and aging heart are restricted by the lack of techniques available for staging and isolating juvenile and adult hearts. In order to analyze heart development over the fish's lifespan, we dissect zebrafish hearts at numerous stages and photograph them for further analysis11. The morphological features of the heart can easily be quantified and individual hearts can be further analyzed by a host of standard methods. Zebrafish grow at variable rates and maturation correlates better with fish size than age, thus, post-fixation, we photograph and measure fish length as a gauge of fish maturation. This protocol explains two distinct, size dependent dissection techniques for zebrafish, ranging from larvae 3.5mm standard length (SL) with hearts of 100&mu;m ventricle length (VL), to adults, with SL of 30mm and VL 1mm or larger. Larval and adult fish have quite distinct body and organ morphology. Larvae are not only significantly smaller, they have less pigment and each organ is visually very difficult to identify. For this reason, we use distinct dissection techniques.
We used pre-dissection fixation procedures, as we discovered that hearts dissected directly after euthanization have a more variable morphology, with very loose and balloon like atria compared with hearts removed following fixation. The fish fixed prior to dissection, retain in vivo morphology and chamber position (data not shown). In addition, for demonstration purposes, we take advantage of the heart (myocardial) specific GFP transgenic Tg(myl7:GFP)twu34 (12), which allows us to visualize the entire heart and is particularly useful at early stages in development when the cardiac morphology is less distinct from surrounding tissues. Dissection of the heart makes further analysis of the cell and molecular biology underlying heart development and maturation using in situ hybridization, immunohistochemistry, RNA extraction or other analytical methods easier in post-embryonic zebrafish. This protocol will provide a valuable technique for the study of cardiac development maturation and aging.

Heart Dissection in Larval, Juvenile and Adult Zebrafish, Danio rerio

A clear, standardized method for dissection and isolation of the zebrafish heart at multiple developmental stages are described. Annotation and quantification techniques are also discussed.

הלב Dissection ב הזחל, דג הזברה לנוער ו למבוגרים, Danio rerio</em

Zebrafish have become a beneficial and practical model organism for the study of embryonic heart development (see recent reviews1-6), however, work ...

Biology

Immunostaining of Dissected Zebrafish Embryonic Heart 

Zebrafish embryo becomes a popular in vivo vertebrate model for studying cardiac development and human heart diseases due to its advantageous embryology and genetics 1,2. About 100-200 embryos are readily available every week from a single pair of adult fish. The transparent embryos that develop ex utero make them ideal for assessing cardiac defects 3. The expression of any gene can be manipulated via morpholino technology or RNA injection 4. Moreover, forward genetic screens have already generated a list of mutants that affect different perspectives of cardiogenesis 5. 
Whole mount immunostaining is an important technique in this animal model to reveal the expression pattern of the targeted protein to a particular tissue 6. However, high resolution images that can reveal cellular or subcellular structures have been difficult, mainly due to the physical location of the heart and the poor penetration of the antibodies. 
 Here, we present a method to address these bottlenecks by dissecting heart first and then conducting the staining process on the surface of a microscope slide. To prevent the loss of small heart samples and to facilitate solution handling, we restricted the heart samples within a circle on the surface of the microscope slides drawn by an immEdge pen. After the staining, the fluorescence signals can be directly observed by a compound microscope. 
Our new method significantly improves the penetration for antibodies, since a heart from an embryonic fish only consists of few cell layers. High quality images from intact hearts can be obtained within a much reduced procession time for zebrafish embryos aged from day 2 to day 6. Our method can be potentially extended to stain other organs dissected from either zebrafish or other small animals.

Immunostaining of Dissected Zebrafish Embryonic Heart

A rapid way to conduct immunostaining of zebrafish embryonic heart is described. Compared to the whole mount immunostaining approach, this method dramatically increases the penetration of the antibodies, which allows obtaining high resolution images that reveal cellular/subcellular structures in the heart within a much reduced processing time.

Immunostaining הלב גזור עוברי דג הזברה

Zebrafish embryo becomes a popular in vivo vertebrate model for studying cardiac development and human heart diseases due to its advantageous embryology ...

Recovery of Adult Zebrafish Hearts for High-throughput Applications

Use of the zebrafish model system for studying development, regeneration, and disease is expanding toward use of adult hearts for cell dissociation and purification of RNA, DNA, and proteins. All of these applications demand the rapid recovery of significant numbers of zebrafish hearts to avoid gene regulatory, metabolic, and other changes that begin after death. Adult zebrafish hearts are also required for studying heart structure for a variety of mutants and for studying heart regeneration. However, the traditional zebrafish heart dissection is slow and difficult and requires specialized tools, making large-scale dissection of adult zebrafish hearts tedious. Traditional methods also harbor the risk of damaging the heart during the dissection. Here, we describe a method for dissection of adult zebrafish hearts that is fast, reproducible, and preserves heart architecture. Furthermore, this method does not require specialized tools, is painless for the zebrafish, can be performed on fresh or fixed specimens, and can be performed on zebrafish as young as one month old. The approach described expands the use of adult zebrafish for cardiovascular research.

Use of zebrafish for cardiovascular research is expanding towards research on adult hearts. For these applications, quick and simple isolation of cardiac tissues is key to avoid post-mortem changes and to obtain an adequate number of samples. Here, we describe a fast and reproducible method for dissecting adult zebrafish hearts.

שחזור של לבבות למבוגרים דג הזברה עבור יישומי תפוקה גבוהה

Use of the zebrafish model system for studying development, regeneration, and disease is expanding toward use of adult hearts for cell dissociation and ...

In Vivo Surface Electrocardiography for Adult Zebrafish

The electrocardiogram waveforms of adult zebrafish and those of humans are remarkably similar. These electrocardiogram similarities enhance the value of zebrafish not only as a research model for human cardiac electrophysiology and myopathies but also as a surrogate model in high throughput pharmaceutical screening for potential cardiotoxicities to humans, such as QT prolongation. As such, in vivo electrocardiography for adult zebrafish is an electrical phenotyping tool that is necessary, if not indispensable, for cross-sectional or longitudinal in vivo electrophysiological characterizations. However, too often, the lack of a reliable, practical, and cost-effective recording method remains a major challenge preventing this in vivo diagnostic tool from becoming more readily accessible. Here, we describe a practical, straightforward approach to in vivo electrocardiography for adult zebrafish using a low-maintenance, cost-effective, and comprehensive system that yields consistent, reliable recordings. We illustrate our protocol using healthy adult male zebrafish of 12-18 months of age. We also introduce a rapid real-time interpretation strategy for quality validation to ensure data accuracy and robustness early in the electrocardiogram recording process.

Here, we present a reliable, minimally invasive, and cost-effective method to record and interpret electrocardiograms in live anesthetized adult zebrafish.

ב אלקטרוקרדיוגרפיה למבוגרים בלבד Vivo

The electrocardiogram waveforms of adult zebrafish and those of humans are remarkably similar. These electrocardiogram similarities enhance the value of ...

הזרקה תוך צפקית אופטימלית להעברת תרכובות בדגי זברה בוגרים

An Intraperitoneal Injection Technique in Adult Zebrafish that Minimizes Body Damage and Associated Mortality

The adult zebrafish (Danio rerio), which is genetically accessible, is being employed as a valuable vertebrate model to study human disorders such as cardiomyopathy. Intraperitoneal (IP) injection is an important method that delivers compounds to the body for either testing therapeutic effects or generating disease models such as doxorubicin-induced cardiomyopathy (DIC). Currently, there are two methods of IP injection. Both&#160;methods have limitations when handling toxic compounds such as doxorubicin, which result in side effects manifesting as severe damage to the body shape and fish death. While these shortcomings could be overcome by extensive investigator training, a new IP injection method that has minimal side effects is desirable. Here, a unique IP injection method that is able to handle toxic compounds is reported. Consistently reduced cardiac function can result without incurring significant fish death. The technique can be easily mastered by researchers who have minimal experience with adult zebrafish.

מחבר זרקור: שיטת הזרקה תוך צפקית חדשנית עבור מודלים של רעילות לב של דגי זברה

A new intraperitoneal (IP) injection method in adult zebrafish is described. When handling toxic compounds such as doxorubicin, this procedure is more effective than the two previously reported IP methods. The technique is designed to be easily adopted by researchers with limited experience in the zebrafish model.

טכניקת הזרקה תוך צפקית בדגי זברה בוגרים הממזערת נזקי גוף ותמותה נלווית

The adult zebrafish (Danio rerio), which is genetically accessible, is being employed as a valuable vertebrate model to study human disorders such as ...

מודל דוקסורוביצין-induced קרדיומיופתיה בדג זברה למבוגרים

Summary

Explore More Videos

אינדוקציה של אוטם שריר הלב ב דג הזברה למבוגרים באמצעות Cryoinjury

ניתוח הזחה של אוטם שריר הלב מכני (יהלום) חושף Segmental של תפקוד הלב של מעובריים בדג

אולטרסאונד בתדירות גבוהה אקו קרדיוגרפיה כדי להעריך Zebrafish תפקוד הלב

הלב Dissection ב הזחל, דג הזברה לנוער ו למבוגרים, Danio rerio

Immunostaining הלב גזור עוברי דג הזברה

שחזור של לבבות למבוגרים דג הזברה עבור יישומי תפוקה גבוהה

ב אלקטרוקרדיוגרפיה למבוגרים בלבד Vivo

טכניקת הזרקה תוך צפקית בדגי זברה בוגרים הממזערת נזקי גוף ותמותה נלווית

טכניקת הזרקה תוך צפקית בדגי זברה בוגרים הממזערת נזקי גוף ותמותה נלווית

טכניקת הזרקה תוך צפקית בדגי זברה בוגרים הממזערת נזקי גוף ותמותה נלווית