שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום אספקת התרופות, כגון משלוח ממוקד של טיפולים לסרטן אנושי ואת שליה cystoblast. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שזו שיטה פשוטה לשחזור לסנתז פפטידים נדנים בחלקיקים אחרים. כדי להתחיל, להוסיף שלושה מילימטרים של ארבעה אחוז אתנול לצינור צנטריפוגה סטרילי 10 מיליליטר.
לאחר מכן, להוסיף 90 מיקרוגרם של פתרון מלאי לציטין סויה, 210 מיקרוגרם של פתרון מלאי חומצה DSPE-PEG-carboxylic, ו 750 מיקרוגרם של פתרון מלאי DOX. השתמש במזרק מיליליטר אחד כדי pipette שני מיליגרם של פתרון מלאי PLGA. מניחים את צינור הצנטריפוגה באמבט קרח על מעבד קולי sonicate במשך שתי דקות.
לאחר מכן, להוסיף פתרון מניות PLGA טיפה חכם לתוך צינור צנטריפוגה. כדי לטהר את DNPs, השתמש במסנן צנטריפוגה כדי לשטוף את הפתרון במאגר MES טוחנת 0.1. לאחר מכן, צנטריפוגה הפתרון ב 1000 G במשך שלוש דקות בארבע מעלות צלזיוס.
כדי להתחיל בהפעלת אסתר, הוסף 0.4 מיליגרם של EDC למיליליטר אחד של DNPs. לאחר מכן, להוסיף 0.24 מיליגרם של NHS לתגובה. לאחר מכן, אפשר לתגובה להתרחש עד שעה בטמפרטורת החדר בחושך.
לאחר מכן, מערבבים את מרכיבי התגובה ביסודיות ומ מניחים את התגובה על שייקר. כדי להתחיל את תגובת המין, השתמש PBS כדי להגדיל את pH חיץ מ 7.2 ל 7.5. לאחר מכן, להוסיף 0.5 מיליגרם של פפטיד מיקוד pICSA לפתרון התגובה.
מערבבים היטב את הפתרון ומ מניחים אותו על שייקר. לאחר מכן, לאפשר לתגובה להמשיך בארבע מעלות צלזיוס לילה בחושך. למחרת, מלאו שקיות דיאליזה בתתכנון ההטיה.
לטהר את DNPs pICSA עם מאגר PBS בטמפרטורת החדר במשך 24 שעות בחושך. לאחר culturing תאים על פי פרוטוקול הטקסט, להסיר את המדיה ולהוסיף מיליליטר אחד של מדיה טרייה, קרה עם חמישה אחוזים FBS ו pICSA DNPs או DNPs. לאחר מכן, הדגירה את תערובת התא והננו-חלקיקים במשך שעה אחת בארבע מעלות צלזיוס.
לאחר מכן, להסיר את המדיה ולשטוף את התאים שלוש פעמים עם PBS. לאחר מכן, מוסיפים מיליליטר אחד של מדיה טרייה ו דגירה התאים במשך 30 דקות ב 37 מעלות צלזיוס. לאחר מכן, להסיר את המדיה ולשטוף את התאים שלוש פעמים עם PBS.
לאחר מכן, מוסיפים שני מיליליטר של קור, ארבעה אחוז PFA ו דגירה את התערובת בטמפרטורת החדר במשך 10 דקות. הסר את PFA ולשטוף את התאים עם שני מיליליטר של PBS. לאחר מכן, להוסיף מיליליטר אחד של PBS עם DAPI עבור כתמי גרעינים.
אפשר לתערובת דגירה בטמפרטורת החדר במשך 10 דקות. לבסוף, מוסיפים מדיום הרכבה ומדמיין את הפלואורסצנטיות במיקרוסקופ פלואורסצנטי. באמצעות פרוטוקול זה, DNPs הוכנו בהצלחה והוכנסו ל- pICSA BP. לאחר ההתייחדות, קוטר ה-DNPs הראשי עלה לכ-109 ננומטר.
תמונות TEM של DNPs ו DNPs pICSA הראו כי החלקיקים היו מפוזרים היטב ובדרך כלל הפגינו מורפולוגיה כדורית. פוטנציאל הזטה של הננו-חלקיקים היה שלילי 20.1 ו-29.9 מילי-וולט, מה שמצביע על כך שהננו-חלקיקים היו יציבים מאוד. ההסתערות על ספיגת התאים JEG3 הצביעה על ה-PICSA DNPs הקשורים לתאי JEG3 בתוך 30 דקות.
לכן, BP pICSA היה נדמד ביעילות על פני השטח. בעת ניסיון הליך זה, חשוב לזכור sonicate את התערובת במשך 1 עד 2 דקות לפני הוספת PLGA. בעקבות הליך זה, ניתן לבצע את השיטות שלנו כגון בדיקת HPLC על מנת לקבוע את יעילות ההנקה בצורה מדויקת יותר.
לאחר התפתחותה, טכניקה זו סללה את הדרך לחוקרים בתחום הביולוגיה הרבייה כדי לבחון את האפשרות של טיפול שליה מיקוד בסיבוכי הריון.
