胎盤のコンドロイチンの合成とキャラクタリゼーション (plCSA) の硫酸塩 - 脂質のターゲット設定 - 高分子ナノ粒子

この方法は、ヒト癌および胎盤細胞芽細胞への治療の標的送達など、薬物送達分野の重要な質問に答えるのに役立つ。この技術の主な利点は、他の粒子に結合したペプチドを合成する簡便で再現性の高い方法である点である。まず、滅菌10ミリリットル遠心管に4%エタノールの3ミリメートルを加えます。

次に、90マイクログラムの大豆レシチンストック溶液、210マイクログラムのDSPE-PEG-カルボン酸ストック溶液、および750マイクログラムのDOXストック溶液を添加します。PLGAストック溶液の2ミリグラムをピペットに1ミリリットルのシリンジを使用してください。遠心管を超音波処理機の氷浴に入れ、2分間超音波処理します。

次に、PLGAストック溶液を遠心管に滴下して加えます。DMPを精製するには、遠心分離フィルターを使用して溶液を0.1モルMESバッファーで洗浄します。次いで、摂氏4度で3分間1000Gで溶液を遠心する。

エステル活性化を開始するには, DMP の 1 ミリリットルに EDC の 0.4 ミリグラムを追加します。.その後、反応にNHSの0.24ミリグラムを追加します。次いで、暗闇の中で室温で1時間まで反応を起こさせます。

その後、反応成分を十分に混ぜ合わせ、シェーカーに反応を入れます。アミン反応を開始するには、PBSを使用してバッファー pH を 7.2 から 7.5 に増やします。次いで、反応溶液に0.5ミリグラムのピチカ標的ペプチドを加える。

溶液をよく混ぜて、シェーカーの上に置きます。その後、暗闇の中で一晩摂氏4度で反応を進行させます。翌日、コンジュゲート溶液で透析袋を充填します。

暗所で24時間室温でPBSバッファーでピクスカDMPを精製します。テキストプロトコルに従って細胞を培養した後、メディアを取り除き、FBSとPICSA DMPまたはDMPを5%の新鮮なコールドメディア1ミリリットル追加します。次に、細胞とナノ粒子混合物を摂氏4度で1時間インキュベートする。

この後、培地を取り出し、PBSで細胞を3回洗浄します。その後、新鮮な培地を1ミリリットル加え、30分間摂氏37度で培養します。この後、培地を取り出し、PBSで細胞を3回洗浄します。

その後、2ミリリットルの冷たい、4%のPFAを加え、室温で10分間インキュベートします。PFAを取り出し、2ミリリットルのPBSで細胞を洗います。次に、核染色用のDAPIを用いてPBSを1ミリリットル加える。

混合物を室温で10分間インキュベートする。最後に、取り付け媒体を加え、蛍光顕微鏡で蛍光を画像化します。このプロトコルを使用して、DMP は正常に準備され、PICSA BP に結合されました。結合後、一次DMPの直径は約109ナノメートルに増加した。

DDNPとピクスカDMPのTEM画像は、粒子が十分に分散し、一般的に球面形態を実証していることを示した。ナノ粒子のゼータ電位は20.1ミリボルトと29.9ミリボルトの陰性であり、ナノ粒子が非常に安定していたことを示している。JEG3細胞取り込みアッセイは、30分以内に株中のジクサのDMPがJEG3細胞に結合することを示した。

そのため、ピクスABPを表面に効率的に共役させた。この手順を試みている間、PLGAを追加する前に1〜2分間混合物を超音波処理することを忘れないでください。この手順に従って、HPLCアッセイのような我々の方法は、より正確に活用効率を決定するために行うことができる。

その開発後、この技術は、生殖生物学の分野の研究者が妊娠合併症における胎盤標的治療の可能性を探求する道を開いた。