קבלת שברי כלי דם סטרומה, או SVFs, מ lipoaspirates דורש עיכול עם קולגן, אשר מגביר את הסיכון לזיהום ביולוגי. יש לפתח דרך טובה יותר להשיג SVF ללא קולגן. טכניקות אלה מאפשרות לנו להשיג את ה- SVF במטריצה החוץ-תאית המקורית שלו באמצעות תהליך מכני פשוט.
הדגמת ההליך תהיה שיהאנג צ'ן, סטודנטית לתואר שני מהמעבדה שלנו. לאחר קבלת דגימות השומן, להעביר את lipoaspirates לתוך צינור אחד 50 מיליליטר, ולאפשר את השומן שנקטף כדי לצייד במשך 10 דקות. לאחר מכן, השתמש פיפטה קצה רחב כדי למשוך את השומן מהשכבה העליונה של הצינור לתוך צינור חדש 50 מיליליטר ולסובב את השומן על ידי צנטריפוגה.
השכבה העליונה בצינור היא שבר השומן של קולמן. להעביר את 2/3 העליון של שומן קולמן לתוך צינור חדש 15 מיליליטר. חלק זה נחשב שומן בצפיפות נמוכה.
מעבירים את השלישי התחתון של שומן קולמן לצינור שני של 15 מיליליטר. חלק זה נחשב שומן בצפיפות גבוהה. כדי לייצר ג'ל שבר כלי דם סטרומה מטריצה חוץ תאית מהשומן בצפיפות נמוכה, השתמש בשני מזרקים 20 מיליליטר המחוברים על ידי נקבה למחבר מנעול לורה נקבה כדי intershift 10 מיליליטר של שומן בצפיפות נמוכה.
זהו צעד המפתח להשמדת אדיפוזיטים. המהירות והזמן בו מתבצעת הסטת האינטרסירינג תורמים לאיכות המוצר הסופי. לאחר הפגישה האחרונה intershift, לאסוף את השומן על ידי צנטריפוגה ולהעביר את שכבת השמן העליון לצינור 15 מיליליטר.
ואז להעביר את מטריצה דביקה באמצע סטרומל שבר כלי דם שכבת ג'ל לתוך צינור חרוט חדש 15 מיליליטר. כדי לייצר ג'ל שבר כלי דם סטרומה מטריצה חוץ תאית מן השומן בצפיפות גבוהה, להוסיף שני מיליליטר של שבר שמן בצפיפות נמוכה לחמישה מיליליטר של מדגם שומן בצפיפות גבוהה. לסבך את השומן המעורב כפי שהוכח עד flocculate נצפתה בתוך אמולסיה.
לאסוף את flocculate על ידי צנטריפוגה להשליך את שכבת השמן העליון. לאחר מכן לאסוף את השכבה האמצעית דביק לערבב את השבר הזה עם צפיפות נמוכה מטריצה חוץ תאית סטרומה שבר כלי דם ג'ל מדגם. לאחר עיבוד שומן קולמן כדי מטריצה חוץ תאית ג'ל שבר כלי דם סטרומל, נפח השמן מושלך תופס 80% של הנפח הסופי, ורק 20% של רקמת השומן השתמר מתחת לשכבת השמן נחשב מטריצה חוץ תאית מטריצה סטרומה שבר כלי דם ג'ל.
ג'ל שבר כלי דם סטרומה מטריצה חוץ תאית יש מרקם חלק דמוי נוזל המאפשר לו לעבור דרך מחט בסדר 27 מד. עם זאת, שומן קולמן מורכב מבנה שומן אינטגרלי עם סיבים גדולים שיכולים רק לעבור 18 מד cannula. ביום השלישי לאחר ההשתלה, מספר גדול של טרום adipocytes בגודל קטן עם טיפות שומנים תאיים מרובים, רקמת חיבור נרחבת היטב vascularized, ותאים דלקתיים הסתננו מופיעים.
החל מהיום ה-15, מספר התאים הדלקתיים מתחיל לרדת בהדרגה, והאדיפוזיטים מתחילים להתבגר. ביום 90, רוב רקמת החיבור של כלי הדם בשתלים הוחלפה באדיפוזיטים בוגרים. מטריצה חוץ-תאית שתלי ג'ל שבר כלי דם מכילים גם כמה adipocytes חיובי perilipin שלושה ימים לאחר ההשתלה, עם טרום adipocytes בגודל קטן, עם טיפות שומנים תאיים מרובים מתחילים להופיע ביום 15.
בכל שדה של היום 90 מטריצה חוץ תאית סטרומה שבר כלי דם חלקי ג'ל קטעים להציג adipocytes חיובי perilipin רבים וכלי דם שנוצרו לאחרונה. ניתן לבצע ציטומטריית זרימה כדי לקבוע את אוכלוסיית התאים במוצר. וסריקת מיקרוסקופ אלקטרונים יכולה להתבצע כדי לדמיין את המיקרו-מבנה של המוצר.
טכניקה זו מספקת שיטה פשוטה עבור מנתחים וחוקרים כדי להשיג מוצר עם ריכוז גבוה של תאים SVF עם סיבי מטריצה חוץ תאית מקורית מרקמה שומן.
