Die Gewinnung stromaler Gefäßfraktionen(SVFs) aus Lipoaspiraten erfordert die Verdauung mit Kollagenase, was das Risiko einer biologischen Kontamination erhöht. Es sollte ein besserer Weg entwickelt werden, SVF ohne Kollagenase zu erhalten. Diese Techniken ermöglichen es uns, den SVF in seiner nativen extrazellulären Matrix durch einen einfachen mechanischen Prozess zu erhalten.
Demonstriert wird das Verfahren von Xihang Chen, einem Grad-Studenten aus unserem Labor. Nach Erhalt der Fettproben die Lipoaspiraten in eine 50-Milliliter-Röhre geben und das geerntete Fett 10 Minuten ausdemieren lassen. Als nächstes verwenden Sie eine Breitspitzenpipette, um das Fett aus der obersten Schicht des Rohres in ein neues 50-Milliliter-Rohr zu ziehen und das Fett durch Zentrifugation zu verdrehen.
Die obere Schicht in der Röhre ist die Coleman-Fettfraktion. Übertragen Sie das obere 2/3 des Coleman-Fetts in eine neue 15-Milliliter-Röhre. Dieser Teil gilt als das Fett mit geringer Dichte.
Übertragen Sie das untere Drittel des Coleman-Fetts in eine zweite 15-Milliliter-Röhre. Dieser Teil gilt als das Fett mit hoher Dichte. Um ein extrazelluläres stromales Gefäßfraktionsgel aus dem Fett mit geringer Dichte zu erzeugen, verwenden Sie zwei 20-Milliliter-Spritzen, die von einem weiblichen mit einem weiblichen Luer-Lock-Stecker verbunden sind, um 10 Milliliter des Fetts mit geringer Dichte zu intershift.
Dies ist der wichtigste Schritt, um Adipozyten zu zerstören. Die Geschwindigkeit und die Zeit, in der die Interspritzenverschiebung durchgeführt wird, tragen zur Qualität des Endprodukts bei. Nach der letzten Intershift-Sitzung das Fett durch Zentrifugieren sammeln und die obere Ölschicht in ein 15-Milliliter-Rohr übertragen.
Dann übertragen Sie die klebrige mittlere extrazelluläre Matrix stromal vaskuläre Fraktion Gelschicht in eine neue 15 Milliliter konische Röhre. Um aus dem Fett mit hoher Dichte ein extrazelluläres stromales Gefäßfraktionsgel zu erzeugen, fügen Sie zwei Milliliter der Ölfraktion mit geringer Dichte zu fünf Millilitern der Fettprobe mit hoher Dichte hinzu. Intershift das gemischte Fett, wie gezeigt, bis ein Flockungsgerät innerhalb der Emulsion beobachtet wird.
Sammeln Sie das Flocculate durch Zentrifugation und entsorgen Sie die oberste Ölschicht. Dann sammeln Sie die klebrige mittlere Schicht und mischen Sie diese Fraktion mit der niedrigen Dichte extrazelluläre Matrix stromal vaskuläre Fraktion Gel Probe. Nach der Verarbeitung des Coleman-Fetts zu extrazellulärem vaskulärem Gefäßfraktionsgel nimmt das Volumen des ausrangierten Öls 80 % des Endvolumens auf, und nur 20 % des unter der Ölschicht konservierten Fettgewebes gelten als extrazelluläres, stromales Gefäßfraktionsgel.
Extrazelluläre Matrix stromal vaskuläre Fraktion Gel hat eine glatte flüssige Textur, die es ermöglicht, durch eine 27 Gauge feine Nadel passieren. Coleman-Fett besteht jedoch aus einer integralen Fettstruktur mit großen Fasern, die nur durch eine 18 Gauge Kanüle passieren können. Am dritten Tag nach der Transplantation treten eine große Anzahl kleiner Präadipozyten mit mehreren intrazellulären Lipidtröpfchen, umfangreichem gut vaskularisiertem Bindegewebe und infiltrierten Entzündungszellen auf.
Ab Dem 15. Tag beginnt die Zahl der entzündlichen Zellen allmählich zu reduzieren, und die Adipozyten beginnen zu reifen. Bis Zum 90. Tag wurde der größte Teil des vaskularisierten Bindegewebes in den Transplantaten durch reife Adipozyten ersetzt. Extrazelluläre vaskuläre vaskuläre Zellfraktion Geltransplantate enthalten auch ein paar Perilipin-positive Adipozyten drei Tage nach der Transplantation, mit kleinen Präadipozyten, mit mehreren intrazellulären Lipidtröpfchen beginnen am Tag 15 erscheinen.
Jedes Feld des Tages 90 extrazelluläre Matrix stromal vaskuläre Fraktion Gel Transplantat Abschnitte zeigen zahlreiche Perilipin positive Adipozyten und neu gebildete Blutgefäße. Durchflusszytometrie kann durchgeführt werden, um die zelluläre Population im Produkt zu bestimmen. Und Rasterelektronenmikroskopie kann durchgeführt werden, um die Mikrostruktur des Produkts zu visualisieren.
Diese Technik bietet eine einfache Methode für Chirurgen und Forscher, um ein Produkt mit hoher Konzentration von SVF-Zellen mit nativen extrazellulären Matrixfasern aus Fettgewebe zu erhalten.
