A obtenção de frações vasculares estromes, ou SVFs, de lipoaspiratas requer digestão com colagemnase, o que aumenta o risco de contaminação biológica. Uma melhor maneira de obter SVF sem colagemnase deve ser desenvolvida. Essas técnicas nos permitem obter o SVF em sua matriz extracelular nativa através de um simples processo mecânico.
Demonstrando o procedimento será Xihang Chen, um estudante de pós-graduação do nosso laboratório. Após a obtenção das amostras de gordura, transfira os lipoaspiratas em um tubo de 50 mililitros e permita que a gordura colhida se equilibre por 10 minutos. Em seguida, use uma pipeta de ponta larga para puxar a gordura da camada superior do tubo em um novo tubo de 50 mililitros e girar a gordura por centrifugação.
A camada superior do tubo é a fração de gordura Coleman. Transfira o 2/3 superior da gordura Coleman para um novo tubo de 15 mililitros. Esta porção é considerada a gordura de baixa densidade.
Transfira o terço inferior da gordura Coleman para um segundo tubo de 15 mililitros. Esta porção é considerada a gordura de alta densidade. Para produzir um gel de fração vascular estromânico de matriz extracelular a partir da gordura de baixa densidade, use duas seringas de 20 mililitros conectadas por uma fêmea para o conector de trava de luer feminino para intershiftar 10 mililitros da gordura de baixa densidade.
Este é o passo chave para destruir adipócitos. A velocidade e o tempo que o deslocamento da intersinge é realizado contribui para a qualidade do produto final. Após a última sessão intershift, colete a gordura por centrifugação e transfira a camada superior de óleo para um tubo de 15 mililitros.
Em seguida, transfira a pegajosa matriz extracelular de camada de gel de fração vascular estromida em um novo tubo cônico de 15 mililitros. Para produzir um gel de fração vascular estromânica de matriz extracelular a partir da gordura de alta densidade, adicione dois mililitros da fração de óleo de baixa densidade a cinco mililitros da amostra de gordura de alta densidade. Intershifte a gordura mista como demonstrado até que um floculato seja observado dentro da emulsão.
Colete o floculado por centrifugação e descarte a camada superior de óleo. Em seguida, colete a camada média pegajosa e misture esta fração com a amostra de gel de fração vascular estrobosômica de matriz extracelular de baixa densidade. Depois de processar a gordura Coleman para gel de fração vascular estromânica de matriz extracelular, o volume de óleo descartado ocupa 80% do volume final, e apenas 20% do tecido adiposo preservado sob a camada de óleo é considerado como gel de fração vascular estromático da matriz extracelular.
O gel de fração vascular estromânea da matriz extracelular tem uma textura líquida lisa que permite que ele passe por uma agulha fina de calibre 27. No entanto, a gordura Coleman é composta por uma estrutura adiposa integral com fibras grandes que só podem passar por uma cânula de calibre 18. No terceiro dia após o transplante, aparecem um grande número de pequenos pré-adipócitos com múltiplas gotículas lipídicas intracelulares, tecido conjuntivo bem vascularizado e células inflamatórias infiltradas.
A partir do dia 15, o número de células inflamatórias começa a reduzir gradualmente, e os adipócitos começam a amadurecer. Até o dia 90, a maior parte do tecido conjuntivo vascularizado nos enxertos foi substituída por adipócitos maduros. Os enxertos de gel de fração vascular estrobosômica da matriz extracelular também contêm alguns adipócitos positivos perilipin três dias após o transplante, com pequenos pré-adipócitos, com múltiplas gotículas lipídicas intracelulares começando a aparecer no dia 15.
Em cada campo do dia 90 seções de enxerto de gel de fração vascular estrobomatos de matriz extracelular exibem numerosos adipócitos positivos perilipin e vasos sanguíneos recém-formados. A citometria de fluxo pode ser realizada para determinar a população celular no produto. E a microscopia eletrônica de varredura pode ser realizada para visualizar a microestrutura do produto.
Esta técnica fornece um método simples para cirurgiões e pesquisadores obterem um produto com alta concentração de células SVF com fibras matriciais extracelulares nativas do tecido adiposo.
