리포아실리페로부터 기질 혈관 분획 또는 SVF를 얻으려면 콜라게나아제로 소화가 필요하며, 이는 생물학적 오염의 위험을 증가시킵니다. 콜라게나아제 없이 SVF를 얻을 수 있는 더 좋은 방법을 개발해야 합니다. 이러한 기술을 통해 간단한 기계적 공정을 통해 기본 세포 외 매트릭스에서 SVF를 얻을 수 있습니다.
절차를 시연하는 것은 우리 실험실에서 졸업한 학생 인 Xihang Chen이 될 것입니다. 지방 샘플을 얻은 후, 리포아시브를 50 밀리리터 튜브로 옮기고 수확한 지방이 10분 동안 평형화되도록 합니다. 다음으로, 넓은 팁 파이펫을 사용하여 튜브의 상단 층에서 지방을 새로운 50 밀리리터 튜브로 끌어당기고 원심분리에 의해 지방을 회전시합니다.
튜브의 상부 층은 콜맨 지방 분획입니다. 콜맨 지방의 상부 2/3을 새로운 15 밀리리터 튜브로 옮기십시오. 이 부분은 저밀도 지방으로 간주됩니다.
콜맨 지방의 하부 3분의 1을 두 번째 15 밀리리터 튜브로 옮춥시다. 이 부분은 고밀도 지방으로 간주됩니다. 저밀도 지방에서 세포외 매트릭스 기질 혈관 분획 젤을 생성하려면 여성이 여성 luer lock 커넥터에 연결된 20 밀리리터 주사기를 사용하여 저밀도 지방의 10 밀리리터를 인터시프트하십시오.
이것은 지방세포를 파괴하는 핵심 단계입니다. 인터시고지 변속이 수행되는 속도와 시간은 최종 제품의 품질에 기여합니다. 마지막 인터시프트 세션 후 원심분리로 지방을 수집하고 상단 오일 층을 15 밀리리터 튜브로 옮긴다.
그런 다음 끈적끈적한 중간 세포외 매트릭스 기질 혈관 분수 젤 층을 새로운 15 밀리리터 원추형 튜브로 옮킨다. 고밀도 지방에서 세포외 매트릭스 기질 혈관 분획 젤을 생산하려면 저밀도 오일 분수의 2 밀리리터를 고밀도 지방 샘플의 5 밀리리터에 추가하십시오. 에멀젼 내에서 플립질이 관찰될 때까지 입증된 혼합 지방을 인터시프트한다.
원심분리로 플렉소드를 수집하고 상단 오일 층을 폐기하십시오. 그런 다음 끈적 끈적한 중간 층을 수집하고 저밀도 세포 외 세포 외 매트릭스 기질 혈관 분수 젤 샘플과이 분획을 혼합합니다. 콜맨 지방을 세포외 매트릭스 기질 혈관 분수 젤로 처리한 후, 버려진 오일의 부피는 최종 부피의 80%를 차지하며, 오일 층 아래에 보존된 지방 조직의 20%만이 세포외 매트릭스 기질 혈관 분획 젤로 간주된다.
세포 외 매트릭스 기질 혈관 분수 젤은 27 게이지 미세 바늘을 통과 할 수있는 부드러운 액체 와 같은 질감을 가지고 있습니다. 그러나, Coleman 지방은 단지 통과 할 수있는 큰 섬유와 통합 지방 구조로 구성되어 있습니다 18 게이지 캐뉼라. 이식 후 셋째 날에는 여러 세포 내 지질 방울, 광범위한 잘 혈관 화 결합 조직 및 침투 된 염증 세포가있는 작은 크기의 사전 지방세포가 많이 나타납니다.
15일째부터 염증성 세포의 수가 점차 감소하기 시작하고, 지방세포는 성숙해지기 시작합니다. 90일째까지, 이식편에 있는 혈관 결합 조직의 대부분은 성숙한 지방세포로 대체되었습니다. 세포외 매트릭스 기질 혈관 분획 젤 이식은 또한 이식 후 3 일 동안 몇 개의 페리리핀 양성 지방을 포함하고, 작은 크기의 사전 adipocytes와 함께, 다중 세포 내 지질 방울이 15 일에 나타나기 시작한다.
하루의 각 필드 90 세포 외 매트릭스 기질 혈관 분획 젤 이식 섹션 수많은 perilipin 양성 선포 세포와 새로 형성 된 혈관을 전시. 유동 세포측정은 제품 내의 세포 집단을 결정하기 위해 수행될 수 있다. 및 전자 현미경 검사법은 제품의 미세 구조를 시각화하기 위해 수행 될 수있다.
이 기술은 외과 의사와 연구원이 지방 조직에서 네이티브 세포 외 매트릭스 섬유와 SVF 세포의 높은 농도와 제품을 얻을 수있는 간단한 방법을 제공합니다.
