תהליך לכייר רטוב-ספינינג מבוססי ג'לטין על התחדשות רקמות

פרוטוקול זה משפר מושג בסיסי של סיבוב רטוב כדי לפתח חומר מרצועת סיבים אחת לרצועות שונות שניתן להשתמש בהן עבור כל יישום רפואי מועדף. טכניקה זו היא פשוטה, זולה, ואינו דורש תוספת של פולימרים סינתטיים להתאמה אישית של פולימרים טבעיים לתוך משאב של חלבון עבור חומרים מעניינים. טכניקה זו יכולה להיות מורחבת להתפתחות ביו-חומרית להריגת טיפול קר כגון טיפול במערכת העצבים המרכזית או ההיקפית, החלפת כלי דם, או שחזור ישיר בדרכי השתן.

שיטה זו מיועדת ליישום רפואי כולל כאסטרטגיה עבור עצבי רקמות או רפואה רגנרטיבית. טכניקה זו יכולה להיות מיושמת בקלות על ידי מתחילים. שים לב כי, לאחר מספר חזרות דפוס, איכות הפתרון תמיד צריך להיבדק כדי לשמור על היווצרות אופטימלית.

כדי ליצור את הצינור מסתובב רטוב, הראשון להטביע מד 24 על ידי שלושה רבעי אינץ ' קטטר ורידים היקפיים לתוך פתרון ג'לטין מוכן טרי במשך שלוש שניות, ואחריו טבילה בתתכנון אצטון מוכן טרי במשך דקה אחת. חזור על שלבים אלה 20 פעמים. לאחר טבילת האצטון האחרונה, תנו לצינור היצוק להתייבש במשך חמש דקות בטמפרטורת החדר, ולהשתמש בהמוסטאט כדי להעביר בזהירות את צינור הג'לטין מהקטטר לתוך פיפטה זכוכית פסטר עם 2.5% פתרון דיכלורומתאן פוליפרולקטון עבור דגירה מתחת למכסה המנוע לילה בטמפרטורת החדר.

למחרת בבוקר, לעקר את הג'לטין במשך שעתיים תחת אור אולטרה סגול לפני לזמן קצר שקוע הצינור ב 75% אתנול. ואז לשטוף את הצינור פעמיים עם תא גזע בינוני כדי להסיר את האתנול שיורית. כדי לטפח את צינור הג'לטין עם תרבות התאים, החלף את הקצה הנשוי של תאי גזע שומן אנושיים מבקבוק תרבות עם מיליליטר אחד של 0.25% טריפסין-EDTA עבור דגירה של 3.5 דקות ב 37 מעלות צלזיוס ו 5% פחמן דו חמצני.

כאשר התאים התנתקו, לעצור את התגובה עם מיליליטר אחד של סרום חזיר עוברי ולהעביר את ההשעיה התא לתוך צינור microcentrifuge. לאסוף את התאים על ידי צנטריפוגה ולתלות מחדש את גלולה במיליליטר אחד של תא גזע בינוני. לאחר מכן מניחים את צינור הג'לטין באר אחת של צלחת שש באר המכילה שלושה מיליליטר של מדיום תאי גזע.

לאחר ספירת התאים, זרע ארבע פעמים 10 עד הרביעי של תאי גזע שומן אנושי לתוך הצינור במשך שבועיים אינקובציה באינקובטור תרבות התא. לאחר אישור הרמה המתאימה של הרהום על ידי חוסר תגובה לצביטת בוהן בחולדת ספראג דאוולי בת שמונה שבועות, לגלח את השיער מאזור טרפז ולעקר את העור החשוף עם פתרון povidone-יוד. לכסות את החולדה עם וילונות כירורגיים סטריליים כדי להפחית את הזיהום החיידקי של האתר הכירורגי ולהשתמש מספריים כירורגיים לעשות חתך רדוד, שני סנטימטר ארוך העור.

מניחים את צינור הג'לטין ישירות לתוך השכבה בין fascia והשריר ולהשתמש תפר ניילון כדי לסגור את הפצע. ואז לעקר את החתך עם פתרון povidone-יוד. לגרום לחולדה באמצעות הזרקה תוך שרירית של ketoprofen ו cefazolin ולשמור על החיה בתנאים אספטיים במשך שבעה ימים.

זה רעיון ספינינג רטוב ידידותי למשתמש יכול לשמש לפיתוח ג'לטין לתוך סיבים וצינורות. תצפיות מורפולוגיות של צינור הג'לטין על ידי סריקת מיקרוסקופ אלקטרונים חושפות משטח לא חלק במיוחד בקוטר פנימי של יותר מ-200 מיקרומטר ועובי של כ-20 מיקרומטר. כתמים של צינור ג'לטין של תא גזע שומן אנושי עבור ביטוי סמן תא עצבי מדגים כתם חיובי עבור הסמן יחד עם גרעינים מזוהים מרובים המצביעים על כך התאים יכולים לחדור לדבוק צינור ג'לטין ולהבדיל לתאי הצאצא העצבי.

השתלת צינור הג'לטין לשכבת הפאשיה מאשרת את בטיחותו ואת תאימותו הביולוגית, כיוון שאין אינדיקציה לאדמומיות, נפיחות או תסמיני דלקת אחרים נצפים בתוך הרקמה המקומית והצינור מוקף ברקמת חיבור מפותחת. בעת ניסיון הליך זה של שתי נקודה אחת, הבטחת טבילה של התבנית בזמן הציפוי הספציפי בכל פתרון חשובים מאוד לבניית טופס צינור מדויק. בעקבות הליך זה, הניסויים שלנו להשתמש במודל בעלי חיים של מחלה אנושית יכול להתבצע כדי לחקור במדויק את התוצאה של הביו-חומרים עבור אסטרטגיה התחדשות רקמות.

לאחר התפתחותה, טכניקה זו סללה את הדרך לחוקרים בפיתוח פולימרים פשוטים של טבע מאכל לכל סוג של חומר עבור יישום רפואי החליט. במצב שימוש רגיל, פתרון dichloromethane polycaprolactone נחשב להציג מפגע סביבתי מינימלי, אבל לא לשכוח לבצע כל צעדים עם כימיקל זה ב ארון biosafety המתאים.