Ce protocole améliore un concept de base de filature humide pour développer un matériau à partir d’une seule bande de fibre en différentes bandes qui peuvent être utilisés pour toute application médicale préférée. Cette technique est simple, peu coûteuse, et ne nécessite pas l’ajout de polymères synthétiques pour la personnalisation des polymères naturels en une ressource de protéines pour les matériaux d’intérêt. Cette technique peut être étendue au développement de biomatériaux pour tuer la thérapie froide telle que le traitement central ou périphérique de système nerveux, le remplacement de vaisseau sanguin, ou la reconstruction directe d’appareil urinaire.
Cette méthode est destinée à l’application médicale, y compris comme une stratégie pour la névralisation tissulaire ou la médecine régénérative. Cette technique peut être facilement mise en œuvre par les débutants. Notez qu’après plusieurs répétitions de moulage, la qualité de la solution doit toujours être vérifiée pour maintenir une formation optimale.
Pour former le tube de filature humide, submergez d’abord un cathéter veineux périphérique de trois quarts de pouce de calibre 24 dans une solution de gélatine fraîchement préparée pendant trois secondes, suivi d’une immersion dans une solution d’acétone fraîchement préparée pendant une minute. Répétez ces étapes 20 fois. Après la dernière immersion d’acétone, laisser sécher le tube moulé pendant cinq minutes à température ambiante, et utiliser un hémèque pour transférer soigneusement le tube de gélatine du cathéter dans une pipette pasteur en verre avec 2,5% de solution de dichloromethane polycaprolactone pour une incubation sous le capot pendant la nuit à température ambiante.
Le lendemain matin, stériliser la gélatine pendant deux heures sous la lumière ultraviolette avant de submermer brièvement le tube dans 75% d’éthanol. Lavez ensuite le tube deux fois avec le milieu des cellules souches pour éliminer l’éthanol résiduel. Pour cultiver le tube de gélatine avec la culture cellulaire, remplacez l’extrémité supinate des cellules souches adipeuses humaines d’un flacon de culture par un millilitre de 0,25%Trypsin-EDTA pour une incubation de 3,5 minutes à 37 degrés Celsius et 5% de dioxyde de carbone.
Lorsque les cellules se sont détachées, arrêter la réaction avec un millilitre de sérum bovin fœtal et transférer la suspension cellulaire dans un tube de microcentrifugeuse. Recueillir les cellules par centrifugation et resuspendre la pastille en un millilitre de milieu de cellules souches. Placez ensuite le tube de gélatine dans un puits d’une plaque de six puits contenant trois millilitres de milieu de cellules souches.
Après avoir compté les cellules, semer quatre fois 10 à la quatrième des cellules souches adipeuses humaines dans le tube pour une incubation de deux semaines dans l’incubateur de culture cellulaire. Après avoir confirmé le niveau approprié de sedation par manque de réponse au pincement d’orteil dans un rat femelle de huit semaines de Sprague Dawley, rasez les cheveux de la région trapèze et stérilisez la peau exposée avec la solution povidone-iode. Couvrez le rat de rideaux chirurgicaux stériles pour réduire la contamination bactérienne du site chirurgical et utilisez des ciseaux chirurgicaux pour faire une incision superficielle de deux centimètres de long sur la peau.
Placez le tube de gélatine directement dans la couche entre le fascia et le muscle et utilisez une suture en nylon pour fermer la plaie. Ensuite, stériliser l’incision avec la solution povidone-iode. Induire le rat par injection intramusculaire de kétoprofène et de cefazolin et maintenir l’animal dans des conditions aseptiques pendant sept jours.
Ce concept convivial de filature humide peut être utilisé pour développer la gélatine en fibres et tubes. Les observations morphologiques du tube de gélatine en scannant la microscopie électronique révèlent une surface pas très lisse avec un diamètre intérieur supérieur à 200 micromètres et une épaisseur d’environ 20 micromètres. La coloration d’un tube de gélatine de culture de cellules souches adipeuses humaines pour l’expression de marqueur de cellules neurales démontre une coloration positive pour le marqueur avec les noyaux détectés multiples suggérant que les cellules peuvent pénétrer et adhérer au tube de gélatine et se différencier en cellules progénitrices neurales.
L’implantation du tube de gélatine dans la couche de fascia confirme son innocuité et sa biocompatibilité, car aucune indication de rougeur, gonflement, ou d’autres symptômes d’inflammation sont observés dans le tissu local et le tube est entouré par le tissu conjonctif bien développé. Tout en essayant cette procédure de deux points un, assurant l’immersion du moule dans le temps de revêtement spécifique dans chaque solution sont très importants pour construire une forme précise de tube. Suite à cette procédure, nos expériences utilisent le modèle animal de la maladie humaine peut être effectuée pour étudier avec précision les résultats des biomatériaux pour la stratégie de régénération des tissus.
Après son développement, cette technique a ouvert la voie pour les chercheurs dans le développement de polymères de nature corrélative simple dans n’importe quel type de matériau pour une application médicale décidée. Dans un état d’utilisation normal, la solution de dichloromethane polycaprolactone est considérée comme présente un risque minimal pour l’environnement, mais n’oubliez pas d’effectuer des étapes avec ce produit chimique dans une armoire de biosécurité appropriée.
