Процесс литья на основе мокрого прядения желатина для регенерации тканей

Этот протокол улучшает основную концепцию мокрого спиннинга для разработки материала из одной полосы волокна в различные полосы, которые могут быть использованы для любого предпочтительного медицинского применения. Этот метод прост, недорог и не требует добавления синтетических полимеров для настройки натуральных полимеров в ресурс белка для материалов, представляющих интерес. Этот метод может быть распространен на развитие биоматериала для убийства холодной терапии, такой как лечение центральной или периферической нервной системы, замена кровеносных сосудов или прямая реконструкция мочевыводящих путей.

Этот метод предназначен для медицинского применения, в том числе в качестве стратегии для неврализации тканей или регенеративной медицины. Этот метод может быть легко реализован новичками. Обратите внимание, что после нескольких повторений литья, качество раствора всегда должно быть проверено для поддержания оптимального формирования.

Чтобы сформировать влажную вращательную трубку, сначала погрузите 24 датчика на три четверти дюйма периферического венозного катетера в свежеприготовленный желатиновый раствор в течение трех секунд, а затем погружение в свежеприготовленный раствор ацетона в течение одной минуты. Повторите эти шаги 20 раз. После последнего погружения ацетона, пусть формованные трубки сухой в течение пяти минут при комнатной температуре, и использовать гемостат тщательно передать желатиновую трубку из катетера в стеклянный пастер пипетку с 2,5%polycaprolactone дихлорметановый раствор для ночной инкубации под капотом при комнатной температуре.

На следующее утро, стерилизовать желатин в течение двух часов под ультрафиолетовым светом, прежде чем кратко погружения трубки в 75%этанола. Затем мыть трубку два раза со средой стволовых клеток, чтобы удалить остаточный этанол. Чтобы культивировать желатиновую трубку с клеточной культурой, замените супинатный конец стволовых клеток из культуры колбы на один миллилитр 0,25%трипсин-ЭДТА на 3,5-минутную инкубацию при 37 градусах Цельсия и 5%углекислом газе.

Когда клетки отсоединились, остановить реакцию с одним миллилитром плода бычьей сыворотки и передачи клеточной суспензии в микроцентрифуг трубки. Соберите клетки путем центрифугации и повторно посовещения гранулы в один миллилитр стволовых клеток среды. Затем поместите желатиновую трубку в один колодец из шести хорошо пластины, содержащей три миллилитров стволовых клеток среды.

После подсчета клеток, семена четыре раза от 10 до четвертого человека жировых стволовых клеток в трубку в течение двух недель инкубации в инкубаторе клеточной культуры. После подтверждения соответствующего уровня sedation из-за отсутствия реакции на щепотку ног в женской восьминедельной крысы Sprague Dawley, брить волосы из области трапециевидной и стерилизовать подвергаются кожи с povidone-йода раствора. Обложка крысы с стерильными хирургическими шторами, чтобы уменьшить бактериальное загрязнение хирургического сайта и использовать хирургические ножницы, чтобы сделать мелкий, два сантиметра длиной разреза кожи.

Поместите желатиновую трубку прямо в слой между фасцией и мышцей и используйте нейлоновый шов, чтобы закрыть рану. Затем стерилизовать разрез раствором повидоне-йода. Индуцировать крысу через внутримышечную инъекцию кетопрофена и цефазолина и поддерживать животное в асептических условиях в течение семи дней.

Эта утехая влажная закручивая принципиальная схема можно использовать для того чтобы начать желатин в волокна и пробки. Морфологические наблюдения желатиновой трубки путем сканирования электронной микроскопии показывают не очень гладкую поверхность с диаметром более 200 микрометров и толщиной около 20 микрометров. Окрашивание человеческой жировой культуры стволовых клеток желатиновой трубки для выражения маркера нервных клеток демонстрирует положительное окрашивание маркера вместе с несколькими обнаруженными ядрами, предполагая, что клетки могут проникать и придерживаться желатиновой трубки и дифференцироваться в нейронные клетки-предшественники.

Имплантация желатиновой трубки в слой фасции подтверждает ее безопасность и биосовместимость, так как никаких признаков покраснение, отек или другие симптомы воспаления не наблюдаются в местной ткани и трубка окружена хорошо развитой соединительной тканью. При попытке этой процедуры из двух точений, обеспечение погружения плесени в определенное время покрытия в каждом растворе очень важны для создания точной формы трубки. После этой процедуры, наши эксперименты используют животных модель болезни человека может быть выполнена для точного исследования результатов биоматериалов для стратегии регенерации тканей.

После своего развития, этот метод проложил путь для исследователей в разработке простых коррелятивных полимеров природы в любой тип материала для решил медицинского применения. При нормальном состоянии использования, раствор поликарлактона дихлорметана считается представлять минимальную экологическую опасность, но не забудьте выполнить какие-либо шаги с этим химическим веществом в соответствующем шкафу биобезопасности.