Dieses Protokoll verbessert ein grundlegendes Konzept des Nassspinnens, um ein Material aus einem einzelnen Faserstreifen in verschiedene Streifen zu entwickeln, die für jede bevorzugte medizinische Anwendung verwendet werden können. Diese Technik ist einfach, kostengünstig und erfordert nicht die Zugabe von synthetischen Polymeren für die Anpassung der natürlichen Polymere in eine Ressource von Protein für Materialien von Interesse. Diese Technik kann auf die Entwicklung von Biomaterial zur Tötung von Kältetherapien wie Behandlung des zentralen oder peripheren Nervensystems, Blutgefäßersatz oder direkte Rekonstruktion der Harnwege ausgedehnt werden.
Diese Methode ist für die medizinische Anwendung gedacht, auch als Strategie für Gewebeneuralisation oder regenerative Medizin. Diese Technik kann leicht von Anfängern implementiert werden. Beachten Sie, dass nach mehreren Formwiederholungen die Qualität der Lösung immer überprüft werden sollte, um eine optimale Formation zu erhalten.
Um das Nassspinnrohr zu formen, tauchen Sie zunächst drei Sekunden lang einen 24-Meter-um-Dreiviertel-Zoll-Peripheriekatheter in frisch zubereitete Gelatinelösung ein, gefolgt von einem Eintauchen in frisch zubereitete Acetonlösung für eine Minute. Wiederholen Sie diese Schritte 20 Mal. Nach dem letzten Aceton-Eintauchen lassen Sie das geformte Rohr fünf Minuten bei Raumtemperatur trocknen und verwenden Sie ein Hämostat, um das Gelatinerohr vorsichtig aus dem Katheter in eine gläserne Pasteur-Pipette mit 2,5% Polycaprolacton-Dichlormethanlösung für eine nächtliche Inkubation unter der Haube bei Raumtemperatur zu übertragen.
Am nächsten Morgen sterilisieren Sie die Gelatine für zwei Stunden unter ultraviolettem Licht, bevor Sie die Röhre kurz in 75% Ethanol eintauchen. Waschen Sie dann das Rohr zweimal mit Stammzellenmedium, um das Restethanol zu entfernen. Um die Gelatineröhrchen mit der Zellkultur zu kultivieren, ersetzen Sie das supinate Ende menschlicher Fettstammzellen aus einem Kulturkolben mit einem Milliliter 0,25%Trypsin-EDTA für eine 3,5-minütige Inkubation bei 37 Grad Celsius und 5% Kohlendioxid.
Wenn sich die Zellen gelöst haben, halten Sie die Reaktion mit einem Milliliter fetalem Rinderserum fest und übertragen Sie die Zellsuspension in ein Mikrozentrifugenrohr. Sammeln Sie die Zellen durch Zentrifugation und setzen Sie das Pellet in einem Milliliter Stammzellmedium wieder auf. Dann legen Sie das Gelatinerohr in einen Brunnen einer Sechs-Brunnen-Platte mit drei Milliliter N-Dollar Stammzellmedium.
Nach dem Zählen der Zellen, Samen viermal 10 bis der vierten menschlichen Fettstammzellen in die Röhre für eine zweiwöchige Inkubation im Zellkultur-Inkubator. Nach Bestätigung des entsprechenden Sedierungsniveaus durch mangelnde Reaktion auf Zehenkniff in einer acht Wochen alten sprague Dawley-Ratte, rasieren Sie die Haare aus dem Trapezbereich und sterilisieren Sie die exponierte Haut mit Povidon-Jod-Lösung. Bedecken Sie die Ratte mit sterilen chirurgischen Vorhängen, um die bakterielle Kontamination der chirurgischen Stelle zu reduzieren, und verwenden Sie eine chirurgische Schere, um einen flachen, zwei Zentimeter langen Hautschnitt zu machen.
Legen Sie das Gelatinerohr direkt in die Schicht zwischen der Faszien und dem Muskel und verwenden Sie eine Nylonnaht, um die Wunde zu schließen. Dann sterilisieren Sie den Schnitt mit Povidon-Jod-Lösung. Induzieren Sie die Ratte durch eine intramuskuläre Injektion von Ketoprofen und Cefazolin und halten Sie das Tier unter aseptischen Bedingungen für sieben Tage.
Mit diesem benutzerfreundlichen Nassspinnkonzept können Gelatine zu Fasern und Rohren entwickelt werden. Morphologische Beobachtungen des Gelatinerohrs durch Rasterelektronenmikroskopie zeigen eine nicht sehr glatte Oberfläche mit einem Innendurchmesser von mehr als 200 Mikrometern und einer Dicke von etwa 20 Mikrometern. Die Färbung eines menschlichen Fettzellen-Stammzell-Gelatinerohrs für die expression ierung sneuraler Zellmarker zeigt eine positive Färbung für den Marker zusammen mit mehreren detektierten Kernen, was darauf hindeutet, dass die Zellen in das Gelatinerohr eindringen und haften und sich in neuronale Vorläuferzellen differenzieren können.
Die Implantation des Gelatinerohrs in die Faszienschicht bestätigt seine Sicherheit und Biokompatibilität, da im lokalen Gewebe keine Anzeichen für Rötung, Schwellungoder oder andere Entzündungssymptome beobachtet werden und das Rohr von gut entwickeltem Bindegewebe umgeben ist. Beim Versuch dieses Verfahrens von zwei Punkt eins, die Sicherstellung des Eintauchens der Form in die spezifische Beschichtungszeit in jeder Lösung sind sehr wichtig, um eine genaue Rohrform aufzubauen. Nach diesem Verfahren können unsere Experimente mit tierexperimentellen Erkrankungen durchgeführt werden, um das Ergebnis der Biomaterialien für die Geweberegenerationsstrategie genau zu untersuchen.
Nach ihrer Entwicklung ebnete diese Technik den Weg für Forscher bei der Entwicklung einfacher korrelativer Naturpolymere zu jeder Art von Material für eine entschiedene medizinische Anwendung. Unter normalen Gebrauchszustand, die Polycaprolactone Dichlormethan-Lösung wird als minimale Umweltgefahr darstellen, aber vergessen Sie nicht, irgendwelche Schritte mit dieser Chemikalie in einem geeigneten Biosicherheitsschrank durchzuführen.
