טכניקה זו היא דרך אמינה לספק כל תוכן כגון תרופות, חלבונים או תאים למקומות ספציפיים ברקמות או בבעלי חיים. אתה יכול לעקוב אחר המסירה ולכוונן את שחרורו של התוכן כדי להתאים את הניסוי שאתה רוצה. זה יכול לשמש לטיפול במחלות רבות מריפוי פצעים למחלות עיניים לב.
היתרון העיקרי של שיטה זו הוא היכולת לספק תאים טיפוליים באמצעות microcapsules alginate לאתרי היעד מבלי לגרום לתגובות חיסוניות ולשמור על אספקה מתמשכת של טיפולים מופרשים טריים לתקופה ארוכה יותר של זמן. התחל על ידי culturing תאי אפיתל רשתית על פי הוראות כתב היד. מעבר התאים כאשר הם מגיעים 70 כדי 80%confluency באמצעות הליכים סטנדרטיים תרבות רקמה.
כדי לכמת את התאים, מערבבים נתרן אלגינט עם מים deionized לריכוז סופי של 2% משקל לנפח ולטהר את התערובת באמצעות סינון עם מסנן מזרק סטרילי 0.2 מיקרומטר. טריפסינוז, צנטריפוגה, ולשטוף את התאים עם 10 מילימולרים HEPES תמיסת מלח במאגר. השתמש בהמוציטומטר כדי לספור את התאים ולהתאים את ריכוז התא הסופי למיליון למיליליטר של פתרון אלגינט.
לטעון 300 aliquots microliter של אלגינט ותאים תערובת לתוך מזרק שלושה מיליליטר ולחבר אותו למשאבת מזרק. הכינו אמבט גלינג לפי הוראות כתב היד והמקמים אותו במזנון סטרילי של 50 מיליליטר מתחת לקצה המזרק במחט של שבעה מילימטרים למרחק ריסוס רחצה. כוונן את המתח לשמונה קילו-וולט ואת קצב הזרימה ל-30 מילימטרים לשעה כדי לייצר מיקרו-קפליות בגודל של כ-150 מיקרומטר.
חבר את קליפ הקרקע השחור לחוט הנחושת כי הוא באמצע הדרך שקוע באמבט gelling ולחבר את קליפ חוט אנודה אדום למחט. זה לוקח בערך 30 דקות להכין תאים אנקפסולציה מתוך כל אצווה מיליליטר אחד של אלגינט ותערובת תאים. כאשר נוצר, לשטוף את microcapsules עם פתרון כביסה פעמיים דגירה אותם עם 10% FBS בתוספת מדיה DMEM באינקובטור לח ב 37 מעלות צלזיוס ו 5%CO2.
לאחר דגירה 24 שעות ביממה, הכינו דגימה של 500 מיקרו-קפולים להכתמה על ידי שטיפתם פעמיים בתתכונת הכביסה. השתמש בערכת בדיקה חיה/מתה כדי להכתים אותם לצורך כדאיות. כדי להבטיח שהמיקרו-סקוולים יהיה בגודל מתאים, לדלל אותם במדיה נטולת סרום.
בזהירות שאף אותם עם מזרק המילטון 2.5 מיקרוליטר. יש להוציא באיטיות מיקרוליטר אחד שנופל על מגלשת מיקרוסקופ ולקבוע את תקינות המיקרו-קאפסולים באמצעות מיקרוסקופ ברייטפילד זקוף. בעכבר הרדמה כראוי, להחיל חומר סיכה עינית כדי לשמור על לחות העין ולהשתמש 26 מד 3/8 מזרק משופע מחט כדי להקים ניקוב עיניים ראשוני ממש מתחת ללימבוס.
הקפד להתקרב לעין מכיוון האף בזווית של 45 מעלות שמירה על הקצה משופע כלפי מעלה, כדי למנוע ניקוב עדשה. לאחר מכן, ודא כי קצה המחט כולו מוכנס לתוך העין עבור הדור חור מדריך, אבל להיזהר לא לנסוע רחוק מדי לנקב את הרשתית הזמנית. ברגע שזה יושלם, לאט לסגת המחט.
בתוך micromanipulator, למקם 27 מד קהה קצה 2.5 מיקרוליטר המילטון מזרק כי כבר מלא בת פתרון קפסולה בשורה המחט עם חור המדריך הראשוני. החזק את ראשו של בעל החיים בתקורה יציבה ותמרן בכוונה את המחט לכיוון העין. כדי להבטיח תנוחת מחט נכונה בתוך הזיפים, הכנס את המזרק עד שניתן יהיה לדמיין את קצה המחט מאחורי העדשה.
ואז להזריק את פתרון הקפסולה לאט במהלך 25 עד 30 שניות. וברגע שהושלם, בהדרגה לסגת מזרק קצה קהה על מנת למזער את הפגיעה בעין. במידת הצורך, התאימו את גודל הקפסולה על ידי התאמת המתח וקצב הזרימה בהתאם לכיווני כתב היד.
אנקפסולציה של התאים באלגינט אושרה עם הדמיה ברייטפילד ו בדיקה חיה / DEAD הוכיחה כי 90% מהתאים היו קיימא לאחר אנקפסולציה. הכדאיות ארוכת הטווח של התאים הובטחה על ידי המסת הכמוסות בנתרן ציטראט ו Replating. הזרקה תוך-ואטראלית בוצעה תחת בדיקה ויזואלית שאיפשרה הדמיה של כמוסות ב הזין.
בעת ניסיון הליך זה, אין להשתמש ב- PBS עבור שלבי כביסה כלשהם מכיוון ש- PBS ממיס מיקרו-קפליונים אלגינטים שנוצרו. לאחר התפתחותה, המעבדה שלנו משמשת כמערכת משלוח לטיפול בצורות של אי ספיקת לב יתר לחץ דם. טכניקה זו נחשבת לכלי מבטיח לטיפול עתידי במחלות לב וכלי דם ונוירולוגיות שונות.
