קרצינומה של תאי הכליה נקה או CCRCC, הוא תת סוג הנפוץ ביותר של סרטן הכליה. לוקליזציה CCRCC יש תוצאה חיובית עם ניתוח. עם זאת, שליש מהחולים CCRCC יפתחו גרורות רחוקות לריאות.
מה שמוביל לתוצאה גרועה מאוד עבור חולים. למרבה הצער, אין טיפול זמין לשלב הקטלני הזה. כמו המנגנון המולקולרי של גרורות נשאר רהוי.
מטרת פרוטוקול זה היא להציג ולהשוות בין שני מודלים של בעלי חיים שהוקמו לאחרונה עבור CCRCC גרורתי. המודל הראשון הוא העכבר של השתלת הנושא. במודל העכבר הזה, CCRCC הטרוגנית מושתלת בקפסולת הכליות של העכבר.
גידול הגידול ואת גרורות הם נכס לאחר 10 שבועות. הדגם השני הוא דגם קרום העוף הכוריואלנטואי, או מודל CAM. במודל עוף זה CCRCC ההטרוגני מושתל בביצה.
גידול הגידול ותאי הגידול במחזור הם נכס לאחר 10 ימים של השתלה לפני העובר בוקע. גרורות ריאות הוא נכס לאחר 24 ימים של ההשתלה. שזה שבועיים אחרי הבקיעה.
שני מודלים חדשניים אלה יהיו שימושיים כדי להמשיך לחקור את המנגנון המולקולרי שמאחורי גרורות ב- CCRCC. שים לב כי הליך CAM אינו מופיע בסרטון זה. הפרוטוקול המפורט עבור מודל CAM מתואר וצולד במאמר אחר טרואב על ידי Sharrow ואח '.
לאחר הרדמה של העכבר, לחטא את החלק האחורי של העכבר כולו עם povidone-יוד במשך שלוש פעמים. בצע על ידי 70% ethnol פעם אחת, ולנגב אותו יבש עם צמר גפן סטרילי ספוגיות. לאחר מכן להחיל שלושה רוטב רפואי סטרילי ברצף מכסה את כל הגב על מנת ליצור שדה כירורגי, כמו גם כדי לשתק את העכבר.
לפני הניתוח, המפעילים צריכים לחטא את אצבעותיהם עם povidone-יוד. מקם את העכבר במצב נוטה. ולהשתמש באצבעות כדי לאתר את הכליה השמאלית ממש מתחת לאגף השמאלי.
השתמשו בזוג מדפים ומספריים קהים כדי לחתוך את שכבת העור והשרירים מתחת למיקום שצוין. השתמש במטליות כותנה סטריליות ומטליות כדי לחלק חלקית את הכליה השמאלית מהבטן. טען מזרק אינסולין או מזרק המילטון מותאם אישית עם ההשעיה תא הגידול מוכן בנפרד.
להזריק 20 microliters של השעיית תא מתחת לכמוסה בכליות. לאט לשלוף מחט על מנת לחזק את פתרון מטריצה הסלולר הנוסף. כמו גם כדי למנוע דימום או דליפת תאים סרטניים.
ואז, להשתמש ספוגית כותנה סטרילית לדחוף את הכליה בחזרה לתוך הבטן. השתמש בתפר כדי לתפור את שכבת השריר. לחטא את העור עם povidone-יוד.
ו, לסגור את העור עם פצע אוטומטי קליפים. הנחת אורתוטופית שתל תאים סרטניים גדל בהצלחה על כליות עכברים כפי שאושר על ידי BLI. למרות שלא היה הבדל בצמיחה העיקרית, רק לגידול גרורתי הטרוגני היו גרורות חזקות לריאות.
גרורות אושרו גם על ידי אימונוהיסטוכימיה. באופן דומה, ספירת תאי הגידול במחזור הייתה גבוהה יותר בעכברים הנושאים גידול גרורתי מאלה הנושאים גידול לא גרורתי. בקונקורדנס עם מודל העכבר מודל CAM גם הראה שום הבדל צמיחה בין גידולים גרורתיים ולא גרורתיים.
מצד שני, מספר תאי הגידול במחזור היה גבוה משמעותית בביצים עם גידולים גרורתיים. גרורות הניתנות לגילוי היסטולוגי נצפו בריאות של עוף בקע. לסיכום, פרוטוקול זה המחיש שני מודלים חדשניים של בעלי חיים עבור CCRCC גרורתי.
גם העכבר וגם דגמי העוף כבשו מחדש בנאמנות את גרורות הריאה שנצפו במרפאה. שני מודלים פרה-קליניים אלה יהיו שימושיים כדי להרחיב את ההבנה של המנגנון המולקולרי שמאחורי גרורות. כמו גם לגלות טיפולים חדשניים עבור CCRCC גרורתי.
