הפרוטוקול שלנו מטפל בצורך בלתי ניתן לשחזור בשיטה חזקה ובלתי ניתנת לשחזור לניתוח כמותי של שינויים במפרקים בפיתוח והתקדמות של דלקת מפרקים ניוונית. הטכניקה שלנו מתארת פרמטרים ספציפיים וניתנים לשחזור לניתוח כמותי של שינויים ברקמות מפרקים מרובות בדלקת מפרקים ניוונית. כמו טכניקה זו מאפשרת ניתוח כמותי של דלקת מפרקים ניוונית, זה יכול להיות מועסק כדי להשוות את ההשפעות של טיפולים ספציפיים על רקמות מפרקים מרובים על מנת להעריך את היעילות הטיפולית שלהם.
הפרוטוקול שלנו יכול להיות מיושם גם על מודלים אחרים דלקת מפרקים ניוונית או אזורים של מחקר השלד והשרירים שבו כימות של סחוס ועצמות יש צורך. למרות שהמערכת פשוטה ואינטואיטיבית, עדיין יש צורך באימונים כדי לתרגל קבלת מדידות באופן חוזר ונשנה כדי להשיג רבייה. ונגדשפראבהו קארופגונדר, חוקר פוסט-דוקטורט מהמעבדה שלנו, ידגים כעת את ההליך שלנו.
התחל בהפניית המיקרוסקופ, המצלמה, המחשב וצג מסך המגע. בחר את המטרה 4X ולחץ על סמל התוכנה כדי להפעיל את התוכנה. מקם את השקופית על שלב המיקרוסקופ ומרכז את המדגם בתוך חלון המדידה כדי להבטיח שרשתות המדידה מוגדרות להגדלה המתאימה כדי להתאים למטרה בכך שגם משטח המשטחים הטיביאלי וגם עצם המשנה התת-גולגולתית נכללים באזורי התמונה המעניינים.
לאחר מכן, תחת תפריט קובץ, בחר הגדרות קריאה. בחלון הגדרות, בחר את קובץ ההגדרות המתאים כדי למדוד את הפרמטרים. כדי למדוד את שטח הסחוס הכולל, בחר את הפונקציה TC TC טיב ולעקוב לאורך הקצה העליון של משטח הסחוס tibial שבו הסחוס פוגש את החלל המשותף ולאורך צומת כונדרו-osseous שבו סחוס הסתייד פוגש את עצם subchondral.
כדי למדוד את אזור הסחוס המסויד, בחר את הפונקציה Tib CC ועקוב אחר קו לאורך סימן הגאות והשפל, קו המתרחש באופן טבעי המפריד בין אזורי הסחוס המסוידים והבלתי מחושבים, ולאורך הצומת כונדרו- osseous שבו הסחוס הסתייד פוגש את עצם subchondral. כדי לקבוע את אזור הסחוס הלא מחושב, הפחת את אזור הסחוס הסתיידות מאזור הסחוס הכולל. כדי לקבוע את מספר chondrocyte, ליצור פונקציות ספירה נפרדות בתוך ההגדרות בתוכנת היסטומורפיטריה כדי להבחין את מטריצה לייצר מטריצה שאינם מייצרים chondrocytes.
לאחר מכן השתמש חרט לעשות נקודה קטנה על כל chondrocyte להביע את פנוטיפ שצוין כדי לקבוע את מספר מטריצה לייצר או לא לייצר chondrocytes. כדי למדוד את הפרמטר הכולל של משטח המחשוף הטיביאלי, עקוב אחר קו על פני השטח של הסחוס הטיביאלי כדי להגדיר בזהירות את פרפור בודדים. לאחר מכן צייר קו שני לאורך סימן הגאות כדי לשמש כבקרה פנימית עבור המישור של כל מקטע ולחלק את פרמטר פני השטח של הטיביאלי על ידי הפרמטר סימן הגאות כדי לחשב את מדד פרפור פני השטח של הטיביאלי.
כדי למדוד את אזור מרחב מח העצם המשני, בחר את הפונקציה אזור מח עצם. ואז לצייר קווים סביב הפרמטר של אזורים אלה כדי לקבוע את השטח הכולל של שטח מח העצם בתוך עצם subchondral tibial. כדי למדוד את האזור התת-כולנדראלי הכולל, בחר את הפונקציה Subchondral Bone והתאר את האזור שבין צומת כונדרו-אוסאוס בגבול העליון של לוח הצמיחה המשתרע באופן הצדדי לאזורי האוסטיאופיטים האחוריים והמאחררים.
לאחר מכן הפחת את אזור מרחב מח העצם התת-כולנדראלי מאזור התת-כולנדרל הכולל כדי לחשב את אזור העצם התת-כולדי. כדי למדוד את האזור osteophyte, בחר את הפונקציה אוסטאופיט לפני ולעקוב אחר osteophyte anterior של השוקה הפרוקסימלית. לאחר מכן בחרו אוסטאופיט אחורי ועקבו אחר האוסטיאופיט האחורי של השוקה הפרוקסימלית.
כדי למדוד את עובי סינוביאלי הירך הקדמי, לחץ על קדמיור עצם הירך סינוביום מניסקוס ולצייר קו אחד מנקודת הכניסה הפנימית של הסינוביום הקדמי על עצם הירך לקראת נקודת ההתקשרות שלה על המניסקוס שורה אחת מן הכניסה החיצונית של הסינוביום על עצם הירך לקראת ההחזקה שלה מניסקוס. לאחר מכן לחלק את האזור הסינוביאלי הכולל על ידי הפרמטר סינוביאלי כדי לחשב את עובי סינוביאלי. DMM המושרה דלקת מפרקים ניוונית תוצאות מוגברת דלקת מפרקים ניוונית מחקר האגודה הבינלאומית בהשוואה עכברים מזויפים.
מאופיין בבירור על ידי שחיקת פני השטח וסחוס לאיבוד. פרוטוקול היסטומורפיטריה זה יכול לשמש כדי לזהות מספר שינויים הקשורים דלקת מפרקים ניוונית כולל ירידה בסחוס הכולל אזורי סחוס לא מחושב. הפחתה במספר הכונדרוציטים הכולל וחשוב מכך, אובדן במספר המטריצה המייצרת כונדרוציטים.
שינויים במשטח המשטחים, המעידים על חומרת הסחף, נצפים גם הם, כולל עלייה כוללת במדד פרפור. דלקת מפרקים ניוונית כוללת גם עלייה באזור העצם subchondral וירידה באזור של שטח מח העצם בעכברי DMM המציין טרשת עצם subchondral. הן האזורים הקדמיים והן אזורי האוסטיאופיט האחוריים גדלו גם בעכברי DMM, מה שמרמז על שיפוץ עצם תת-כולדי מתמשך המשמש כמנגנון פיצוי לטיפול בשינויים בהעמסת מפרקים באתר הפציעה.
ניתוח היסטומורפי של הסינוביום מראה עלייה בעובי הסינוביאלי בעכברי DMM. תוצאה אופיינית של דלקת מפרקים ניוונית הקשורים דלקת סינוביאלית ואת דיפוזיה של ציטוקיני דלקתיים לתוך החלל המשותף. בנוסף, אין שונות בין משתמשים משמעותית בין הניתוח ההיסטומורפי של אזור הסחוס הלא מחושב בציון הבינלאומי של החברה הבינלאומית לחקר דלקת מפרקים ניוונית.
לאחר ניתוח היסטומורפי, ניתן להשתמש בשקופיות רציפות וכתמי שפעת חיסונית כדי לבחון שינויים בביטוי החלבון בין דגימות.
