우리의 프로토콜은 골관절염 발달 및 진행에 있는 합동 변경의 정량적 분석을 위한 강력하고 재현가능한 방법에 대한 충족되지 않은 필요를 해결합니다. 우리의 기술은 골관절염에 있는 다중 합동 조직의 변경의 정량분석에 대한 구체적이고 재현 가능한 매개 변수를 간략하게 설명합니다. 이 기술은 골관절염의 정량적 분석을 허용하므로, 그들의 치료 효능을 평가하기 위해 여러 관절 조직에 대한 특정 치료의 효과를 비교하는 데 사용할 수 있습니다.
우리의 프로토콜은 또한 다른 골관절염 모형 또는 연골과 뼈의 정량화가 필요한 근골격계 연구의 지역에 적용될 수 있습니다. 시스템은 간단하고 직관적이지만 재현성을 달성하기 위해 반복적인 방식으로 측정을 얻는 연습을 연습하기 위해 교육 세션이 여전히 필요합니다. 방가데스프라부 카루파고언더, 우리의 실험실에서 박사 후 학자는 이제 우리의 절차를 시연 할 것입니다.
현미경, 카메라, 컴퓨터 및 터치 스크린 모니터를 켜는 것으로 시작합니다. 4X 목표를 선택하고 소프트웨어 아이콘을 클릭하여 소프트웨어 프로그램을 시작합니다. 현미경 단계에 슬라이드를 배치하고 측정 그리드가 정골 및 대퇴 관절 표면과 티볼 서브콘드리아 뼈가 모두 관심의 이미지 영역 내에 포함된다는 점에서 목표에 맞게 적절한 배율로 설정되어 있는지 확인측정 창 내의 샘플을 중심으로 한다.
그런 다음 파일 메뉴에서 읽기 설정을 선택합니다. 설정 창에서 측정할 매개 변수에 대한 적절한 설정 파일을 선택합니다. 총 연골 영역을 측정하려면 Tib TC 기능을 선택하고 연골이 관절 공간과 만나는 티브 연골 표면의 우수한 가장자리를 따라 추적하고 석회화 된 연골이 연골뼈와 만나는 연골 - osseous 접합을 따라 추적하십시오.
석회화연골 영역을 측정하기 위해 Tib CC 기능을 선택하고 조수 마크를 따라 선을 추적하며, 연골의 석회화 및 미석화 영역을 분리하는 자연발생선이 있으며, 석회화된 연골이 하부촌 골과 만나는 콘드로-오스수우스 접합을 따라 한다. 비석화된 연골 영역을 결정하기 위해 석회화된 연골 영역을 전체 연골 영역에서 빼는다. 연골세포 수를 결정하려면, 히스토모홈트리 소프트웨어의 설정 내에서 별도의 카운트 함수를 만들어 매트릭스 생성 및 매트릭스비 생산 연골세포를 구별한다.
그런 다음 스타일러스를 사용하여 지정된 표현형을 표현하는 각 연골 세포 위에 작은 점을 만들어 연골구를 생산하거나 생산하지 않는 매트릭스의 수를 결정한다. 총 티비알 관절 표면 매개변수를 측정하려면 정골 연골 표면을 가로질러 선을 추적하여 개별 세동을 신중하게 정의합니다. 그런 다음 조수 표시를 따라 두 번째 선을 그려 각 섹션의 평면에 대한 내부 제어 역할을 하고 조수 표시 매개변수에 의해 양면 관절 표면 매개변수를 분할하여 양면 관절 표면 세동 인덱스를 계산합니다.
서브콘드리아 골수 공간 영역을 측정하려면 골수 영역 기능을 선택합니다. 그런 다음 이러한 영역의 매개 변수 주위에 선을 그려 서 골수 공간의 총 면적을 결정하고 정골 부전 골본 내의 골수 공간. 총 아전드랄 영역을 측정하기 위해, 서브콘드리아 뼈 기능을 선택하고 전방 및 후방 골체의 영역으로 측면으로 확장성장판의 우수한 경계에서 연골-오스수우스 접합 사이의 영역을 윤곽을 형성한다.
그런 다음 총 부전드랄 영역에서 지하 골수 공간 영역을 빼서 부전골 영역을 계산한다. 골피질 영역을 측정하려면 전방 골체 기능을 선택하고 근접 경골의 전방 골체를 추적합니다. 그런 다음 후방 골체를 선택하고 근위 경골의 후방 골체를 추적합니다.
전방 대퇴 대퇴 경연 두께를 측정하려면, 전방 페무르 시노비움 반유동을 클릭하고 반월 상 연골에 부착 포인트와 메수에 대한 부착 지점으로 대퇴골 시노비움의 내부 삽입 지점에서 한 줄을 그립니다. 그런 다음 총 연면적을 막연한 파라미터로 나누어 연면적두께를 계산한다. DMM 유도 골관절염은 샴 마우스에 비해 증가 된 골관절염 연구 학회 국제 점수결과.
표면 침식과 연골이 손실되는 것을 특징으로 합니다. 이 히스토모폰트리 프로토콜은 전체 연골 및 미균 연골 부위의 감소를 포함하여 여러 골관절염 관련 변화를 검출하는 데 사용될 수 있다. 총 연골세포 수의 감소와 중요한 것은, 연골세포를 생산하는 매트릭스의 수의 손실.
침식의 심각성을 나타내는 관절 표면에 대한 변화도 세동 지수의 전반적인 증가를 포함하여 관찰된다. 골관절염은 또한 부전건조골 영역의 증가와 부전골 골경화증을 나타내는 DMM 마우스의 골수 공간의 면적감소를 포함한다. 전방 및 후방 골육영역은 DMM 마우스에서도 증가하여 부상 부위의 관절 하중 변화를 처리하기 위한 보상 메커니즘역할을 하는 지속적인 아콘드리아 뼈 리모델링을 제안합니다.
synovium의 히스토모폰 분석은 DMM 마우스의 연액 두께의 증가를 나타낸다. 관절염의 전형적인 결과 관련 된 혈 안 염증 및 관절 공간에 염증 성 사이토 카인의 확산. 또한, 골관절염 연구학회 국제점수에서 유정화된 연골 부위의 조직형태 분석 사이에 유의한 사용자 간 가변성이 관찰되지 않는다.
조직학적 분석 후 순차적 슬라이드 및 면역 형광 염색을 사용하여 샘플 간의 단백질 발현의 변화를 검사할 수 있습니다.
