מיצוי RNA מהיר וחסכוני של רקמת הלבלב חולדה

שלום לכולם. עיצבנו, שיטה תיאורית פשוטה ומהירה בכיתה להפקת רנ"א יעילה מרקמה הלבלב. היתרון העיקרי של שיטה זו הוא הליך אופטימיזציה כדי לחלץ RNA מכמות מינימלית של רקמה עקב אוטוליזה. היי שוב. הדגמת ההליך ייעשה על ידי Sanaz Dastghaib, זה הסטודנט שלי לדוקטורט במעבדה שלנו במחלקה לביוכימיה של אוניברסיטת שיראז למדעי הרפואה.ראשית להכין את מקום הניתוח, לשים את כל הדרישות מתחת למכסה המנוע. כדי להשבית RNase לעקר את כל מכשירי הניתוח בתנור. להזריק קטמין-xylazine תוך-אפית 80/8 מיליגרם לקילוגרם. הוסף 1 cc.RNA ייצוב reagent לתוך microtube הנכון כדי לאכלס את ההפעלה של אנדונוקלאז ברקמות קיימות. מיד מניחים את החולדה על הלוח הכירורגי. תרחיק את המנתח לחתך בקו האמצע. לאחר מכן, לעקר את כל משטח הבטן עם 70% אלכוהול כדי להסיר את שיער החולדה. חותכים את העור לניתוח. חתך מחדש נעשה כדי לפתוח את הבטן מאזור הערווה לרגליים הקדמיות. הופכים את איברי הבטן לצד שמאל, כדי לחשוף את הלבלב. בזהירות למצוא את רקמת הלבלב, אשר התפשט בחלל הבטן. אתר את האזור תחת תצוגה כדי לגלות את הלבלב מבלי להתבלבל עם רקמת השומן. מיד להסיר 20 עד 30 מיליגרם הלבלב מן חלל הבטן בתוך פחות משתי דקות. שים את הרקמה שהוסרה בצינור מיקרו מהר מאוד לחתוך אותו עם חותך אסטריד לחדור את רגנט ייצוב RNA לרקמות מופרדות. מניחים את המיקרו-צינור במיכל החנקן לקפוא מיד. כל המיקרו-צינורות שלהם צריכים להישמר ב-80