אדהזרדיה אדיס הוא טפיל מיקרו-ספורידיאני שמדביק במיוחד יתושים Aedes aegypti. גידול טפיל זה יכול להיות מאתגר עבור חוקרים חדשים בשל המורכבות של מחזור החיים של הטפיל. פרוטוקול זה מספק הוראות צעד חכם לגידול E.aedis, כולל כיצד כראוי לתזמן את השלבים להליך, לזהות נבגים זיהומיות, ולהפיץ את הדור הבא של טפילים.
תזמון מדויק של פרוטוקול זה עשוי להיות מאתגר ועשוי לדרוש ניסוי וטעייה מסוימים. זיהוי נבגים יכול להיות גם קשה. העזרים החזותיים בפרוטוקול זה אמורים לספק סיוע.
כדי להתחיל, לבקוע ביצי A.Aegypti נגוע E.aedis על ידי הצבת אותם במגש גידול זחל עם ליטר אחד של מים deionized והוספת 50 מיליגרם של מזון דגים. שכן את היתושים בטמפרטורה של 27 מעלות צלזיוס ו-80% לחות יחסית עם מחזור חושך של 14 שעות. לאחר הבקיעה, להפחית את צפיפות הזחלים כ 100 זחלים למגש, מה שהופך מגשים חדשים לפי הצורך.
מוסיפים חתיכת מזון חתולים יבש לכל מגש. לחדש את המזון כאשר מדולדל אבל לא מספקים כל מזון עודף. חתיכה אחת של 200 מיליגרם של מזון לחתול כל שלושה ימים מספיקה.
כאשר הזחלים הנגועים הם כוכבים שלישיים עד רביעיים, בוקעים ביצי A.aegypti לא נגועות למגש חדש. הרם את היתושים בצפיפות כך ש- A.aegypti בריא יגיע למקום השני והשלישי ב-48 עד 72 שעות. בוקע קבוצות של ביצים בריאות במשך מספר ימים יכול להבטיח כי הזחלים נמצאים בשלב הנכון בעת הצורך.
כדי לקצור ולכרות נבגים לא משכילים, השתמש בפיפטת העברה כדי להעביר 10 זחלי אינץ' נגועים לצינור מיקרוצנטריפוגה 1.5 מיליליטר. הסר את מי הרבייה עם פיפטה העברה ולשטוף את הזחלים פעם אחת על ידי הוספת כמיליליטר אחד של מים deionized נקי. הסר את מי הכביסה והוסף 500 מיקרוליטרים של מים deionized נקי 10 זחלים הומוגנית אותם באמצעות עלה homogenizer מכני.
לטעון 10 microliters של הומוגניט על המוציטומטר לכמת את הנבגים בהגדלה 400X. הפוך תרחיף מזון זחל טרי על ידי ערבוב 1.2 גרם של אבקת כבד, 0.8 גרם של שמרי ברואר, ו 100 מיליליטר של מים. מעבירים 100 שני לשלישי בזחלי A.aegypti בריאים לתוך 150 כוסות מיליליטר או כוסות דגימה ומוסיפים חמש פעמים 10 לרביעית עד פעם אחת 10 לנבגים החמישיים לכל עם פיפטה.
הוסף שני מיליליטר של תרחיף מזון זחל ומים deionized עבור נפח סופי של 100 מיליליטר. לאחר 12 עד 24 שעות של חשיפה, מעבירים את הזחלים למגשי גידול. מוסיפים אוכל ומגרים אותם לבגרות.
לפקח על הזחלים מנונים עבור גור ולהעביר גלמים לגביע הופעה בכלוב. סוכר להאכיל מבוגרים עד ליביום. מבוגרים הזנת דם על פי פרוטוקולים סטנדרטיים זמינים באמצעות משאבי BEI.
לאסוף ביצים ממבוגרים שניזונו מדם. שידור אנכי של E.aedis מתרחש בשלב זה. בסיום, נקו את כל החומרים שבאו במגע עם E.aedis עם 10% אקונומיקה ו autoclaving כדי למנוע זיהום.
פרוטוקול זה מדגים את ההליך המלא הדרוש להפצת E.aedis יתושים A.aegypti. ביצי A.aegypti נגועות ב- E.aedis בקעו וזחלים גודלו לשלב הרביעי של כוכב. בשלב instar הרביעי, סימנים חזותיים של זיהום ניתן לראות כגון sporocysts לבן בכל גופי השומן של זחלים נגועים.
נבגים לא משכילים נקצרו מזחלי instar הרביעי על ידי הומוגניזציה 10 זחלים ב 500 microliters של מים deionized. נבגים אלה היו פיריפורם וגלויים בקלות בהגדלה של פי 400. ספירת נבגים של 4, 050 נבגים למיקרוליטר חושבה ונבגים אלה שימשו להדביק זחלים בריאים באמצעות שידור אופקי.
מצב ההדבקה והמון זחלים של דור ה-E.aedis הוערכו בשבעה ימים לאחר הבקיעה. שיעור ההדבקה האנכי של E.aedis בדור filial נמצאה להיות 96%ואת העומס הנבג הממוצע של אנשים נגועים בשבעה ימים לאחר הבקיעה היה 3.31 פעמים 10 לחמישי. כדי לתאם כראוי היערכות זחל, מומלץ להסביר כמה שונות בזמן גידול.
בנוסף, מספרי הנבגים גדלים במהירות כך שאם אינך מזהה נבגים, פשוט נסה שוב למחרת. בהצלחה.
