זוהי שיטה זולה המשלבת את היתרונות של אינפלציית אוויר קיבוע זלוף כלי דם לשימור הריאות עבור ניתוחים מבניים ותפקודיים. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שימור המורפולוגיה של התאים והמיקום בתוך המרחב האווירי של הריאה. יש להקפיד תוך הצבת מתאם ספח הפיתוי לתוך קנה הנשימה ומחט זלוף לתוך החדר הימני כדי להבטיח אינפלציה נאותה קיבעון.
כדי להקים את מנגנון אינפלציית האוויר, הניחו מזרק לעמודת המים במחזיק טבעת ומדדו גובה אנכי של 25 ס"מ מרציף בעלי החיים ל-25 ס"מ בעמוד המים. חבר לסוף צינור עמוד המים לסטופקוק בתא האוויר וחבר צינור מהפיתוי הנשי של תא האוויר לעצירה על מיכל העיבוד של בעלי החיים. אשר כי המכסה לתא האוויר ואת stopcock בצד החיצוני של מיכל עיבוד בעלי חיים סגורים, וכי stopcock על הצינורות המובילים מעמוד המים לתא אינפלציית האוויר פתוח.
לאחר מכן מלאו את המזרק במים עד לסימן 25 ס"מ. מים יזרמו דרך המזרק וצינורות לתוך תא האוויר. ברגע שהלחץ ישתווה, המים יפסיקו לזרום.
כדי להכין את הריאות לאינפלציה לעשות חתך רוחבי אחד בדופן הבטן מתחת לכלוב הצלעות של העכבר המתת חסד, ו חתירה שנייה לרוחב דופן הבטן מעל הירכיים. חותכים לאורך קו האמצע מהחתך הפנימי לכיוון החתך העליון, ולהשתמש במספריים קהים כדי לבצע בזהירות חתך לצד הצדדי של הסרעפת. הריאות אמורות לקרוס ברגע שהסרעפת מנוקבת.
חותכים לרוחב לאורך הסרעפת כדי לפתוח את חלל בית החזה ולחתוך בצורה מעולה לאורך בעצם החזה מתהליך xiphoid לחרוז להטוטן, לרוחב מעל כלוב הצלעות כדי לחשוף באופן מלא את הלב והריאות. להצמיד את הצדדים של כלוב הצלעות ולעשות חבטה בקו האמצע בצוואר, מעל קנה הנשימה. הסר את העור, השריר, בלוטת התריס, ורקמת החיבור המקיפה את קנה הנשימה ולהשתמש במלקחיים מעוקלים כדי להחליק שתי חתיכות של תפר מתחת קנה הנשימה האחורי.
השתמש בחתיכת תפר אחת כדי להחזיק את מתאם ספח פיתוי האינפלציה במקום ולהשתמש מחט 18 על ידי סנטימטר אחד כדי להפוך חור קטן קנה הנשימה. הכנס מתאם ספח פיתיון 20 מד לתוך החור ולקשור את התפר סביב קנה הנשימה מיד distal למקום שבו מאמץ ספח הפיתוי נכנס לחור. לאחר מכן להעביר את החיה למיכל עיבוד בעלי חיים ולחבר את מתאם ספח הפיתוי אל הפיתוי הנשי בחלק הפנימי של מיכל עיבוד בעלי חיים.
כדי לנפח את הריאות, מניחים את מד 25 על ידי מחט 5/8 אינץ 'מחובר למנגנון זלוף צינורות לתוך החדר הימני של הלב לחתוך את אב העורקים בבטן כדי לאפשר לדם לנקז מהלב כדי לקדם את זרימת זלוף דרך הריאות. פתח את stopcock בצד החיצוני של מיכל עיבוד בעלי חיים ולנפח את הריאות ב 25 ס"מ של מים במשך חמש דקות, תוך טיפול כי מפלס המים במזרק לא לרדת מהר מדי. במהלך הרגע האחרון של אינפלציית הריאות, הפעל את המשאבה peristaltic לקצב זרימה של 10 מיליליטר לדקה.
תמיסה הפרין צריך לזרום מהבקבוק דרך הצינורות לתוך החיה. לאחר ניפוח הריאות במשך חמש דקות, לכבות את המשאבה ולהעביר את perfusate מן הפרין לקיבוע. מנמיכים את מזרק עמוד המים ל-20 ס"מ.
זה נורמלי עבור בועות אוויר לנוע בתוך עמוד המים כמו הלחץ משתנה. בדוק את מפלס המים במזרק. זה צריך להיות בסימן 25 ס"מ.
ואז לחכות דקה אחת כדי לאפשר לריאות להתנפח מ 25 עד 20 ס"מ של לחץ מים לפני הפעלה מחדש של המשאבה בקצב זרימה 6.5 מיליליטר לדקה במשך 10 עד 15 דקות, זלוף קיבוע כלי דם. להפקת רקמת הריאה המנופחת והקבועה, קשרו בחוזקה את פיסת החוט השנייה סביב קנה הנשימה, דיסטליים למתאם ספח הפיתוי, והסירו את מתאם ספח הפיתוי מקנה הנשימה. הסר את המחט מהלב והשתמש במספריים קהים כדי לחתוך את רקמת החיבור, האחורית לחציון, כדי לשחרר את הריאות והלב מחלל בית החזה תוך הקפדה על הימנעות מנקירת הריאות.
בזהירות להסיר את הלב מן הריאות ולהניח את הריאות לתוך 20 עד 25 מיליליטר של קיבוע בצינור חרוט 50 מיליליטר. משוך את התפר מחזיק את קנה הנשימה דרך הפתח בצינור חרוט ולאבטח את התפירה על ידי החוטים של הכובע. לאחר מכן הפוך את הצינור כדי להבטיח כי ריאות מצופות, מנופחות אוויר להישאר שקוע לחלוטין קיבוע ולעבד את הריאות למחקרים היסטולוגיים על פי פרוטוקולים סטנדרטיים.
כאשר הסרעפת נכנסת במהלך הניתוח, שלמות החלל הפלורלית תבוטל והריאות יקרסו. עם יישום של 25 ס"מ של לחץ מים, האוויר ייכנס לריאות דרך קנה הנשימה ויש לראות את האינפלציה בקלות. לאחר שהריאות התרחבו לחלוטין, ניתן להפחית את לחץ האינפלציה ל -20 ס"מ כדי לשמור על הריאות מנופחות ללא רגישות יתר.
הריאות צריכות להישאר מנופחות לאחר קשירת קנה הנשימה והסרה מבית החזה. דפלציה יכולה להתרחש אם הריאות מנוקבים במהלך הכנת בעלי החיים או מיצוי ריאות. ניתוח היסתולוגי של חלקי ריאות מנופחים מגלה כי מעט מאוד תאי חיסון נמצאים בלומן דרכי הנשימה של רקמות קבועות באמצעות אינפלציה מבוססת נוזלים מסורתית.
לעומת זאת, תאים דלקתיים נשמרים במרחב האווירי של רקמות קבועות באמצעות זלוף כלי דם עם אינפלציה אווירית. בעקבות אינפלציית האוויר עם קיבוע שפע, רקמת הריאה עשויה להיות מוטבעת בפורמלין לניתוח רקמות וניתוח לאחר מכן באמצעות טכניקות היסטולוגיות, כולל כתמים, אימונוהיסטוכימיה והדמיה חיסונית.
