이것은 구조적 및 기능적 분석을 위해 폐를 보존하기 위한 공기 인플레이션과 혈관 관류 고정의 장점을 결합한 저렴한 방법입니다. 이 기술의 주요 장점은 폐의 영공 내에서 세포 형태와 위치 모두의 보존입니다. 적절한 인플레이션과 고정을 보장하기 위해 루어 스텁 어댑터를 기관지와 관류 바늘을 오른쪽 심실로 배치하는 동안 주의를 기울여야 합니다.
공기 인플레이션 장치를 설정하려면 물 기둥에 대한 주사기를 링 홀더에 넣고 동물 플랫폼에서 25cm의 수직 높이를 물 기둥에 25cm로 측정합니다. 공기 챔버의 스톱콕에 물 기둥 튜브의 끝에 부착하고 동물 처리 컨테이너에 스톱콕에 공기 챔버의 여성 미끼에서 튜브를 부착합니다. 동물 가공 용기의 외부의 에어 챔버와 스톱콕에 대한 캡이 닫혀 있는지 확인하고, 물 기둥에서 공기 인플레이션 챔버로 이어지는 튜브의 스톱콕이 열려 있는지 확인합니다.
그런 다음 주사기를 물로 채우고 25센티미터 마크에 들어오게 합니다. 물은 주사기를 통해 흐르는 공기 챔버로 튜브합니다. 압력이 균등화되면 물이 흐르는 것을 멈춥춥습니다.
인플레이션에 대한 폐를 준비하기 위해 안락사 마우스의 갈비뼈 아래 복벽에 하나의 측면 절개를하고 엉덩이 위의 두 번째 측면 복벽 절개를합니다. 내부 절개에서 중간선을 따라 절단하여 우수한 절개를 향해 잘라내고 무딘 가위를 사용하여 다이어프램의 측면으로 절개를 합니다. 다이어프램이 뚫리자마자 폐가 무너져야 합니다.
횡격막을 따라 횡가로 자르고 흉부 구멍을 열고 심포니 프로세스에서 저글러 노치까지 흉골을 따라 우수하게 자르고, 측면으로 는 흉곽 위로 잘라 심장과 폐를 완전히 노출시합니다. 늑골 케이지의 측면을 고정하고 기관 위 목에 중간 선절을합니다. 기관지를 둘러싼 피부, 근육, 갑상선 및 결합 조직을 제거하고 곡선 된 집게를 사용하여 후방 기관 아래에 봉합사 두 조각을 밀어 넣습니다.
봉합사의 한 조각을 사용하여 인플레이션 미끼 스텁 어댑터를 제자리에 고정하고 기관지에 작은 구멍을 만들기 위해 18 게이지를 1 인치 바늘로 사용합니다. 20 게이지 미끼 스텁 어댑터를 구멍에 삽입하고 유혹 스텁 채택자가 구멍에 들어가는 곳에 즉시 회부된 기관 주위의 봉합사를 묶습니다. 그런 다음 동물을 동물 가공 용기에 옮기고 미끼 스텁 어댑터를 동물 가공 용기 의 안쪽에 있는 암컷 미끼에 부착합니다.
폐를 팽창시키기 위해, 심장의 오른쪽 심실로 튜브관 관류 장치에 부착 된 5/8 인치 바늘에 의해 25 게이지를 배치하고 혈액이 심장에서 배출하고 폐를 통해 perfusate의 흐름을 촉진 할 수 있도록 복부 대동맥을 잘라. 동물 가공 용기의 바깥쪽에 스톱콕을 열고 5분 동안 25cm의 물에서 폐를 팽창시키고 주사기의 수위가 너무 빨리 감소하지 않도록 주의하십시오. 폐 인플레이션의 마지막 순간 동안 연골 펌프를 분당 10 밀리리터의 유량으로 켭니다.
헤파린 용액은 병에서 튜브를 통해 동물로 흘러 들어와야 합니다. 5 분 동안 폐를 팽창 한 후 펌프를 끄고 허파린에서 허퍼라테스를 고정으로 전환하십시오. 물 기둥 주사기를 20cm로 낮춥춥니까.
압력이 변경됨에 따라 기포가 물 기둥 내에서 이동하는 것은 정상입니다. 주사기의 수위를 확인하십시오. 그것은 25 센티미터 마크에 있어야합니다.
그런 다음 1분 정도 기다린 후 1분 간 폐가 수압의 25~20cm에서 수축된 후 분당 유량 6.5밀리리터로 10~15분 간 혈관 고정 관류로 펌프를 다시 시작할 수 있도록 합니다. 팽창및 고정폐 조직의 추출을 위해, 기관 주위의 두 번째 실을 단단히 묶고, 미끼 스텁 어댑터에 단언하고, 기관지에서 미끼 스텁 어댑터를 제거한다. 심장에서 바늘을 제거하고 결합 조직을 잘라 무딘 가위를 사용, 중간에 후방, 폐를 구멍을 피하기 위해 주의 흉부 구멍에서 폐와 심장을 해제.
조심스럽게 폐에서 심장을 제거하고 50 밀리리터 원내 튜브에 20~25밀리리터의 고정체로 폐를 배치합니다. 원추형 튜브의 개구부를 통해 기관지를 들고 봉합사를 당기고 캡의 실로 봉합사를 고정시십시오. 그런 다음 튜브를 반전하여 부력, 공기 팽창 폐가 고정에 완전히 침수되고 표준 프로토콜에 따라 히스토로지학 연구를 위해 폐를 처리합니다.
해부 중에 다이어프램에 입력하면 흉막 공간의 무결성이 폐지되고 폐가 붕괴됩니다. 25센티미터의 수압을 적용하면 공기가 기관을 통해 폐로 유입되고 인플레이션은 쉽게 관찰되어야 합니다. 폐가 완전히 확장되면 인플레이션 압력을 20센티미터로 감소하여 폐를 과다혈압 없이 팽창시킬 수 있습니다.
폐는 흉부에서 기관 결찰 및 제거 후에 팽창남아 있어야 합니다. 디플레이션은 동물 제제 또는 폐 추출 중에 폐가 천공되는 경우 발생할 수 있습니다. 팽창된 폐 단면의 조직학 분석은 전통적인 액체 기지를 둔 인플레이션을 사용하여 고정된 조직의 기도 루멘에 존재하는 거의 면역 세포가 있다는 것을 밝힙니다.
대조적으로, 선동적인 세포는 공기 인플레이션과 혈관 관류를 통해 고정된 조직의 기면 공간 안에 보존됩니다. 풍부 고정을 가진 공기 인플레이션에 따라, 폐 조직은 염색, 면역 조직 화학 및 면역 형광 화상 진찰을 포함하여 조직 단면 화 및 후속 분석을 위한 포르말린에 내재될 수 있습니다.
