יותר מ-50% מחולי סרטן המעי הגס מפתחים גרורות בכבד באמצעות הפצת ורידים בפורטל. והמודלים הנוכחיים של בעלי חיים לחקר גרורות בכבד של סרטן המעי הגס עדיין אינם מספיקים כדי לשחזר את התהליך הביולוגי. הזרקת ורידים פורטלית של סרטני סרטן המעי הגס מספקת סביבת גידול עשירה בפיברובלסטים המאפשרת לחקור את ההצלבה בין תאים סרטניים גרורתיים ו- CAS בגרורות כבד של סרטן המעי הגס.
טכניקה זו מספקת פלטפורמה להערכת היעילות של אסטרטגיות טיפוליות המכוונות למיקרו-סביבה של הגידול של גרורות הכבד של סרטן המעי הגס. שיטה זו שימושית במיוחד לחקר אינטראקציות בין CAS, תאי גידול ומיקרו-סביבה של הגידול. אם קצה הכותנה אינו מונח כראוי באתר ההזרקה, דימום יתר עלול להתרחש לאחר הסרת המחט.
ההשריה של קצה הכותנה נעצרת ברגע שמקום ההזרקה נמצא. זיהוי וריד הפורטל והדמיית אתר ההזרקה יכולים להיות קשים ללא הדגמה חזותית של הליך זה. כדי להתחיל, להכין אזור כירורגי אספטי באמצעות וילונות סטריליים על כרית חימום.
בנוסף, הכינו את כל המכשירים הדרושים לניתוח כמתואר בכתב היד של הטקסט. לאחר מכן האר את האזור הכירורגי על ידי התאמת מיקום מקור האור. לאחר מכן, להזריק באופן תת עורי 0.1 מיליגרם לכל קילוגרם של משקל גוף של בופרנורפין לעכבר לניהול כאב כירורגי.
לאחר מכן מרדימים את העכבר ומשתמשים במכונת גילוח חשמלית, גילחו את הבטן האמצעית עד העליונה באזור מרוחק מהאזור הכירורגי האספטי כדי למנוע זיהום שיער באתר. נקו את אתר החתך לסירוגין עם בטאדין ו-80% אתנול כדי לעקר את האזור הכירורגי. חזרו על הפעולה שלוש פעמים.
מניחים את העכבר באזור הניתוח על משטח חימום במצב שכיבה עם תחזוקת הרדמה איזופלורנית. לאחר מכן מניחים וילון כירורגי עם חור על בטנו. הרימו את עור הבטן עם מלקחיים ועשו חתך עור של שניים עד שלושה סנטימטרים בקו האמצע עם מספריים, חותכים רק את העור, מוודאים שהחתך נע בין אמצע הבטן לתהליך ה-xiphoid של עצם החזה ולא מעל הקצה התחתון של תהליך ה-xiphoid.
לאחר מכן הרימו באופן מלא את דופן הצפק עם מלקחיים ועשו חתך דומה של שניים עד שלושה סנטימטרים לצפק עם מספריים. הימנע חיתוך המעי ואת הסרעפת. לאחר מכן, משרים גזה כירורגית עם מלח חם ומניחים אותה ליד החתך מימינו של המנתח.
משכו בעדינות את המעי הדק והגבוה החוצה באמצעות ניצן כותנה ספוג במי מלח והניחו אותם על הגזה הספוגה במי מלח. מכסים את המעיים בגאזה רטובה נוספת כדי לשמור עליהם לחים. לאחר מכן, בעדינות למשוך את המעי לימינו של המנתח עם הגזה הרטובה.
לאחר מכן הפעל מתח עדין כדי לדמיין את וריד הפורטל. אם ההדמיה של וריד הפורטל קשה, כוונו בעדינות את מיקום הבטן עם ניצן כותנה רטוב. לאחר צנרת עדינה של תרחיף הגידול מספר פעמים כדי לקבל תרחיף תא הומוגני, משכו 100 מיקרוליטרים של תרחיף התא לתוך המילטון או מזרק מיליליטר אחד המחוברים למחט 33 מדים, תוך הימנעות מבועות אוויר.
הכניסו באיטיות את המחט לתוך וריד הפורטל עם עומק הכנסה של שלושה עד ארבעה מילימטרים וזווית המחט כמעט מקבילה לווריד הפורטל. להזריק את תאי הגידול באיטיות במשך 30 שניות כדי למנוע חסימה של וריד הפורטל. צבע הכבד משתנה באופן זמני מאדום ללבן.
לאחר ההזרקה, יש להסיר את המחט באיטיות ומיד להפעיל לחץ עדין על אתר ההזרקה עם ניצן כותנה יבשה למשך חמש דקות. מוציאים את ניצן הכותנה ומניחים מיד ספוג המוסטטי על מקום ההזרקה. החזיקו את הספוג עם ניצן כותנה או מלקחיים והפעילו לחץ עדין במשך חמש דקות נוספות.
לאחר חמש דקות, הסר את הלחץ לספוג המוסטטי ומאשר כי אין דימום ממקום ההזרקה. אם מתרחש דימום, מיד לבצע hemostasis בלחץ עם ניצן כותנה במשך כ 10 דקות. לאחר מכן מרחו ספוג המוסטטי נוסף למשך חמש דקות נוספות.
לאחר אישור כי אין דימום, להסיר את gauzes כירורגי על המעיים. לאחר מכן באמצעות מזרק מלא בחמישה מיליליטרים של מלח, להשפריץ את המלח למעיים כדי למנוע הידבקות איברים. הניחו בעדינות את המעיים בחזרה בתוך חלל הבטן ותפרו את הצפק באמצעות תפרים של 4-0 פוליגלקטין.
לאחר מכן הרמת שני צידי העור עם מלקחיים, להחיל מהדקי עור כדי לסגור את חתך העור, נזהר לא להדק את המעי. כבה את האיזופלורן, אך שמור על זרימת החמצן פועלת. נטר בזהירות את העכבר.
וכאשר העכבר מתעורר, הניחו אותו בכלוב ריק על כרית חימום. עקוב אחר העכבר עד שהוא בהכרה ואמבולציה כרגיל. ארבע שעות לאחר הניתוח, להזריק באופן תת עורי 0.1 מיליגרם לקילוגרם של בופרנורפין.
בזהירות לפקח על העכבר מדי יום במשך שבוע, לבדוק את התפרים ואת ריפוי הפצע. שבעה עד 10 ימים לאחר הניתוח, יש להסיר את מהדקי העור באמצעות מסיר מהדק. הכלאה של RNA in situ שבועיים לאחר הזרקת זנב AAV-8 Islr הראתה ביטוי יתר של Islr בכבד.
שבועיים לאחר הזרקת AAV mRuby2, הוזרקו תרחיפים חד-תאיים של אורגנואידים מסרטן המעי הגס לווריד פורטל העכבר. באופן מקרוסקופי, הזרקת וריד פורטל זו גרמה למספר גושים של גידולים לבנים בכבד. ההמטוקסילין והכתמת אאוזין של גרורות הכבד של סרטן המעי הגס המושרות על ידי הזרקת הווריד הפורטלי הדגימו היסטופתולוגיה של אדנוקרצינומה צינורית מובחנת למדי מלווה בתגובה סטרומלית דסמופלסטית ונמק.
היסטולוגיה עשירה בסטרומה זו שחזרה בנאמנות את זו של גרורות בכבד של סרטן המעי הגס האנושי, והפכה את המודל הזה למתאים למחקר תרגומי החוקר את סטרומה של הגידול הגרורתי. אימונוהיסטוכימיה של אקטין שרירי אלפא חלק אישרה את נוכחותם של פיברובלסטים הקשורים לסרטן, ואילו הכתם האדום של פיקרו-סיריוס הדגים מטריצה חוץ-תאית בשפע במזנכים של הגידול. אימונוכימיה עבור EPCAM גילתה כי סרטן המעי הגס גרורתי הראה ניצנים של הגידול, שהוא מאפיין של פרוגנוזה גרועה סרטן המעי הגס.
ומדד התוויות של Ki67 היה כ-80% מה שמעיד על כך שרוב תאי הגידול פעילים באופן מיטוטי. העכברים הראו הישרדות חציונית של 57 ימים לאחר הזרקת הגידול לווריד הפורטל. עכברים שטופלו ב-AAV-8 Islr הראו שיפור בהישרדות העכברים, ירידה באותות הדמיה in vivo מגידולים, איתות מוגבר של חלבונים מורפוגנטיים בעצמות, וירידה בתאי התפשטות Ki67.
יש לוודא כי קצה הכותנה מוחל על אתר ההזרקה הנכון והספוג ההמוסטטי מוחל רק לאחר שהדימום נפסק. ניתן לעקוב אחר הקמת הגידול באמצעות הדמיית IVIS כדי לוודא שתאי הגידול גדלים בתוך הכבד.
