Kolorektal kanserli hastaların %50'sinden fazlasında portal ven yayılımı yoluyla karaciğer metastazı gelişir. Kolorektal kanser karaciğer metastazını incelemek için mevcut hayvan modelleri, biyolojik süreci özetlemek için yetersiz kalmaktadır. Kolorektal kanser tümöroidlerinin portal ven enjeksiyonu, kolorektal kanser karaciğer metastazında metastatik kanser hücreleri ile CAS arasındaki çapraz etkileşimin araştırılmasına izin veren fibroblasttan zengin bir tümör ortamı sağlar.
Bu teknik, kolorektal kanser karaciğer metastazının tümör mikroçevresini hedef alan terapötik stratejilerin etkinliğini değerlendirmek için bir platform sağlar. Bu yöntem özellikle CAS, tümör hücreleri ve tümör mikroçevresi arasındaki etkileşimleri araştırmak için yararlıdır. Pamuk ucu enjeksiyon bölgesine doğru şekilde yerleştirilmezse, iğnenin çıkarılmasından sonra aşırı kanama meydana gelebilir.
Pamuk ucunun ıslatılması, enjeksiyon bölgesi bulunduktan sonra durur. Portal venin tanımlanması ve enjeksiyon bölgesinin görselleştirilmesi, bu prosedürün görsel olarak gösterilmesi olmadan zor olabilir. Başlamak için, bir ısıtma yastığı üzerinde steril perdeler kullanarak aseptik bir cerrahi alan hazırlayın.
Ek olarak, metin yazısında açıklandığı gibi ameliyat için gerekli tüm aletleri hazırlayın. Daha sonra ışık kaynağının konumunu ayarlayarak cerrahi alanı aydınlatın. Daha sonra, cerrahi ağrı yönetimi için deri altından kilogram vücut ağırlığı başına 0.1 miligram buprenorfin enjekte edin.
Daha sonra fareyi anestezi altına alın ve elektrikli tıraş makinesi kullanarak, saçların bölgeyi kirletmesini önlemek için aseptik cerrahi alandan uzak bir alanda ortayı üst karın bölgesine tıraş edin. Cerrahi bölgeyi sterilize etmek için Betadine ve% 80 etanol ile dönüşümlü olarak kesi bölgesini temizleyin. Üç kez tekrarlayın.
Fareyi cerrahi alana, izofluran anestezi bakımı ile sırtüstü pozisyonda bir ısıtma yastığı üzerine yerleştirin. Sonra karnının üzerinde bir delik bulunan cerrahi bir örtü yerleştirin. Karın derisini forseps ile kaldırın ve orta hatta makasla iki ila üç santimetrelik bir cilt kesisi yapın, sadece cildi kesin, insizyonun orta karın bölgesinden sternumun ksifoid sürecine kadar değiştiğinden ve ksifoid sürecin alt ucunun üzerinde olmadığından emin olun.
Daha sonra forseps ile periton duvarını tamamen kaldırın ve makasla peritona benzer iki ila üç santimetrelik bir kesi yapın. Bağırsak ve diyaframı kesmekten kaçının. Daha sonra, ılık salin ile cerrahi bir gazlı bez batırın ve cerrahın sağındaki insizyonun yanına yerleştirin.
Tuzlu suyla ıslatılmış bir pamuk tomurcuğu kullanarak ince ve kalın bağırsakları yavaşça dışarı çekin ve tuzlu suya batırılmış gazlı bezin üzerine yerleştirin. Bağırsakları nemli tutmak için ek ıslak gazlı bezle örtün. Daha sonra, bağırsağı ıslak gazlı bezle cerrahın sağına yavaşça çekin.
Ardından portal damarı görselleştirmek için hafif gerginlik uygulayın. Portal damarın görselleştirilmesi zorsa, midenin pozisyonunu ıslak bir pamuk tomurcuğu ile yavaşça ayarlayın. Homojen bir hücre süspansiyonu elde etmek için tümöroid süspansiyonu birkaç kez hafifçe boruladıktan sonra, hücre süspansiyonunun 100 mikrolitresini bir Hamilton'a veya 33 gauge iğneye bağlı bir mililitre şırıngaya çekerek hava kabarcıklarından kaçının.
İğne eğimini yavaşça üç ila dört milimetrelik bir yerleştirme derinliği ve iğne açısı portal damara neredeyse paralel olan portal damara yerleştirin. Portal venin tıkanmasını önlemek için tümör hücrelerini 30 saniye boyunca yavaşça enjekte edin. Karaciğerin rengi geçici olarak kırmızıdan beyaza değişir.
Enjeksiyondan sonra, iğneyi yavaşça çıkarın ve hemen beş dakika boyunca kuru bir pamuk tomurcuğu ile enjeksiyon bölgesine hafif bir basınç uygulayın. Pamuk tomurcuğu çıkarın ve hemen enjeksiyon bölgesine hemostatik bir sünger uygulayın. Süngeri pamuklu bir tomurcuk veya forseps ile tutun ve beş dakika daha hafif basınç uygulayın.
Beş dakika sonra, hemostatik süngere basıncı çıkarın ve enjeksiyon bölgesinden kanama olmadığını onaylayın. Kanama meydana gelirse, hemen yaklaşık 10 dakika boyunca pamuklu bir tomurcukla basınç hemostazı uygulayın. Daha sonra beş dakika daha ek bir hemostatik sünger uygulayın.
Kanama olmadığını doğruladıktan sonra, bağırsaklardaki cerrahi gazlı bezleri çıkarın. Daha sonra beş mililitre salin ile doldurulmuş bir şırınga kullanarak, organ yapışmasını önlemek için salini bağırsaklara fışkırtın. Bağırsakları nazikçe karın boşluğunun içine yerleştirin ve 4-0 poliglactin sütür kullanarak periton dikişini dikin.
Daha sonra cildin her iki tarafını forseps ile kaldırın, cilt insizyonunu kapatmak için cilt zımbalayıcıları uygulayın, bağırsağı zımbalamamaya dikkat edin. İzofluranı kapatın, ancak oksijen akışını çalışır durumda tutun. Fareyi dikkatlice izleyin.
Fare uyandığında, bir ısıtma yastığı üzerindeki boş bir kafese yerleştirin. Fareyi bilinçli olana ve normal şekilde yürüyene kadar izleyin. Ameliyattan dört saat sonra, deri altından kilogram buprenorfin başına 0.1 miligram enjekte edilir.
Fareyi bir hafta boyunca günlük olarak dikkatlice izleyin, dikişleri ve yara iyileşmesini kontrol edin. Ameliyattan yedi ila 10 gün sonra, bir zımba sökücü kullanarak cilt zımbalayıcılarını çıkarın. Kuyruk damarı AAV-8 Islr enjeksiyonundan iki hafta sonra RNA in situ hibridizasyonu, karaciğerde Islr'nin aşırı ekspresyonunu gösterdi.
AAV mRuby2 enjeksiyonundan iki hafta sonra, kolon kanseri organoidlerinin tek hücreli süspansiyonları fare portal venine enjekte edildi. Makroskopik olarak, bu portal ven enjeksiyonu karaciğerde çoklu beyaz tümör nodülleri ile sonuçlandı. Portal ven enjeksiyonu ile indüklenen kolorektal kanser hepatik metastazlarının hematoksilin ve eozin boyamaları, desmoplastik stromal reaksiyon ve nekroz eşliğinde orta derecede diferansiye tübüler adenokarsinomun histopatolojisini gösterdi.
Bu stroma bakımından zengin histoloji, insan kolorektal kanser karaciğer metastazlarınınkini sadık bir şekilde özetledi ve bu modeli metastatik tümör stromasını araştıran translasyonel araştırmalar için uygun hale getirdi. Alfa düz kas aktininin immünohistokimyası, kanserle ilişkili fibroblastların varlığını doğrularken, Picro-Sirius kırmızı boyaması, tümör mezenkiminde bol miktarda hücre dışı matriks gösterdi. EPCAM için immünokimya, metastatik kolorektal kanserin, kötü prognoz kolorektal kanserin bir özelliği olan tümör tomurcuklanması gösterdiğini ortaya koymuştur.
Ve Ki67 etiketleme indeksi yaklaşık% 80 idi, çoğu tümör hücresinin mitotik olarak aktif olduğunu gösteriyordu. Fareler, portal ven içine tümöroid enjeksiyonundan 57 gün sonra medyan sağkalım gösterdi. AAV-8 Islr ile tedavi edilen fareler, fare sağkalımının arttığını, tümörlerden in vivo görüntüleme sinyallerinin azaldığını, kemik morfogenetik protein sinyalinin arttığını ve Ki67 çoğalan hücrelerinin azaldığını gösterdi.
Pamuk ucunun doğru enjeksiyon bölgesine uygulandığından ve hemostatik süngerin sadece kanama durduktan sonra uygulandığından emin olun. Tümör oluşumu, tümör hücrelerinin karaciğer içinde büyüdüğünden emin olmak için IVIS görüntüleme kullanılarak izlenebilir.
