ניתוח מיקרוסקופיית וידאו במהירות גבוהה לאבחון קו ראשון של דיסקינזיה סילארית ראשונית

ניתוח מיקרוסקופיית וידאו במהירות גבוהה הוא כלי אמין לאבחון קו ראשון של דיסקינזיה סילארית ראשונית. טכניקה זו קלה יחסית לביצוע, מהירה, חסכונית, ובידיים מנוסות אחרות כלי אמין מאוד. וזה ישים עבור חולים מכל קבוצות הגיל.

מיקרוסקופיית וידאו חושפת גם תפקוד סילארי משני. כמו, למשל, בגלל זיהומים חיידקיים או ויראליים. אבל זה שימש בעיקר כדי לאבחן dyskinesia סילארי ראשוני.

מדענים משתמשים בשיטה זו גם כדי לדמיין תהליכים תוך-תאיים או תפקודים ביולוגיים בתאים חיים. מי שתסייע לי בהליך זה תהיה הגברת טינה פרומאה, טכנאית המעבדה שלנו.

לפני איסוף תאי האפיתל הנשימתיים, בקשו מהחולה לפוצץ את האף ביסודיות. כאשר המטופל מוכן, שמור על ראשו של המטופל קבוע ביד אחת והשתמש במברשת אינטרדנטלית בגודל 0.6 מילימטר ביד השנייה כדי להבריש את הטורבינט הנחות של הנחיריים כדי לאסוף מספיק רצועות תאי אפיתל. שחררו את רצועות התאים שנקטפו לתוך צינור מיקרו-צנטריפוגה של 1.5 מיליליטר המכיל את ה-DMEM הניזון מהתא.

לאחר סגירת המכסה של צינור microcentrifuge להחזיק את הצינור כנגד מקור האור ולנער את הצינור כדי לגלות רצועות תאים וקונגלומרטים שנקטפו. מאוחר יותר, מניחים את צינורות המיקרוצנטריפוגה כאשר המכסים סגורים כראוי בתיבת פוליסטירן. לפני סגירת הקופסה יש לוודא היטב שהצינורות קבועים בתוך הקופסה.

לאחר מכן הוסיפו חבילה קרה לקופסה תוך הימנעות מהקפאת הדגימה. לאחר הסרת צינורות המיקרו צנטריפוגה המכילים את הדגימות מתיבת הפוליסטירן, הניחו צינור אחד מתחת למכסה המנוע של יחידת החימום של המיקרוסקופ כדי לחמם עד 37 מעלות צלזיוס לניתוח מיקרוסקופ וידאו במהירות גבוהה או HSVMA. לאחר מכן, הפעל את המצלמה ואת התוכנה של יחידת הווידאו במחשב.

השתמש בפיפטה כדי לקחת דגימה קטנה ולהניח שתי טיפות של הדגימה לתוך cuvette. מכסים את הקובט במכסה לפני שמניחים אותה מתחת למיקרוסקופ. השתמשו בעדשת טבילת שמן עם הגדלה של פי 100 והניחו טיפה של שמן טבילה על פני השטח של האופטיקה.

תוך כדי התקרבות לתחתית המנה עם עדשת המיקרוסקופ, חפשו את אשכולות התאים ללא תאי דם אדומים ועם תכולת ריר נמוכה. לאחר מציאת אזור עניין מייצג, או ROI, התמקדו בקבוצה אחת של הריסונים המכות עם תנועות הריסונים הגדולות ביותר והקליטו רצף וידאו. רשמו את התאים עם ריסונים פועמים בצד וממלמעלה.

הניתוח הייצוגי מראה תנועות ריסונים רגילות הנראות בצד וממלמעלה. הדגימה של דיסקינזיה סילארית ראשונית, או חולה PCD, עם מוטציה בגן DNAH11 הדגימה את התבנית הקלאסית הנוקשה המינימלית הנעה של פעימה סילארית. כאשר מסתכלים מהצד ומעל.

בחולה PCD אחר עם אותה מוטציה נצפתה תבנית היפרקינטית שונה אך לא יעילה של הריסונים המכות. דפוס פעימה סילארי פתולוגי ותדירות פעימה סילארית נראו גם אצל חולה הסובל מזיהומים חוזרים ונשנים בדרכי הנשימה העליונות. אם הליך ההברשה מתבצע בקפדנות ניתוח HSVMA לא יכול להתבצע כמו תאי אפיתל ciliated היו מכוסים בציפוי של תאי דם אדומים.

השלב החשוב ביותר בהליך הוא לקבל מספיק תאים נשימתיים מן הצחצוח ולשמור על חומר זה נשמר היטב עבור ניתוח וידאו. החומר הנותר יכול לשמש לביצוע מיקרוסקופיית אלקטרונים או מיקרוסקופיה אימונופלורסקית כדי לזהות פגמים מבניים אפשריים בריסונים או כדי לחשוף פגמים וסינתזה של חלבונים סילאריים.