הפרוטוקול מספק חלופה לא ניתוחית מדויקת, בטוחה ויעילה לשיטות ההזרקה הכירורגיות והעיוורות המסורתיות. זוהי גם טכניקת ההזרקה המדויקת ביותר עבור ניוון תימוזים בעכברים מבוגרים או מדוכאי חיסון. היתרון העיקרי הוא הליך הזרקה מלחיץ מינימלי, בטוח ומדויק מאוד, אך גם מהיר, ובכך מאפשר ניסויים בקנה מידה גדול ללא פגיעה בנתונים כתוצאה מדיכוי חיסוני הקשור ללחץ כירורגי.
שמירה על יישור המחט והמתמר תוך כדי התקדמותו דרך דופן בית החזה דורשת תרגול מסוים. לכן אנו ממליצים לשתף פעולה עם רדיולוג התערבותי מנוסה כדי לבצע זריקות או לספק הדרכה. מי שתעזור להדגים את ההליך תהיה שיינה אנונסיו, טכנאית מהמעבדה שלי.
כדי להתחיל, להחיל שכבה דקה של קרם depilatory על אזור החזה הקדמי של העכברים במשך פחות מדקה אחת כדי להסיר את הפרווה. השתמשו במגבת נייר רטובה כדי להסיר את הקרם ואת הפרווה הרופפת. אשר את עומק ההרדמה המתאים על ידי חוסר תגובה לצביטת הכפה האחורית.
יש למרוח משחת עיניים על שתי העיניים כדי למנוע התייבשות של הקרנית. הנח עכבר אחד בכל פעם במצב שכיבה על הפלטפורמה המחוממת של תחנת הדמיית אולטרסאונד של בעלי חיים קטנים עם חרוט האף במקום. הצמידו את העכבר לבמה בעזרת סרט דבק רפואי בגפיים האחוריות והקדמיות.
יש לחטא את עור בית החזה העליון ללא פרווה באמצעות אפליקטור כלורהקסידין גלוקונאט. הפעל את הבדיקה הליניארית בתדר הגבוה ביותר הזמינה. בדרך כלל, הבדיקה עם הרזולוציה המרחבית הגבוהה ביותר עבור גודל החיה המצולמת.
הפעל את הבדיקה על ידי הקשה על הלחצן המתאים לאחר מסך ההפעלה. כדי למטב את הגדרות האולטרסאונד להדמיה והזרקה, התאם את עומק שדה הראייה לגודל המתאים לחיית המטרה על ידי התאמת המחוונים המכוונים אנכית בצד ימין של המסך. התאם את רווח קנה המידה האפור על-ידי החלקת הלחצן לאורך הפס האופקי בתחתית המסך.
לאחר מכן, התאם את אזור המוקד לרמה הצפויה של בלוטת התימוס. החל על מיליליטר אחד של ג'ל אולטרסאונד על משטח מתמר בזמן שהוא זקוף, או נח במחזיק מכונת אולטרסאונד או בידיו של עוזר. כדי להכין שדה סטרילי קטן ליד הפלטפורמה המחוממת, רוקנו כיסוי בדיקה סטרילי, גומייה, כפפות סטריליות וג'ל אולטרסאונד סטרילי על השדה הסטרילי.
לאחר מכן, לבש את הכפפות הסטריליות. מניחים בזהירות את כיסוי הבדיקה הסטרילי מעל מתמר האולטרסאונד והג'ל. כדי לשמור על סטריליות, געו רק בכיסוי הסטרילי.
החליקו את הגומייה הסטרילית מעל כיסוי הבדיקה כדי לשמור אותה במקומה. מניחים שניים עד שלושה מיליליטר של ג'ל אולטרסאונד סטרילי על המתמר. מניחים את הבדיקה בעלת ג'ל האולטרסאונד במאונך על החלק המחוטא של דופן החזה הקדמית של העכבר לצורך הדמיה ראשונית, תוך שמירה על סטריליות.
צפה ובצע אופטימיזציה של תמונת האולטרסאונד כפי שהודגם קודם לכן. כדי לסרוק את החזה הקדמי של העכבר במישור רוחבי, החזק את המתמר אנכית והזז אותו למעלה ולמטה מהצוואר אל הבטן בתנועה דמוית מכחול או גורפת. כאשר הלב מרוכז בשדה הראייה, טאטאו את המתמר מעט לכיוון הצוואר.
שימו לב לשני המבנים השחורים הזוגיים העגולים משני צדי החזה העליון. באמצעות בדיקת אולטרסאונד, אתר את החלק הרחב ביותר של בלוטת התימוס, שהוא בדרך כלל אתר היעד האידיאלי להזרקה. צפו מסלול מחט אופקי במיקום הנבחר, ושימו לב היכן נמצאים כלי הדם העיקריים באתר זה.
יש להימנע מכלי דם אלה במהלך ההזרקה. כלי הדם יהיו מבנים פולסטיים היפואקואיים. אם אינכם בטוחים, הפעילו את מצב דופלר הצבע על ידי הקשה על לחצן הצבע במסך כדי לבדוק אם יש זרימה בתוך כלי הדם.
החזיקו את המתמר ביד אחת ומחט אינסולין בעלת 30 מדים עם 10 מיקרוליטרים של הזרקה ביד השנייה. כדי להתחיל בתהליך ההזרקה, הזז את המתמר לרוחב כך שהתימוס יהיה מחוץ למרכז בשדה הראייה של האולטרסאונד. ודא כי הצד השני של שדה הראייה מורכב בעיקר ג'ל אולטרסאונד ולא שום דבר אחר.
מניחים את קצה המחט בג'ל שמתחת למתמר, ומזיזים באיטיות את המחט עד שהיא מוצגת בצמוד לפני העור. תוך כדי הדמיה רציפה של המחט תחת אולטרסאונד, הכנס את המחט לבלוטת התימוס עם מסלול מלעורי הרחק מכלי הדם. השתמש במסלול אופקי של בלוטת התימוס כדי למקם את קצה המחט באונה התימית בניגוד לאתר הכניסה.
ברגע שקצה המחט נמצא בתוך החלק הרצוי של בלוטת התימוס, הזריקו במהירות את התוכן מהמזרק בעל 30 המדים תוך שימוש בהדמיה סונוגרפית. כדי לייצב את המזרק במהלך החדרת המחט וההזרקה, החזיקו את המזרק בין האגודל לאצבע השלישית, ושלטו בבוכנה של המזרק באמצעות האצבע המורה. הסר את המחט לאחר שכל התוכן הופקד.
בעכברים צעירים, זיהוי בלוטת התימוס היה פשוט בשל גודלה הגדול של הבלוטה. זה היה מאתגר יותר בעכברים מבוגרים או מדוכאי חיסון. עם זאת, זה עדיין היה אפשרי מאוד עם ציוד אולטרסאונד מודרני.
הזרקה מוצלחת נרשמה כאשר המחט לא חצתה מבנים קריטיים, כגון הלב, אבי העורקים, או אחד הווריד הנבוב הנחות. קצה המחט הודגם במיקום המטרה שלו במהלך ההזרקה, ואישר את התצהיר התוך-תימי. המיקום התוך-תאי של ההזרקה אושר באמצעות לוציפרין כהזרקה לעכברים מהונדסים של לוציפראז.
אלה הוערכו באופן מיידי באמצעות הדמיית ביולומינסנציה, המאשרת את מיקומה הנכון של ההזרקה מבלי להקריב את החיה. לחלופין, טריפאן בלו הוזרק כסמן חזותי של אתר ההזרקה ודיוק ההזרקה באמצעות ex vivo עם נמק. הקבוצה שלנו משתמשת בטכניקה זו במשך מספר מחקרים גדולים, כולל מחקר אימונותרפיה של סרטן, המבוסס על הזרקה של תאי אב מהונדסים גנטית, וכדי לשפר את תפקוד התימיות בעכברים מדוכאי חיסון.
