يوفر البروتوكول بديلا غير جراحي دقيق وآمن وفعال لطرق الحقن الجراحية والعمياء التقليدية. كما أنها تقنية الحقن الأكثر دقة لضمور الغدة الصعترية في الفئران المسنة أو التي تعاني من نقص المناعة. الميزة الرئيسية هي إجراء الحقن المجهد بالحد الأدنى وهو آمن ودقيق للغاية ، ولكنه سريع أيضا ، مما يتيح إجراء تجارب واسعة النطاق دون المساومة على البيانات من كبت المناعة المرتبط بالإجهاد الجراحي.
يتطلب الحفاظ على محاذاة الإبرة ومحول الطاقة أثناء تقدمه عبر جدار الصدر بعض الممارسة. لذلك نوصي بالتعاون مع أخصائي الأشعة التداخلية ذي الخبرة لإجراء الحقن أو توفير التدريب. ستساعد في إظهار الإجراء شاينا أنونسيو ، وهي فنية من مختبري.
للبدء ، ضع طبقة رقيقة من كريم مزيل الشعر على منطقة الصدر الأمامية للفئران لمدة تقل عن دقيقة واحدة لإزالة الفراء. استخدم منشفة ورقية مبللة لإزالة الكريم والفراء السائب. تأكد من عمق التخدير المناسب عن طريق عدم الاستجابة لقرصة المخلب الخلفي.
ضع مرهم العيون على كلتا العينين لمنع جفاف القرنية. ضع فأرا واحدا في كل مرة في وضع الاستلقاء على المنصة الساخنة لمحطة التصوير بالموجات فوق الصوتية للحيوانات الصغيرة مع مخروط الأنف في مكانه. ثبت الماوس على المسرح بشريط لاصق طبي عند الأطراف الخلفية والأمامية.
تطهير الجلد الصدري العلوي الخالي من الفراء باستخدام قضيب غلوكونات الكلورهيكسيدين. قم بتنشيط المسبار الخطي الأعلى ترددا المتاح. عادة ، المسبار مع أعلى دقة مكانية لحجم الحيوان الذي يتم تصويره.
قم بتنشيط المسبار من خلال النقر على الزر المقابل بعد شاشة البدء. لتحسين إعدادات الموجات فوق الصوتية للتصوير والحقن ، اضبط عمق مجال الرؤية على حجم مناسب للحيوان المستهدف عن طريق ضبط أشرطة التمرير الموجهة رأسيا على الجانب الأيمن من الشاشة. اضبط كسب المقياس الرمادي عن طريق تحريك الزر على طول الشريط الأفقي أسفل الشاشة.
بعد ذلك ، اضبط المنطقة البؤرية على المستوى المتوقع للغدة الصعترية. ضع حوالي ملليلتر واحد من جل الموجات فوق الصوتية على سطح محول الطاقة بينما يكون في وضع مستقيم ، إما في حامل جهاز الموجات فوق الصوتية أو في يد مساعد. لتحضير حقل معقم صغير بجوار المنصة الساخنة ، أفرغ غطاء مسبار معقم وشريط مطاطي وقفازات معقمة وهلام معقم بالموجات فوق الصوتية على الحقل المعقم.
ثم ارتد القفازات المعقمة. ضع غطاء المسبار المعقم بعناية فوق محول الموجات فوق الصوتية والهلام. للحفاظ على العقم ، المس الغطاء المعقم فقط.
حرك الشريط المطاطي المعقم فوق غطاء المسبار لإبقائه في مكانه. ضع اثنين إلى ثلاثة ملليلتر من هلام الموجات فوق الصوتية المعقم على الترجام. ضع مسبار الموجات فوق الصوتية المغطى بالهلام عموديا على الجزء المطهر من جدار الصدر الأمامي للفأر للتصوير الأولي ، مع الحفاظ على العقم.
عرض وتحسين صورة الموجات فوق الصوتية كما هو موضح سابقا. لمسح الصدر الأمامي للماوس في مستوى عرضي ، أمسك الترجام عموديا وحركه لأعلى ولأسفل من الرقبة إلى البطن بحركة تشبه فرشاة الرسم أو حركة كاسحة. مع تمركز القلب في مجال الرؤية ، امسح الترجام قليلا نحو الرقبة.
لاحظ الهيكلين الأسودين الدائريين المقترنين على جانبي الجزء العلوي من الصدر. باستخدام مسبار الموجات فوق الصوتية ، حدد موقع أوسع جزء من الغدة الصعترية ، والذي عادة ما يكون الموقع المستهدف المثالي للحقن. توقع مسار إبرة أفقي في الموقع المختار ، ولاحظ مكان الأوعية الدموية الرئيسية في هذا الموقع.
يجب تجنب هذه الأوعية أثناء الحقن. ستكون الأوعية الدموية هياكل نابضة ناقصة الصدى. إذا لم تكن متأكدا ، فقم بتنشيط وضع دوبلر الملون عن طريق النقر على زر اللون على الشاشة للتحقق من التدفق داخل الأوعية.
امسك محول الطاقة بيد واحدة وإبرة أنسولين قياس 30 مع 10 ميكرولتر من الحقن في اليد الأخرى. لبدء عملية الحقن ، حرك محول الطاقة بشكل جانبي بحيث تكون الغدة الصعترية خارج المركز في مجال رؤية الموجات فوق الصوتية. تأكد من أن الجانب الآخر من مجال الرؤية يتكون في الغالب من هلام الموجات فوق الصوتية ولا شيء آخر.
ضع طرف الإبرة في الجل تحت الترجام ، وحرك الإبرة ببطء حتى يتم تصورها بجوار سطح الجلد. أثناء التصوير المستمر للإبرة تحت الموجات فوق الصوتية ، أدخل الإبرة في الغدة الصعترية بمسار عن طريق الجلد بعيدا عن الأوعية الدموية. استخدم مسارا أفقيا للغدة الصعترية لوضع طرف الإبرة في الفص الصعترية المقابل لموقع الدخول.
بمجرد أن يكون طرف الإبرة داخل الجزء المطلوب من الغدة الصعترية ، قم بحقن المحتويات بسرعة من المحقنة ذات المقياس 30 أثناء استخدام التصور بالموجات فوق الصوتية. لتثبيت المحقنة أثناء إدخال الإبرة وحقنها ، أمسك المحقنة بين الإبهام والإصبع الثالث ، وتحكم في مكبس المحقنة بإصبع السبابة. قم بإزالة الإبرة بعد إيداع جميع المحتويات.
في الفئران الصغيرة ، كان تحديد الغدة الصعترية واضحا بسبب الحجم الكبير للغدة. كان الأمر أكثر صعوبة في الفئران الأكبر سنا أو التي تعاني من نقص المناعة. ومع ذلك ، كان لا يزال ممكنا للغاية مع معدات الموجات فوق الصوتية الحديثة.
لوحظ الحقن الناجح عندما لا تجتاز الإبرة الهياكل الحرجة ، مثل القلب أو الشريان الأورطي أو أحد الوريد الأجوف السفلي. تم تصور طرف الإبرة في موقعه المستهدف أثناء الحقن ، مما يؤكد ترسب الترسب داخل الثعتر. تم تأكيد موقع الحقن داخل التوتة باستخدام لوسيفيرين كحقن في الفئران المعدلة وراثيا لوسيفيراز.
تم تقييمها على الفور باستخدام التصوير الحيوي ، مما يؤكد الموقع الصحيح للحقن دون التضحية بالحيوان. بدلا من ذلك ، تم حقن Trypan Blue كعلامة بصرية لموقع الحقن ودقة الحقن باستخدام خارج الجسم الحي مع التشريح. تستخدم مجموعتنا هذه التقنية في العديد من الدراسات الكبيرة ، بما في ذلك أبحاث العلاج المناعي للسرطان ، بناء على حقن الخلايا السلفية المعدلة وراثيا ، ولتحسين وظيفة الغدة الصعترية في الفئران التي تعاني من نقص المناعة.
