טיהור זיקה של חלבון 6X-His-Tagged באמצעות מערכת כרומטוגרפיה נוזלית של חלבון מהיר

במחקר זה, אנו שואפים לטהר אנדונוקלאז דש 1 או FEN1, חלבון שכפול DNA חיוני באמצעות כרומטוגרפיית זיקה. זה יאפשר לנו לחקור את תפקידו של FEN1 בשכפול ותיקון DNA בסביבה מבחנה מבוקרת, ויקדם את הבנתנו את תפקידיו ותפקידיו הביולוגיים. סוגים שונים של כרומטוגרפיה משמשים לטיהור חלבונים קושרי DNA, הנפוץ ביותר הוא כרומטוגרפיית זיקה.

בתוך כרומטוגרפיית זיקה, כרומטוגרפיית זיקה מתכתית משותקת היא אחד הכלים החזקים ביותר לטיהור חלבונים מתויגים. מכיוון שהאינטראקציה בין יון ה-His-tagged לבין יון המתכת, בדרך כלל ניקל או קובלט חזקה מאוד. שני גורמים מכריעים לתהליך טיהור חלבון מוצלח הם תפוקת חלבון וטוהר החלבון.

בהתאם לשימוש המיועד של החלבון, התפוקה או הטוהר עשויים להיות מועדפים על פני האחרים. הממצאים שלנו מראים כי בחירת השרף המתאים לטיהור חלבונים המסומנים על ידי His עשויה להניב תוצאות רצויות עבור היישומים במורד הזרם של החלבון.