ייצור ומיקרוסקופ הדמיה לכל החיים של תאים חיים מרובי פרמטרים (FLIM) של ספרואידים רב-תאיים

בעבודה זו, אנו מציגים ומשווים שיטות היווצרות ספרואידים שניתן להשתמש בהן לניתוח חילוף החומרים בתאים וחלוקת חמצן באמצעות מיקרוסקופ תאים חיים. בשנים האחרונות, נעשה שימוש נרחב במיקרוסקופ הדמיה פלואורסצנטית לכל החיים כדי לחקור סמנים ביולוגיים מטבוליים כמו NADPH ו- FAD בתאים חיים, וכמה ננו-חלקיקים פלואורסצנטיים פותחו כדי להכפיל מדידות כאלה עם הדמיה של חמצון תאים ורקמות. ספרואידים רב-תאיים, אורגנואידים ואיבר-על-שבב יכולים לשכפל מיקרו-סביבה מורכבת, דמוית in-vivo, ולמזער את הצורך במחקר בבעלי חיים.

עבור ייצור ספרואידים, אנו מראים שיטות היווצרות שונות, יכול לנוע בין תפוקה נמוכה לגבוהה. הם גם מדגישים את הנגישות האופטית שלהם, תאימות עם מיקרוסקופ הדמיה לכל החיים פלואורסצנטי, ואת האפשרות לכלול רכיבי מטריצה חוץ-תאיים. לכן, למרות שמודלים תלת-ממדיים במבחנה מספקים הקשר טוב יותר בהשוואה לתרבויות דו-ממדיות, השונות הגבוהה שלהם, יכולת השחזור הנמוכה והדיווח הניסיוני החלקי שלהם נותרו בעיה.

פרמטרים כגון גודל הספרואידים, הרכב החומרים המזינים, צמיגות חוץ-תאית ואפילו שיטות היווצרות ספרואידים יכולים כולם להוביל להטרוגניות תאית מוגברת. באמצעות פרוטוקול זה, אנו שואפים ליצור הרמוניה ולתקנן את שיטות הייצור הספרואידים, תוך הדגשת היבטים מרכזיים החשובים לניתוח מתמשך ורב-פרמטרי של ספרואידים באמצעות מיקרוסקופ FLIM.