Çok Hücreli Sferoidlerin Üretimi ve Çok Parametreli Canlı Hücre Floresan Ömür Boyu Görüntüleme Mikroskobu (FLIM)

Bu çalışmada, canlı hücre mikroskobu kullanılarak hücre metabolizması ve oksijen dağılımının analizi için kullanılabilecek sferoid oluşturma yöntemlerini sunuyoruz ve karşılaştırıyoruz. Son yıllarda, floresan ömür boyu görüntüleme mikroskobu, canlı hücrelerde NADPH ve FAD gibi metabolik biyobelirteçleri araştırmak için yaygın olarak kullanılmaktadır ve bu tür ölçümleri hücre ve doku oksijenasyonunun görüntülenmesi ile çoğullamak için birkaç floresan nanopartikül geliştirilmiştir. Çok hücreli sferoidler, organoidler ve çip üzerinde organ, karmaşık, in vivo benzeri bir mikro ortamı çoğaltarak hayvan araştırmalarına olan ihtiyacı en aza indirebilir.

Küresel üretim için, düşük verimden yüksek verime kadar değişebilen farklı oluşum yöntemleri gösteriyoruz. Ayrıca optik erişilebilirliklerini, floresan ömür boyu görüntüleme mikroskobu ile uyumluluklarını ve hücre dışı matris bileşenlerini dahil etme olasılıklarını da vurgularlar. Bu nedenle, 3B in vitro modeller, 2B kültürlere kıyasla daha iyi bağlam sağlasa da, yüksek değişkenlikleri, düşük tekrarlanabilirlikleri ve eksik deneysel raporlamaları bir sorun olmaya devam etmektedir.

Küresel boyut, besin bileşimi, hücre dışı viskozite ve hatta küresel oluşum yöntemleri gibi parametrelerin tümü, hücresel heterojenliğin artmasına neden olabilir. Bu protokolle, sferoid üretim yöntemlerini uyumlu hale getirmeyi ve standartlaştırmayı, FLIM mikroskobu kullanarak sferoidlerin yaşam boyu ve multiparametrik analizi için önemli olan temel hususları vurgulamayı amaçlıyoruz.