Produção e Microscopia de Imagem de Tempo de Vida de Fluorescência de Células Vivas Multiparâmetros (FLIM) de Esferoides Multicelulares

Neste trabalho, apresentamos e comparamos métodos de formação de esferoides que podem ser usados para análise do metabolismo celular e distribuição de oxigênio usando microscopia de células vivas. Nos últimos anos, a microscopia de imagem de fluorescência ao longo da vida tem sido amplamente utilizada para investigar biomarcadores metabólicos como NADPH e FAD em células vivas, e várias nanopartículas fluorescentes foram desenvolvidas para multiplexar tais medições com imagens de oxigenação celular e tecidual. Esferoides multicelulares, organoides e órgãos em um chip podem replicar um microambiente complexo semelhante ao in vivo, minimizando a necessidade de pesquisas com animais.

Para a produção de esferóides, mostramos diferentes métodos de formação, que podem variar de baixo a alto rendimento. Eles também destacam sua acessibilidade óptica, compatibilidade com microscópio de imagem de fluorescência e a possibilidade de incluir componentes da matriz extracelular. Portanto, embora os modelos 3D in vitro forneçam melhor contexto em comparação com as culturas 2D, sua alta variabilidade, baixa reprodutibilidade e relatórios experimentais incompletos continuam sendo um problema.

Parâmetros como o tamanho do esferóide, a composição de nutrientes, a viscosidade extracelular e até mesmo os métodos de formação de esferóides podem levar ao aumento da heterogeneidade celular. Com este protocolo, pretendemos harmonizar e padronizar os métodos de produção de esferoides, destacando os principais aspectos importantes para a análise contínua e multiparamétrica de esferoides usando microscopia FLIM.