多细胞球体的生产和多参数活细胞荧光寿命成像显微镜 （FLIM）

在这项工作中，我们提出并比较了可用于使用活细胞显微镜分析细胞代谢和氧分布的球状体形成方法。近年来，荧光寿命成像显微镜已被广泛用于研究活细胞中的代谢生物标志物，如 NADPH 和 FAD，并且已经开发了几种荧光纳米颗粒，用于将此类测量与细胞和组织氧合成像进行多重检测。多细胞球状体、类器官和器官芯片可以复制复杂的、类似体内的微环境，从而最大限度地减少动物研究的需求。

对于球状体生产，我们展示了不同的形成方法，可以从低通量到高通量。它们还强调了它们的光学可及性、与荧光寿命成像显微镜的兼容性以及包含细胞外基质成分的可能性。因此，尽管与 2D 培养相比，3D 体外模型提供了更好的背景，但它们的高变异性、低重现性和不完整的实验报告仍然是一个问题。

球体大小、营养成分、细胞外粘度，甚至球体形成方法等参数都可能导致细胞异质性增加。通过该协议，我们的目标是协调和标准化球体生产方法，突出了使用 FLIM 显微镜对球体进行生命连续和多参数分析的重要关键方面。