שיטות לאיתור שיעול ודלקת בדרכי הנשימה בעכברים

המחקר שלי מתמקד בשיעול כרוני. כדי להבין את הפתופיזיולוגיה של שיעול, המחקרים שלי דרשו דגימות בדיקה כדי לאמת שינויים ברמות גורמי מפתח. אני שואף לקבוע נהלים סטנדרטיים לאיסוף דגימות רקמה מעכברים.

רגישות יתר לשיעול מופעלת לעתים קרובות על ידי זיהום ויראלי. בפעם הראשונה, מצאנו כי זיהום ויראלי עלול לעורר רגישות יתר לשיעול תוך הגברת שחרור אינטרפרון-גמא מלימפוציטים מסוג T בריאה. רוב החולים עם שיעול כרוני סובלים מרגישות יתר לשיעול, המאופיינת בהיענות עצבית מוגברת למגוון גירויים המשפיעים על דרכי הנשימה והריאות.

בעתיד נתמקד בתהליכים הפריפריאליים והמרכזיים התורמים לרגישות יתר לשיעול. כדי להתחיל, לקחת את העכבר H1N1 נגוע בהרדמה עמוקה לאחר זיהוי שיעול, ולאסוף דם ממסלולי העין. נערו את צינור איסוף הדם כדי לערבב באופן מלא את הדם ואת נוגדי הקרישה כדי למנוע קרישת דם.

לאחר מכן, צנטריפוגה את הדם שנאסף ב 800 גרם במשך חמש דקות בארבע מעלות צלזיוס. אספו את הסופרנאטנט ואחסנו אותו. השהה מחדש את הגלולה במיליליטר אחד של תמיסת D-Hank.

פזרו 10 מיקרוליטר של תרחיף תאי הדם על מגלשת זכוכית כדי לקבוע את פרופילי התא. כדי לקצור את הטחול, לפתוח את החזה של העכבר, להסיר את האוריקל השמאלי, ולאחר מכן לחורר את מחזור הדם הריאתי והמערכתי עם חמישה מיליליטר של מלוחים נורמליים. באמצעות מלקחיים כירורגיים, להסיר את הטחול כולו מן העכבר.

עכשיו, למדוד את משקל הטחול. חותכים את הטחול לשני חצאים. תקן את המחצית הראשונה עם 4% paraformaldehyde בטמפרטורת החדר לניתוח היסטופתולוגי.

אחסנו את המחצית השנייה בטמפרטורה של מינוס 80 מעלות צלזיוס למדידת ציטוקינים. לאיסוף נוזל שטיפה ברונכואלבאולרי, יש להפריד את הריאה הימנית על ידי קשירה בסימפונות הגבעול הראשי הימני. לאסוף את נוזל שטיפה bronchoalveolar מן הריאות השמאליות על ידי שטיפה שלוש פעמים עם 0.5 מיליליטר של PBS.

צנטריפוגה אספה נוזל שטיפה bronchoalveolar ב 800 גרם במשך חמש דקות בארבע מעלות צלזיוס. לאחר מכן, לאסוף את supernatant. להשעות את הגלולה ב 200 מיקרוליטר של PBS.

באמצעות שקופית ספירה, לספור את leukocytes בנוזל שטיפה bronchoalveolar. כדי לקבוע פרופילי תאים לפי ספירות דיפרנציאליות, מרחו 50 מיקרוליטר מתרחיף התא על מגלשות זכוכית ואפשרו לו להתייבש. תקן את השקופית עם 4% paraformaldehyde לילה לפני צביעה עם eosin hematoxylin.

לאחר איסוף נוזל שטיפה bronchoalveolar, להסיר ולתקן מחצית הריאה ימין קנה הנשימה עם 4% paraformaldehyde לניתוח היסטופתולוגי. אחסנו את החצי השני בטמפרטורה של מינוס 80 מעלות צלזיוס עבור בדיקות מערביות, RT-qPCR ובדיקות אימונוסורבנטיות הקשורות לאנזים. זיהום בנגיף H1N1 גרם לשינויים דלקתיים בריאות עכברים, כולל בצקת ולימפוציטים רבים וחדירת נויטרופילים.

זיהום בנגיף H1N1 גרם לשינויים דלקתיים בקנה הנשימה של עכברים, כולל השלת ריסונים וחדירת תאים דלקתיים. זיהום וירוס H1N1 הגדיל באופן משמעותי את היחס בין אזור מוך הלבן לכל אזור הטחול בעכברים, כאשר לימפוציטים הצטברו במוך הלבן של הטחול.