Mes recherches portent sur la toux chronique. Pour comprendre la physiopathologie de la toux, mes études ont nécessité des échantillons de test pour vérifier les changements dans les niveaux de facteurs clés. Mon objectif est d’établir des procédures normalisées pour le prélèvement d’échantillons de tissus chez la souris.
L’hypersensibilité à la toux est souvent déclenchée par une infection virale. Pour la première fois, nous avons découvert qu’une infection virale pouvait déclencher une hypersensibilité à la toux tout en augmentant la libération d’interféron gamma par les lymphocytes T dans les poumons. La plupart des patients atteints de toux chronique présentent une hypersensibilité à la toux, caractérisée par une réactivité neuronale accrue à une gamme de stimuli qui affectent les voies respiratoires et les poumons.
À l’avenir, nous nous concentrerons sur les processus périphériques et centraux contribuant à l’hypersensibilité à la toux. Pour commencer, prenez la souris infectée par le virus H1N1 profondément anesthésiée après la détection de la toux et prélevez du sang dans les orbites oculaires. Agitez le tube de prélèvement sanguin pour bien mélanger le sang et l’anticoagulant afin d’empêcher la coagulation sanguine.
Ensuite, centrifugez le sang recueilli à 800 G pendant cinq minutes à quatre degrés Celsius. Récupérez le surnageant et stockez-le. Remettez la pastille en suspension dans un millilitre de solution D-Hank.
Étalez 10 microlitres de suspension de cellules sanguines sur une lame de verre pour déterminer les profils cellulaires. Pour récolter la rate, ouvrez la poitrine de la souris, retirez l’oreillette gauche, puis perfuser la circulation pulmonaire et systémique avec cinq millilitres de solution saline normale. À l’aide d’une pince chirurgicale, retirez toute la rate de la souris.
Maintenant, mesurez le poids de la rate. Coupez la rate en deux moitiés. Fixez la première moitié avec 4 % de paraformaldéhyde à température ambiante pour l’analyse histopathologique.
Conservez la seconde moitié à moins 80 degrés Celsius pour la mesure des cytokines. Pour le prélèvement de liquide de lavage broncho-alvéolaire, séparez le poumon droit en ligaturant la bronche de la tige principale droite. Prélevez le liquide de lavage broncho-alvéolaire des poumons gauches en lavant trois fois avec 0,5 millilitre de PBS.
La centrifugeuse a recueilli du liquide de lavage broncho-alvéolaire à 800 g pendant cinq minutes à quatre degrés Celsius. Ensuite, récupérez le surnageant. Remettre en suspension le granulé dans 200 microlitres de PBS.
À l’aide d’une lame de comptage, comptez les leucocytes dans le liquide de lavage broncho-alvéolaire. Pour déterminer les profils cellulaires par comptage différentiel, étalez 50 microlitres de suspension cellulaire sur des lames de verre et laissez-le sécher. Fixez la lame avec du paraformaldéhyde à 4 % pendant la nuit avant de la colorer avec de l’hématoxyline éosine.
Après le prélèvement du liquide de lavage broncho-alvéolaire, prélever et fixer la moitié du poumon droit et de la trachée avec 4 % de paraformaldéhyde pour l’analyse histopathologique. Conservez l’autre moitié à moins 80 degrés Celsius pour le western blot, la RT-qPCR et le dosage immuno-enzymatique. L’infection par le virus H1N1 a entraîné des changements inflammatoires dans les poumons de souris, y compris un œdème et une infiltration de nombreux lymphocytes et de neutrophiles.
L’infection par le virus H1N1 a induit des changements inflammatoires dans les trachées de souris, y compris l’excrétion des cils et les infiltrations de cellules inflammatoires. L’infection par le virus H1N1 a considérablement augmenté le rapport entre la surface de la pulpe blanche et la surface entière de la rate chez la souris, les lymphocytes s’accumulant dans la pulpe blanche de la rate.
