마우스에서 기침 및 기도 염증을 감지하는 방법

제 연구는 만성 기침에 초점을 맞추고 있습니다. 기침의 병태생리학을 이해하기 위해 저의 연구에서는 주요 요인 수준의 변화를 확인하기 위한 테스트 샘플이 필요했습니다. 저는 생쥐에서 조직 샘플을 채취하기 위한 표준화된 절차를 확립하는 것을 목표로 합니다.

기침 과민증은 종종 바이러스 감염에 의해 유발됩니다. 우리는 처음으로 바이러스 감염이 기침 과민증을 유발하는 동시에 폐의 T 림프구에서 인터페론-감마의 방출을 증가시킬 수 있음을 발견했습니다. 만성 기침을 앓고 있는 대부분의 환자는 기도와 폐에 영향을 미치는 다양한 자극에 대한 신경 반응성이 증가하는 것이 특징인 기침 과민증을 가지고 있습니다.

앞으로는 기침 과민증에 기여하는 말초 및 중추 과정에 초점을 맞출 것입니다. 먼저, 기침 감지 후 심하게 마취된 H1N1에 감염된 쥐를 채취하여 안와에서 혈액을 채취합니다. 채혈 튜브를 흔들어 혈액과 항응고제를 완전히 혼합하여 혈액 응고를 방지합니다.

그런 다음 수집된 혈액을 800G에서 섭씨 4도에서 5분간 원심분리합니다. 상층액을 모아 보관하십시오. 펠릿을 1ml의 D-Hank 용액에 재현탁시킵니다.

10마이크로리터의 혈액 세포 현탁액을 유리 슬라이드에 펴서 세포 프로파일을 확인합니다. 비장을 채취하려면 쥐의 가슴을 열고 왼쪽 귓바퀴를 제거한 다음 5ml의 생리식염수로 폐 및 전신 순환을 관류합니다. 수술 겸자를 사용하여 마우스에서 전체 비장을 제거합니다.

이제 비장의 무게를 측정하십시오. 비장을 두 반으로 자릅니다. 조직병리학적 분석을 위해 실온에서 4%파라포름알데히드로 전반부를 고정합니다.

사이토카인 측정을 위해 후반부는 섭씨 영하 80도에서 보관하십시오. 기관지폐포 세척액 채취를 위해 오른쪽 주줄기 기관지에서 결찰하여 오른쪽 폐를 분리합니다. 0.5ml의 PBS로 3회 세척하여 왼쪽 폐에서 기관지폐포 세척액을 수집합니다.

원심분리기는 섭씨 4도에서 5분 동안 800G의 기관지폐포 세척액을 수집했습니다. 그런 다음 상층액을 수집합니다. 펠릿을 200마이크로리터의 PBS에 재현탁합니다.

계수 슬라이드를 사용하여 기관지폐포 세척액에 있는 백혈구를 계수합니다. 차등 계수로 세포 프로파일을 결정하려면 50마이크로리터의 세포 현탁액을 유리 슬라이드에 바르고 건조시킵니다. 헤마톡실린 에오신으로 염색하기 전에 밤새 4%파라포름알데히드로 슬라이드를 고정합니다.

기관지폐포 세척액을 채취한 후 조직병리학적 분석을 위해 오른쪽 폐와 기관의 절반을 제거하고 4% 파라포름알데히드로 고정합니다. 나머지 절반은 웨스턴 블로팅, RT-qPCR 및 효소 결합 면역흡착 분석을 위해 섭씨 영하 80도에서 보관하십시오. H1N1 바이러스 감염은 생쥐 폐에 부종과 많은 림프구 및 호중구 침윤을 포함한 염증성 변화를 일으켰습니다.

H1N1 바이러스 감염은 섬모 탈락 및 염증성 세포 침투를 포함한 마우스 기관의 염증성 변화를 유발했습니다. H1N1 바이러스 감염은 마우스의 전체 비장 영역에 대한 흰색 펄프 영역의 비율을 크게 증가시켰으며, 비장의 흰색 펄프에 림프구가 축적되었습니다.