Мое исследование сосредоточено на хроническом кашле. Чтобы понять патофизиологию кашля, в моих исследованиях потребовались тестовые образцы для подтверждения изменений в уровнях ключевых факторов. Я стремлюсь установить стандартизированные процедуры сбора образцов тканей у мышей.
Гиперчувствительность к кашлю часто провоцируется вирусной инфекцией. Впервые мы обнаружили, что вирусная инфекция может вызывать гиперчувствительность к кашлю при одновременном увеличении высвобождения интерферона-гамма из Т-лимфоцитов в легких. Большинство пациентов с хроническим кашлем имеют гиперчувствительность к кашлю, характеризующуюся повышенной нейронной чувствительностью к ряду раздражителей, которые влияют на дыхательные пути и легкие.
В дальнейшем мы сосредоточимся на периферических и центральных процессах, способствующих гиперчувствительности к кашлю. Для начала возьмите глубоко обезболенную мышь, инфицированную H1N1 после обнаружения кашля, и соберите кровь с глазных орбит. Встряхните пробирку для сбора крови, чтобы полностью смешать кровь и антикоагулянт для предотвращения свертывания крови.
Затем центрифугируйте собранную кровь при 800 G в течение пяти минут при четырех градусах Цельсия. Соберите надосадочную жидкость и храните ее. Суспендируйте гранулу в одном миллилитре раствора D-Hank.
Распределите 10 микролитров суспензии клеток крови на предметном стекле, чтобы определить профили клеток. Чтобы собрать селезенку, вскройте грудную клетку мыши, удалите левое предсердие, а затем перфузируйте легочный и системный кровоток пятью миллилитрами обычного физиологического раствора. С помощью хирургических щипцов удалите у мыши всю селезенку.
Теперь измерьте вес селезенки. Разрежьте селезенку на две половинки. Зафиксируйте первую половину 4%-ным параформальдегидом при комнатной температуре для гистопатологического анализа.
Храните вторую половину при температуре минус 80 градусов Цельсия для измерения цитокинов. Для сбора жидкости бронхоальвеолярного лаважа отделяют правое легкое путем лигирования в правом главном стволовом бронхе. Соберите жидкость бронхоальвеолярного лаважа из левого легкого путем трехкратного промывания 0,5 миллилитрами PBS.
Центрифуга собирала жидкость бронхоальвеолярного лаважа при 800 G в течение пяти минут при четырех градусах Цельсия. Затем соберите надосадочную жидкость. Суспендируйте гранулу в 200 микролитрах PBS.
С помощью предметного стекла подсчитайте лейкоциты в жидкости бронхоальвеолярного лаважа. Чтобы определить профили клеток по дифференциальному подсчету, нанесите 50 микролитров клеточной суспензии на предметные стекла и дайте ей высохнуть. Зафиксируйте предметное стекло 4% параформальдегидом на ночь, прежде чем окрашивать гематоксилином эозином.
После сбора жидкости бронхоальвеолярного лаважа удалить и зафиксировать половину правого легкого и трахеи 4% параформальдегидом для гистопатологического анализа. Храните вторую половину при температуре минус 80 градусов Цельсия для вестерн-блоттинга, ОТ-кПЦР и иммуноферментного анализа. Инфекция, вызванная вирусом H1N1, привела к воспалительным изменениям в легких мышей, включая отек и инфильтрацию многих лимфоцитов и нейтрофилов.
Инфекция, вызванная вирусом H1N1, вызвала воспалительные изменения в трахеях мышей, включая выделение ресничек и воспалительные инфильтрации клеток. Вирусная инфекция H1N1 значительно увеличила отношение площади белой пульпы ко всей площади селезенки у мышей, при этом лимфоциты накапливались в белой пульпе селезенки.
