Meine Forschung konzentriert sich auf chronischen Husten. Um die Pathophysiologie des Hustens zu verstehen, benötigten meine Studien Testproben, um Veränderungen der Schlüsselfaktorspiegel zu verifizieren. Mein Ziel ist es, standardisierte Verfahren für die Entnahme von Gewebeproben von Mäusen zu etablieren.
Hustenüberempfindlichkeit wird häufig durch eine Virusinfektion ausgelöst. Zum ersten Mal fanden wir heraus, dass eine Virusinfektion eine Hustenüberempfindlichkeit auslösen und gleichzeitig die Freisetzung von Interferon-gamma aus T-Lymphozyten in der Lunge erhöhen kann. Die meisten Patienten mit chronischem Husten haben eine Hustenüberempfindlichkeit, die durch eine erhöhte neuronale Empfindlichkeit gegenüber einer Reihe von Reizen gekennzeichnet ist, die die Atemwege und die Lunge betreffen.
In Zukunft werden wir uns auf periphere und zentrale Prozesse konzentrieren, die zur Hustenüberempfindlichkeit beitragen. Nehmen Sie zunächst die tief anästhesierte, mit H1N1 infizierte Maus nach der Hustenerkennung und sammeln Sie Blut aus den Augenhöhlen. Schütteln Sie das Blutentnahmeröhrchen, um das Blut und das Antikoagulans vollständig zu vermischen, um eine Blutgerinnung zu verhindern.
Zentrifugieren Sie dann das gesammelte Blut bei 800 g fünf Minuten lang bei vier Grad Celsius. Sammle den Überstand und bewahre ihn auf. Suspendieren Sie das Pellet in einem Milliliter D-Hank-Lösung.
Verteilen Sie 10 Mikroliter der Blutkörperchensuspension auf einem Objektträger, um Zellprofile zu bestimmen. Um die Milz zu entnehmen, öffnen Sie den Brustkorb der Maus, entfernen Sie die linke Ohrmuschel und durchbluten Sie dann den Lungen- und Systemkreislauf mit fünf Millilitern normaler Kochsalzlösung. Entfernen Sie mit einer chirurgischen Zange die gesamte Milz von der Maus.
Messen Sie nun das Gewicht der Milz. Schneide die Milz in zwei Hälften. Fixieren Sie die erste Hälfte mit 4% Paraformaldehyd bei Raumtemperatur für die histopathologische Analyse.
Lagern Sie die zweite Hälfte bei minus 80 Grad Celsius für die Zytokinmessung. Für die Entnahme von bronchoalveolärer Lavage-Flüssigkeit trennen Sie die rechte Lunge, indem Sie am rechten Hauptstammbronchus ligieren. Sammeln Sie die bronchoalveoläre Spülflüssigkeit aus der linken Lunge, indem Sie dreimal mit 0,5 Millilitern PBS spülen.
Die Zentrifuge sammelte die bronchoalveoläre Lavageflüssigkeit bei 800 g für fünf Minuten bei vier Grad Celsius. Sammelt dann den Überstand ein. Suspendieren Sie das Pellet in 200 Mikrolitern PBS.
Zählen Sie mit einem Zählobjektträger die Leukozyten in der bronchoalveolären Spülflüssigkeit. Um Zellprofile durch Differenzzählungen zu bestimmen, schmieren Sie 50 Mikroliter der Zellsuspension auf Objektträger und lassen Sie sie trocknen. Fixieren Sie den Objektträger über Nacht mit 4% Paraformaldehyd, bevor Sie ihn mit Hämatoxylin-Eosin färben.
Nach der Entnahme der bronchoalveolären Lavage-Flüssigkeit die Hälfte der rechten Lunge und Luftröhre entfernen und mit 4% Paraformaldehyd für die histopathologische Analyse fixieren. Lagern Sie die andere Hälfte bei minus 80 Grad Celsius für Western Blotting, RT-qPCR und Enzyme-Linked Immunosorbent Assay. Eine H1N1-Virusinfektion führte zu entzündlichen Veränderungen in der Lunge von Mäusen, einschließlich Ödemen und vielen Lymphozyten und Neutrophileninfiltration.
Die H1N1-Virusinfektion induzierte entzündliche Veränderungen in den Luftröhren der Maus, einschließlich der Ablösung von Zilien und der Infiltration entzündlicher Zellen. Die H1N1-Virusinfektion erhöhte bei Mäusen das Verhältnis der weißen Pulpafläche zur gesamten Milzfläche signifikant, wobei sich die Lymphozyten in der weißen Pulpa der Milz ansammelten.
