Aumentare la durabilità delle colture di cellule neurali dissociate utilizzando la matrice corallina biologicamente attiva

Riepilogo

La coltura cellulare ippocampale dissociata è uno strumento sperimentale fondamentale nelle neuroscienze. La sopravvivenza e la funzione delle cellule neurali in coltura sono migliorate quando gli scheletri corallini sono usati come matrici, a causa dei loro ruoli neuroprotettivi e neuromodulativi. Quindi, le cellule neurali cresciute sulla matrice corallina mostrano una maggiore durata e quindi sono più adeguate per la coltivazione.

Abstract

Le colture di cellule neuronali e gliali dissociate dell'ippocampo sono un prezioso modello sperimentale per studiare la crescita e la funzione neurale fornendo un elevato isolamento cellulare e un ambiente controllato. Tuttavia, la sopravvivenza delle cellule ippocampali in vitro è compromessa: la maggior parte delle cellule muore durante la prima settimana di coltura. È quindi di grande importanza identificare modi per aumentare la durata delle cellule neurali in coltura.

Il carbonato di calcio sotto forma di aragonite cristallina derivata dallo scheletro dei coralli può essere utilizzato come matrice attiva superiore per colture neurali. Nutrendo, proteggendo e attivando le cellule gliali, lo scheletro di corallo migliora la sopravvivenza e la crescita di queste cellule in vitro meglio di altre matrici.

Questo protocollo descrive un metodo per coltivare cellule ippocampali su una matrice corallina. Questa matrice viene generata attaccando granelli di scheletri di corallo a piatti di coltura, fiaschi e vetrine. I grani aiutano a migliorare l'ambiente delle cellule introducendole in un ambiente tridimensionale (3D) per crescere e formare strutture simili ai tessuti. L'ambiente 3D introdotto dallo scheletro di corallo può essere ottimizzato per le cellule mediante macinazione, che consente il controllo sulla dimensione e la densità dei grani (cioè la rugosità della matrice), una proprietà che è stata trovata per influenzare l'attività delle cellule gliali. Inoltre, l'uso dei grani facilita l'osservazione e l'analisi delle colture, soprattutto quando si utilizza la microscopia ottica. Quindi, il protocollo include procedure per la generazione e l'ottimizzazione della matrice corallina come strumento per migliorare il mantenimento e la funzionalità delle cellule neurali in vitro.

Introduzione

Le colture di cellule neurali dissociate, in questo caso cellule ippocampali, sono un valido modello sperimentale per studiare la crescita e la funzione neurale fornendo un elevato isolamento cellulare e accessibilità ^1,2,3. Questo tipo di coltura è frequentemente utilizzato nelle neuroscienze, nello sviluppo di farmaci e nell'ingegneria tissutale a causa della grande quantità di informazioni che possono essere raccolte, come tassi di crescita e vitalità, neurotossicità, crescita e networking dei neuriti, connettività sinaptica e plasticità, modifiche morfologiche, organizzaz....