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Questo studio presenta un'esclusiva procedura di dissezione smussata per preservare l'integrità della gelatina di Wharton (WJ), con conseguente WJ meno danneggiata e una maggiore quantità e vitalità delle cellule staminali mesenchimali (MSC) raccolte. Il metodo dimostra una resa e una capacità proliferativa superiori rispetto ai metodi convenzionali di dissezione tagliente.
Le cellule staminali mesenchimali (MSC) sono una popolazione di cellule multipotenti con notevoli proprietà rigenerative e immunomodulatorie. La gelatina di Wharton (WJ) dal cordone ombelicale (UC) ha guadagnato un crescente interesse in campo biomedico come un'eccezionale fonte di MSC. Tuttavia, sono sorte sfide come l'offerta limitata e la mancanza di standardizzazione nei metodi esistenti. Questo articolo presenta un nuovo metodo per aumentare la resa di MSC sezionando WJ intatto dal cordone ombelicale. Il metodo impiega la dissezione smussata per rimuovere lo strato epiteliale, mantenendo l'integrità dell'intero WJ e determinando un aumento della quantità e della vitalità delle MSC raccolte. Questo approccio riduce significativamente gli sprechi di WJ rispetto ai metodi convenzionali di dissezione tagliente. Per garantire la purezza delle WJ-MSC e ridurre al minimo l'influenza cellulare esterna, è stata condotta una procedura che utilizza la tensione interna per staccare l'endotelio dopo aver capovolto la colite ulcerosa. Inoltre, la capsula di Petri è stata capovolta per un breve periodo durante la coltura di espiantazione per migliorare l'attaccamento e la crescita cellulare. L'analisi comparativa ha dimostrato la superiorità del metodo proposto, mostrando una resa più elevata di WJ e WJ-MSC con una migliore vitalità rispetto ai metodi tradizionali. La morfologia e il modello di espressione simili dei marcatori di superficie cellulare in entrambi i metodi confermano la loro caratterizzazione e purezza per varie applicazioni. Questo metodo fornisce un approccio ad alto rendimento e ad alta vitalità per l'isolamento di WJ-MSC, dimostrando un grande potenziale per l'applicazione clinica delle MSC.
Dal primo isolamento di cellule staminali mesenchimali (MSC) dalla gelatina di Wharton (WJ) nel 1991, queste cellule staminali multipotenti hanno guadagnato un'attenzione significativa da parte dei ricercatori grazie alle loro proprietà rigenerativee alla capacità di differenziazione multilineage. Le MSC possono essere isolate da varie fonti, tra cui il midollo osseo, il sangue periferico, la polpa dentale, il tessuto adiposo, il feto (aborto umano) e i tessuti correlati alla nascita2. Il cordone ombelicale (UC) è emerso come un serbatoio promettente grazie alla sua natura non invasiva, all'abbondante resa cellulare e al....
I campioni sono stati ottenuti da donatori sani e consenzienti dell'ospedale per la maternità e l'assistenza sanitaria infantile del distretto di Shenzhen Longgang, Guangdong, Cina. L'uso di campioni umani per lo studio è stato approvato dal Comitato Etico dell'Ospedale di Shenzhen, dall'Università di Medicina Cinese di Pechino (SZLDH2020LSYM-095) e dal Comitato Etico Medico dell'Ospedale per la Maternità e l'Assistenza Sanitaria Infantile del Distretto di Shenzhen Longgang (LGFYYXLLS-2020-005). Tutti gli esperimenti sono stati condotti secondo le linee guida approvate. I dettagli dei reagenti e delle attrezzature utilizzate sono elencati nella Tabella dei Mat....
Le procedure per la raccolta e la coltura delle UC-MSC, nonché la loro successiva analisi, sono riassunte nella Figura 1. L'UC è stata accuratamente sezionata in diverse sezioni utilizzando il metodo unico; lo schema di funzionamento specifico delle principali procedure è illustrato in Figura 2. La crescita delle cellule dalle colture di espianti è stata monitorata e registrata di routine. Le cellule aderenti a forma di fuso sono state osservate circa 4 gior.......
Le MSC rappresentano un'area di ricerca dinamica con profonde implicazioni per la medicina rigenerativa22. Le loro proprietà uniche li rendono un punto focale per l'indagine scientifica e hanno il potenziale per rivoluzionare il trattamento di un'ampia gamma di malattie e lesioni7. Le WJ-MSC sono un sottogruppo distinto di MSC, che possono essere ottenute dal tessuto connettivo gelatinoso all'interno della CU situato tra l'epitelio intervascolare e amniotico
Gli autori non segnalano conflitti di interesse.
Questo lavoro è stato sostenuto finanziariamente dalla National Natural Science Foundation of China (82172107), dalla Natural Science Foundation of Guangdong Province, Cina (2021A1515011927, 2021A1515010918, 2020A1515110347), Shenzhen Medical Research Fund (SMRF. D2301015), il Comitato municipale per l'innovazione scientifica e tecnologica di Shenzhen (JCYJ20210324135014040, JCYJ20220530172807016, JCYJ20230807150908018, JCYJ20230807150915031) e il Fondo speciale per lo sviluppo economico e tecnologico del distretto di Longgang (LGKCYLWS2022007).
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
APC anti-human CD44 Antibody | Biolegend | 338806 | |
24-well cell culture plates | Thermo Scientific | 142475 | |
APC anti-human CD73 (Ecto-5'-nucleotidase) Antibody | Biolegend | 344006 | |
APC Mouse IgG1, κ Isotype Ctrl (FC) Antibody | Biolegend | 400122 | |
Autoclave | HIRAYAMA | HVE-50 | |
Automatic Cell Counter | Countstar | FL-CD | |
BAMBANKER Cryopreservation Solution | Wako | 302-14681 | |
Cell Staining Buffer | Biolegend | 420201 | |
Centrifugal Machine | Eppendorf | 5424R | |
Clean Bench | Shanghai ZhiCheng | C1112B | |
CO2 Incubator | Thermo Scientific | HERAcell 150i | |
D-PBS | Solarbio | D1040 | |
Electro- thermostatic Blast Oven | Shanghai JingHong | DHG-9423A | |
FITC anti-human CD105 Antibody | Biolegend | 323204 | |
FITC anti-human CD90 (Thy1) Antibody | Biolegend | 328108 | |
FITC Mouse IgG1, κ Isotype Ctrl (FC) Antibody | Biolegend | 400110 | |
Flow Cytometry | Beckman | CytoFLEX | |
hemocytometer | Superior Marienfeld | 640410 | |
Intracellular Staining Permeabilization Wash Buffer (10×) | Biolegend | 421002 | |
Inverted Biological Microscope | ZEISS | Axio Vert. A1 | |
Liquid Nitrogen Storage Tank | Thermo Scientific | CY50935-70 | |
Normal saline (NS) | Meilunbio | MA0083 | |
PBS | Solarbio | P1032 | |
PE anti-human CD11b Antibody | Biolegend | 393112 | |
PE anti-human CD19 Antibody | Biolegend | 392506 | |
PE anti-human CD34 Antibody | Biolegend | 343606 | |
PE anti-human CD45 Antibody | Biolegend | 368510 | |
PE anti-human HLA-DR Antibody | Biolegend | 307606 | |
PE Mouse IgG1, κ Isotype Ctrl (FC) Antibody | Biolegend | 400114 | |
PE Mouse IgG2a, κ Isotype Ctrl (FC) Antibody | Biolegend | 400214 | |
Precision Electronic Balance | Satorius | PRACTUM313-1CN | |
Snowflake Ice Machine | ZIEGRA | ZBE 30-10 | |
steriled 50 mL plastic tube | Greniner | 227270 | |
Thermostatic Water Bath | Shanghai YiHeng | HWS12 | |
Trypsin 1:250 | Solarbio | T8150 | |
UltraGRO-Advanced | Helios | HPCFDCGL50 | |
Ultrapure and Pure Water Purification System | Milli-Q | Milli-Q Reference | |
Xeno-Free Human MSC Culture Medium | FUKOKU | T2011301 |
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