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Caratterizzazione dei trasportatori di zinco nei mammiferi mediante un saggio di trasporto dello zinco in vitro

Trascrizione

La mia ricerca si concentra sulla relazione struttura-funzione dei trasportatori di zinco nei mammiferi, con particolare enfasi sul meccanismo di regolazione. A causa dell'importanza dello ione zinco per la funzione cellulare, è difficile ottenere una misurazione accurata della dinamica cellulare dello zinco. Il nostro protocollo affronta il basso rapporto segnale/rumore e la bassa risoluzione temporale della dinamica dello zinco.

Questo metodo consente di testare l'afflusso di zinco attraverso la membrana cellulare, con un'elevata risoluzione temporale e una notevole riduzione del rumore di fondo e delle interazioni incrociate da parte di altri cationi bivalenti. Abbiamo scoperto che l'estensione non strutturata del dominio C-terminale del trasportatore dei mammiferi ZnT1 non è coinvolta nella funzione di trasporto dello zinco. Ciò consente ai ricercatori di concentrarsi su altri domini della proteina ZnT1 per la regolazione del trasporto dello zinco.

Il trasporto dello zinco si è dimostrato difficile da misurare a causa dei deboli legami causali con la funzione proteica e della bassa risoluzione temporale. Questo protocollo descrive un metodo per monitorare, con alta risoluzione temporale, l'estrusione di Zn 2+ da cellule viventi utilizzando un colorante fluorescente sensibile allo Zn 2+, fornendo così una misura diretta dell'efflusso di Zn2+.

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