Per iniziare a preparare le griglie di microscopia elettronica per la criotografia cellulare, posizionare la griglia, caricata con una pellicola di supporto in carbonio perforato, in un dispositivo di scarica a incandescenza con il lato in carbonio della griglia rivolto verso l'alto. Quindi, scarica la griglia a 15 milliampere, sotto una pressione atmosferica di 0,39 millibar per 45 secondi. Una volta fatto, posizionare la griglia in un contenitore pulito, foderato con carta da filtro.
Successivamente, trasferire la griglia insieme alla fibronectina, alla soluzione salina tamponata con fosfato o PBS, alle piastre e alle pinzette in una cabina di biosicurezza. Usando una micropipetta, gettare due punti di fibronectina bovina di dimensioni generose su una superficie sterile come il coperchio di una piastra a sei pozzetti. Assicurati che i punti siano abbastanza grandi da avvolgere l'intera griglia.
Quindi, procurati cinque per 15 pinzette e tratta entrambi i lati della griglia con la soluzione di aderenza alla fibronectina. Una volta trattata con fibronectina bovina, la griglia diventerà appiccicosa. Toccare delicatamente la superficie non carboniosa della griglia sul fondo di un pozzetto vuoto in una piastra a sei pozzetti e rilasciare le pinzette per fissare la griglia alla nuova superficie.
Successivamente, incubare la griglia per 30 minuti nella soluzione di aderenza alla fibronectina. Per evitare che le griglie si secchino, aggiungere una o due gocce di soluzione di aderenza sopra le griglie, utilizzando una micropipetta ogni 15 minuti. Dopo l'incubazione, rimuovere la soluzione di aderenza in eccesso con una micropipetta.
Lavare le griglie aggiungendo gocce di PBS direttamente sopra le griglie, utilizzando la micropipetta due o tre volte. Sterilizzare le griglie sotto la luce UV in una cabina di biosicurezza per un'ora. Posizionare le griglie il più vicino possibile ai raggi UV per la massima sterilizzazione.
Evitare che le griglie si asciughino durante la sterilizzazione micropipettando una o due gocce di PBS sopra la griglia ogni 10 minuti.
