Per iniziare, prendi una pellicola di plastica in polietilene lunga 16 centimetri, larga 12 centimetri e spessa 20 micrometri. Utilizzare uno strumento di macinazione del vetro per premere 30 sporgenze semicircolari in un layout PCR standard a 96 pozzetti. Esporre entrambi i lati del film plastico di polietilene pressato alla luce UV per un'ora per disinfettarlo.
Aggiungere una piccola quantità di alcol polivinilico al 10% sulla superficie semicircolare. Successivamente, metti circa 3.000 vespe trichogramma dendrolimi femmine anestetizzate in una scatola di raccolta. Posizionare il lato convesso della carta uovo in pellicola verso il contenitore di raccolta e fissare i bordi con un elastico.
Ora aggiungi quattro microlitri di soluzione amminoacidica a ciascuna sporgenza. Quindi coprilo con un altro pezzo di pellicola di plastica in polietilene. Utilizzare un elastico per coprire ermeticamente il contenitore di raccolta con due fogli di plastica.
Lascia che le vespe parassitino liberamente per quattro-otto ore. Fornire acqua di saccarosio al 10% attraverso il cotone bagnato durante la parassitizzazione. Successivamente, ottenere la soluzione di amminoacidi parassitati dalla sporgenza interna della carta uovo artificiale e trasferirla nel tappo di provette da 1,45 millilitri.
Coprire il tappo del tubo con una rete di nylon da 10 micrometri, avente un diametro di 25 millimetri. Quindi fissare leggermente la rete di nylon nel tubo. Centrifugare la provetta in alto a destra a 1, 360 g per 10 secondi.
Raccogli la soluzione filtrata contenente il veleno. Conservare il veleno a meno 80 gradi Celsius per ulteriori analisi. L'analisi BCA dei campioni di veleno ha mostrato che la concentrazione di proteine del veleno variava da 0,35 a 0,46 microgrammi per microlitro.
Il controllo negativo della soluzione di amminoacidi aveva solo una concentrazione proteica compresa tra 0,03 e 0,05 microgrammi per microlitro. L'analisi SDS-PAGE del veleno ha mostrato una gamma di proteine che va da meno di 10 kilodalton a oltre 130 kilodalton.
