Per iniziare, pesare tre grammi di polvere di Rhodiola crenulata e trasferirla in una bottiglia conica da 100 millilitri. Usando una pipetta a tazza grande, aggiungi 25 millilitri di metanolo nel flacone. Posizionare il flacone nello strumento a ultrasuoni.
Impostare la potenza a 250 watt, la frequenza a 40 kilohertz, il tempo a 30 minuti e avviare l'ultrasonicazione. Quindi, sciacquare l'esterno della bottiglia sotto l'acqua corrente fino a raggiungere la temperatura ambiente. Filtrare la soluzione attraverso una membrana microporosa da 0,22 micron.
Utilizzando una siringa da un millilitro, aspirare 800 microlitri di liquido dal flacone e raccogliere 400 microlitri della soluzione midstream in un flacone per campioni cromatografici. Misurare e aggiungere un milligrammo di salidroside, 0,5 milligrammi di tirosolo e 0,5 milligrammi di acido gallico in tre palloni tarati separati da un millilitro. Quindi, riempire ogni pallone fino alla scala contrassegnata con metanolo.
Sonicare i campioni nello strumento a ultrasuoni utilizzando le condizioni descritte in precedenza. Dopo l'ultrasuoni, aspirare 800 microlitri di liquido dal pallone. Filtrare la soluzione attraverso una membrana microporosa da 0,22 micrometri e raccogliere 400 microlitri di filtrato nel flacone.
Aggiungere triclorometano, acetato di etile, metanolo e acido formico su un lato del cilindro per cromatografia a doppio serbatoio. Agitare il cilindro per mescolare uniformemente il contenuto e coprire la testa del cilindro superiore. Disporre le soluzioni standard di acido gallico, salidroside, tirosolo e la nostra soluzione crenulata sul rack per campioni nelle posizioni da A1 a A4. Posizionare un foglio di silicone di 5x10 centimetri sul tavolo di campionamento.
Accendere la campionatrice automatica e aprire la valvola di controllo dell'aria. Premere il pulsante Continua per il campionamento automatico. Dopo il campionamento, chiudere la macchina e la valvola dell'aria.
Rimuovere il foglio di silicone dalla macchina. Inserire il foglio di silicone nell'altro lato del cilindro per cromatografia a doppio serbatoio. Coprire la testata superiore e presaturare per 20 minuti.
Quindi, usa una pinzetta per tenere l'estremità superiore della piastra a strato sottile e inserisci rapidamente il foglio di silicone nell'agente di sviluppo. Una volta evaporato il solvente organico, spruzzare il foglio di silicone con una soluzione cromogenica. L'analisi cromatografica su strato sottile ha mostrato che il campione di R.crenulata appariva in macchie dello stesso colore, corrispondenti agli standard di acido gallico, salidroside e tirosolo.
