Trombosi arteriosa indotta da cloruro ferrico e raccolta di campioni per l'analisi al microscopio elettronico 3D

Con questo metodo, è possibile determinare quali componenti delle piastrine e del sistema emostatico sono importanti per la trombosi. Inoltre, questo metodo può determinare come la crescita e l'architettura dei trombi sono influenzate a livello cellulare. Il vantaggio principale di questa tecnica è che consente un modo riproducibile per studiare molte fasi della trombosi a livello strutturale.

Una persona nuova a questa tecnica dovrebbe evitare di manipolare eccessivamente il tessuto nell'area chirurgica. Questo può portare a sanguinamento e può complicare eccessivamente l'identificazione dell'arteria carotide. Iniziare a contrassegnare il sito della lesione dopo aver esposto l'arteria carotide circondando liberamente la regione tra due fili chirurgici con una dimensione di 0,1 millimetri.

Posizionare la sonda sotto l'arteria distale dal filo inferiore. Inserire il pezzo di plastica sotto l'arteria tra i due fili per contrassegnare il sito per lesioni da cloruro di ferro. Effettuare misurazioni del flusso prima di eseguire lesioni per annotare il flusso basale.

Eseguire la lesione posizionando carta da filtro imbevuta di cloruro di ferro sull'arteria per tre minuti. Rimuovere la carta da filtro dopo tre minuti per evitare l'entità variabile della lesione e per facilitare il conteggio del flusso da parte della sonda. Aggiungere soluzione salina nel sito della lesione per rimuovere qualsiasi eccesso di cloruro di ferro residuo.

Monitorare la lettura del flusso. Quando il flusso scende al di sotto del 50% del valore iniziale, rimuovere la sonda. Asciugare rapidamente l'area e aggiungere il fissativo per fissare l'area della lesione esternamente.

Quindi, tenere prontamente l'arteria vicino all'area della lesione con una pinza. Tagliare a valle della filettatura inferiore e a monte della filettatura superiore. Metti il tessuto sul piatto di coltura di tessuto di plastica nello stesso orientamento in cui è stato raccolto e aggiungi alcune gocce del fissativo.

Usando un bisturi, pulire il tessuto extra intorno all'arteria. Assicurarsi di registrare l'orientamento del flusso sanguigno tagliando un'estremità orizzontalmente e l'altra affusolata o obliqua. Posizionare il campione in fissativo per un'ora a temperatura ambiente, quindi conservare il campione in paraformaldeide all'1% a 4 gradi Celsius fino a quando non lo invia nel ghiaccio umido per l'analisi al microscopio elettronico.

I dati sono stati tracciati come una curva di sopravvivenza di Kaplan-Meier, un dot plot con barre che mostrano il flusso sanguigno terminale al momento della cessazione del flusso sanguigno o della fine di un esperimento, o come un grafico a linee. Il flusso sanguigno è aumentato improvvisamente in alcuni casi a seguito di una diminuzione graduale per alcuni minuti che indica lo spargimento parziale del trombo in crescita ed è stato considerato un evento di embolizzazione. Anche la morfologia occlusiva dei trombo è stata studiata con questo metodo.

La raccolta tempestiva del campione durante il processo di trombosi è il passo più importante poiché il ritardo in questo processo può portare a un'interpretazione errata della nostra analisi strutturale.