Estrazione del DNA da campioni di mosche necrofile

Per iniziare, posizionare i campioni di torace mosca tagliati in una provetta da centrifuga da due millilitri. Aggiungere 180 microlitri di tampone di lisi tissutale alla provetta, seguiti da 20 microlitri di proteinasi K.Vortex accuratamente a 3.000 giri/min per 10 secondi e incubare a 56 gradi Celsius fino a quando i tessuti non vengono lisati. Dopo l'incubazione, agitare nuovamente i campioni per 15 secondi.

Aggiungere 200 microlitri di tampone di lisi e mescolare accuratamente agitando. Quindi aggiungere 200 microlitri di etanolo e agitare nuovamente per 15 secondi. Quindi, posizionare una colonna di assorbimento del DNA in una provetta di raccolta da due millilitri e pipettare la miscela nella colonna.

Centrifugare a 6.000 g per un minuto. Scartare il flusso e il tubo di raccolta. Posizionare la colonna in una nuova provetta e aggiungere 500 microlitri di tampone per la rimozione delle proteine.

Centrifugare per un minuto ed eliminare il flusso. Trasferire la colonna in un nuovo tubo. Aggiungere 500 microlitri di tampone di desalinizzazione e centrifugare a 20.000 g per tre minuti per asciugare la membrana.

Quindi aggiungere 100 microlitri di tampone di eluizione del DNA sulla membrana. Incubare a temperatura ambiente per un minuto e poi centrifugare a 6.000 G per un minuto per eluire il DNA. Conservare i campioni di DNA in modo appropriato.