Gli autori ringraziano Nico Zantl, Klaus Pfeffer, e Bernhard Holzmann. Questo studio è stato finanziato dalla Deutsche Forschungsgemeinschaft, Bonn-Bad Godesberg, Germania (GRK-840; Vo 450/10-1).

1. Preparazione del mouse <ol><li> Anestetizzare il topo mediante iniezione intraperitoneale del fluido narcotici (vedi tabella dei reagenti) e posto in posizione supina. </li><li> I piedi del mouse devono essere fissati con del nastro adesivo sul piatto per garantire una posizione stabile dell&#39;animale durante l&#39;operazione. </li></ol> 2. Operazione <ol><li> Prendete una cannula IV, che è comunemente usato per le iniezioni iv negli esseri umani, e ritagliarsi il suo tubo di plastica circolare 2 millimetri dalla sua punta. Noi usiamo tre diverse misure di cannule per controllare i tassi di mortalità (BD Venflon 18GA (1,2 x45mm, 80 ml / min); 16GA (1,7 x45mm, 180 ml / min) 14ga (2,0 x45mm, 270 ml / min)). </li><li> Dopo la disinfezione accurata della cute addominale, si incidere lungo la sua linea mediana circa 15mm. Aprire la caverna peritoneale mediante recisione dei muscoli addominali e del peritoneo lungo la linea alba. </li><li> Identificare il polo del cieco ed estrarre con attenzione cieco, terminale dell&#39;ileo e del colon ascendente fuori dell&#39;addome con l&#39;uso di tamponi di cotone. </li><li> 15 millimetri distale dalla valvola ileocecale, si deve forare la parete del colon ascendente con un 7 / 0 sutura. In tal modo, le lesioni dei vasi intestino devono essere evitati. La sutura è fissato sulla parete del colon da due nodi chirurgici. </li><li> Ora forare il colon ascendente con il preparato cannula 1-2 mm prossimale dalla sutura 7 / 0. Inserire delicatamente la cannula nel colon fino al solco nel tubo di plastica è a livello con la sierosa. </li><li> Mettere le estremità libere del sutura 7 / 0 intorno alla cannula e posto un duplice nodo esattamente nel solco preparato del tubo di plastica. </li><li> Ora, prendete l&#39;ago della 7 / 0 punto di sutura e attraverso la parete antimesenterico del colon. Consecutivamente, due nodi chirurgici devono essere eseguiti per fissare ulteriormente il tubo di plastica nella parete del colon. Tagliate le estremità sutura. </li><li> Recuperare la parte in ferro della cannula un po &#39;e tagliare il tubo di plastica fuori vicino (1mm), che fissa 7 / 0 sutura. </li><li> Ora si deve latte attentamente sgabello dal cieco verso lo stent colon tramite l&#39;uso di tamponi di cotone fino a quando un piccolo suggerimento di feci appare sulla parte superiore dello stent. </li><li> Mettere l&#39;intestino nuovamente dentro la caverna peritoneale e reintegrazione dei liquidi esibiranno per somministrazione intraperitoneale di 0,5 mL di soluzione salina. </li><li> Chiudere il peritoneo con sutura continua (4 / 0). </li><li> Chiudere la pelle con punti di sutura singolare (4 / 0). </li></ol> 3. Cura post-operatoria <ol><li> Mettere la parte posteriore animale nella sua gabbia, che dovrebbe contenere abbastanza cibo e acqua. Per l&#39;analgesia, somministrazione intraperitoneale di una sostanza potente analgesico (usiamo buprenorfina) devono essere regolarmente eseguite. </li><li> Entro i primi due giorni dopo l&#39;operazione, si ha per controllare gli animali ogni 6 ore. </li></ol> 4. Sham CASP <ol><li> Eseguire i passaggi da 1,1-2,4. </li><li> Non forare il colon. Basta eseguire i passaggi da 2,6-2,8. </li><li> Eseguire i passaggi 2,10-3,2. </li></ol> 5. Caspi <ol><li> Eseguire CASP utilizzando una cannula 14G seguenti passaggi 1,1-3,1 </li><li> 5h dopo CASP, si deve operare l&#39;animale di nuovo. Preparare e anestetizzare il mouse sempre secondo passi 1,1-1,2 </li><li> Aprire le suture della parete addominale. </li><li> Estrarre il colon ascendente con lo stent inseriti. </li><li> Tagliare con attenzione i punti di sutura di fissaggio dello stent e rimuovere lo stent. </li><li> Chiudere il difetto nel colon con singole suture invertente (7 / 0). </li><li> Mettete di nuovo l&#39;intestino nella cavità addominale e lavare questi ultimi due volte con 10 mL di soluzione salina. </li><li> Chiudere il peritoneo con sutura continua (4 / 0). </li><li> Chiudere la pelle con punti di sutura singolare (4 / 0). </li><li> Seguire i passi 3,1-3,2 </li></ol> 6. Rappresentante Risultati Nel giro di poche ore dopo l&#39;operazione, gli animali mostrano segni clinici di una sepsi inizio. I sintomi tipici della malattia sono mobilità ridotta, cappotto horrent, sudorazione, diminuzione dell&#39;assunzione di cibo, perdita di peso e di comportamento fuga anche ridotto. Gli animali lo sviluppo di una peritonite grave con consecutivi infezioni sistemiche normalmente muoiono entro 48h. A seconda delle dimensioni inserito stent, i tassi di mortalità distinti possono essere generati. Un risultato 14G stent in 100% di mortalità, 16G dà il 70% la mortalità e la mortalità del 50% può essere raggiunto utilizzando un stent 18G (Figura 1a). I risultati dell&#39;operazione Sham in un tasso di sopravvivenza del 100%. Di solito, tutti gli animali muoiono inbetween le prime 48 ore dopo la CASP. Così, tutti gli animali che sono vivi, a questo punto il tempo può essere considerato come sopravvissuti. Tuttavia, si consiglia un ulteriore periodo di osservazione di almeno 72 ore per rilevare rari &quot;morti in ritardo&quot; dopo CASP. Il risultato di Caspi dipende dal periodo di tempo dopo CASP quando lo stent viene rimosso. Un intervento 3h dopo i risultati CASP in un tasso di sopravvivenza del 45%. Se lo stent viene rimosso dopo 5h CASP, solo il 10%gli animali sopravvivere alla procedura. Una rimozione dello stent dopo i risultati 9h a una mortalità del 100% (Figura 1b). Sham Caspi porta alla sopravvivenza del 100%. Per le impostazioni Caspi, si consiglia un periodo di osservazione di 10 giorni perché ci sono di solito gli animali, che muoiono entro 48 ore dalla CASP. Controllo macroscopico del addominale situs 24 ore dopo la CASP mostra i tipici segni di peritonite: edema, vasodilatazione, parete intestinale erythematic, demarcazione netta di placche di Peyer, paralisi intestinale, liquido libero, e la secrezione settico (Figura 2). L&#39;infezione sistemica può essere dimostrato con l&#39;analisi batteriologica. 12 ore dopo la CASP, massicce quantità di batteri possono essere rilevati nel lavaggio peritoneale, sangue, fegato, polmoni, milza e reni. Analisi qualitativa dei batteri rivela infezioni sistemiche da batteri intestinali tipici come E. coli, specie Bacteroides, specie Enterococcus, ecc (Figura 3). CASP indotta la sepsi si manifesta in rilascio locale e sistemica di citochine pro-e anti-infiammatorie e chemochine. 12 ore successive alla CASP, notevoli quantità di TNF, IL-1β, IL-6, IL-10, MCP-1 e altri possono essere misurati con metodo ELISA nel sangue ma anche in surnatanti di sospensioni d&#39;organo, ad esempio il fegato, polmoni, milza, rene (Fig. 4). Nello stabilire CASP in laboratorio, i tassi di sopravvivenza, batteriologia e rilascio di citochine dovrebbero essere presi come parametri di controllo per la corretta esecuzione del CASP. In seguito, questi parametri possono essere presi come standard di sistema per leggere tutte le impostazioni sperimentali. <img src="/files/ftp_upload/2299/2299fig1.jpg" alt="Figura 1" /> Figura 1a: sopravvivenza dopo CASP. I tassi di sopravvivenza dopo l&#39;intervento chirurgico CASP dipende dal diametro dello stent inseriti. 14G risultati CASP in un tasso di mortalità del 100%, i risultati CASP 16G nel 70% la mortalità, e CASP 18G porta al 50% la mortalità. Sham CASP è associata con una sopravvivenza del 100%. . n = 20/group B: I tassi di sopravvivenza dopo l&#39;intervento Caspi dipende dal momento della rimozione dello stent. Rimozione dello stent a 3h dopo 14G CASP porta ad un tasso di mortalità del 55%. Rimozione dello stent dopo 5h a 14G risultati CASP in un tasso di mortalità del 90%, mentre la rimozione stent a 9h dopo i risultati CASP 14G a 100% di mortalità. Sham Caspi (5 ore) si traduce in una sopravvivenza del 100%. n = 10/group (Sham Caspi; Caspi 9h), n = 20/group (3h Caspi; 5h Caspi). <img src="/files/ftp_upload/2299/2299fig2.jpg" alt="Figura 2" /> Figura 2: addominali 24h situs dopo CASP. La parete addominale è stato rimosso 24 ore dopo 16G CASP o sham CASP, rispettivamente. Il situs del mouse simulato operato appare fisiologico. Al contrario, i risultati CASP in edema, iperemia, viscere dilatated e delimitazione delle placche di Peyer dimostrando una grave peritonite. <img src="/files/ftp_upload/2299/2299fig3.jpg" alt="Figura 3" /> Figura 3: Batteriologia. CASP porta a gravi infezioni di più compartimenti ed organi dai batteri intestinali entro 12 ore dopo l&#39;operazione. Numeri batteriche sono dato come unità formanti colonia (ufc) per mL, rispettivamente. Le colture batteriche tratte da topi sham gestite sono completamente sterile (non mostrato). 16G CASP, n = 5/group. <img src="/files/ftp_upload/2299/2299fig4.jpg" alt="Figura 4" /> Figura 4: Le citochine. CASP innesca una risposta immunitaria sistemica come diverse citochine e chemochine sono rilevabili nel plasma e anche in surnatanti organo. La figura mostra in maniera esemplare le citochine pro-infiammatorie fattore di necrosi tumorale (TNF) e dell&#39;interleuchina-6 (IL-6) e la maggioranza anti-infiammatoria IL-10. 12 ore dopo CASP, i livelli di notevole può essere rilevato nel plasma, fegato, polmone e milza. Tuttavia, IL-10 non possono essere rilevati nei polmoni e nella milza dopo CASP. Sham operazione non porta ad alcuna secrezione di citochine (non mostrato). 16G CASP, n = 5/group.

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	<li>Maier, S., Traeger, T., Entleutner, M., Westerholt, A., Kleist, B., Huser, N., Holzmann, B., Stier, A., Pfeffer, K., Heidecke, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cecal+ligation+and+puncture+versus+colon+ascendens+stent+peritonitis:+two+distinct+animal+models+for+polymicrobial+sepsis.">Cecal ligation and puncture versus colon ascendens stent peritonitis: two distinct animal models for polymicrobial sepsis.</a> Shock. 21, 505-511 (2004).</li><li>Bougaki, M., Searles, R. J., Kida, K., Yu, J. D. e., Buys, E. S., Ichinose, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NOS3+protects+against+systemic+inflammation+and+myocardial+dysfunction+in+murine+polymicrobial+sepsis.">NOS3 protects against systemic inflammation and myocardial dysfunction in murine polymicrobial sepsis.</a> Shock. , (2009).</li><li>Buras, J. A., Holzmann, B., Sitkovsky, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+sepsis:+setting+the+stage.">Animal models of sepsis: setting the stage.</a> Nat Rev Drug Discov. 4, 854-865 (2005).</li><li>Busse, M., Traeger, T., Potschke, C., Billing, A., Dummer, A., Friebe, E., Kiank, C., Grunwald, U., Jack, R. S., Schutt, C., Heidecke, C. D., Maier, S., Broker, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detrimental+role+for+CD4++T+lymphocytes+in+murine+diffuse+peritonitis+due+to+inhibition+of+local+bacterial+elimination.">Detrimental role for CD4+ T lymphocytes in murine diffuse peritonitis due to inhibition of local bacterial elimination.</a> Gut. 57, 188-195 (2008).</li><li>Daubeuf, B., Mathison, J., Spiller, S., Hugues, S., Herren, S., Ferlin, W., Kosco-Vilbois, M., Wagner, H., Kirschning, C. J., Ulevitch, R., Elson, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TLR4/MD-2+monoclonal+antibody+therapy+affords+protection+in+experimental+models+of+septic+shock.">TLR4/MD-2 monoclonal antibody therapy affords protection in experimental models of septic shock.</a> J Immunol. 179, 6107-6114 (2007).</li><li>Entleutner, M., Traeger, T., Westerholt, A., Holzmann, B., Stier, A., Pfeffer, K., Maier, S., Heidecke, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+interleukin-12,+oxidative+burst,+and+iNOS+on+the+survival+of+murine+fecal+peritonitis.">Impact of interleukin-12, oxidative burst, and iNOS on the survival of murine fecal peritonitis.</a> Int J Colorectal Dis. 21, 64-70 (2006).</li><li>Kerschen, E. J., Fernandez, J. A., Cooley, B. C., Yang, X. V., Sood, R., Mosnier, L. O., Castellino, F. J., Mackman, N., Griffin, J. H., Weiler, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endotoxemia+and+sepsis+mortality+reduction+by+non-anticoagulant+activated+protein.">Endotoxemia and sepsis mortality reduction by non-anticoagulant activated protein.</a> C. J Exp Med. 204, 2439-2448 (2007).</li><li>Kiank, C., Koerner, P., Kessler, W., Traeger, T., Maier, S., Heidecke, C. D., Schuett, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Seasonal+variations+in+inflammatory+responses+to+sepsis+and+stress+in+mice.">Seasonal variations in inflammatory responses to sepsis and stress in mice.</a> Crit Care Med. 35, 2352-2358 (2007).</li><li>Lustig, M. K., Bac, V. H., Pavlovic, D., Maier, S., Grundling, M., Grisk, O., Wendt, M., Heidecke, C. D., Lehmann, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colon+ascendens+stent+peritonitis--a+model+of+sepsis+adopted+to+the+rat:+physiological,+microcirculatory+and+laboratory+changes.">Colon ascendens stent peritonitis--a model of sepsis adopted to the rat: physiological, microcirculatory and laboratory changes.</a> Shock. 28, 59-64 (2007).</li><li>Traeger, T., Kessler, W., Assfalg, V., Cziupka, K., Koerner, P., Dassow, C., Breitbach, K., Mikulcak, M., Steinmetz, I., Pfeffer, K., Heidecke, C. D., Maier, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detrimental+role+of+CC+chemokine+receptor+4+in+murine+polymicrobial+sepsis.">Detrimental role of CC chemokine receptor 4 in murine polymicrobial sepsis.</a> Infect Immun. 76, 5285-5293 (2008).</li><li>Traeger, T., Kessler, W., Hilpert, A., Mikulcak, M., Entleutner, M., Koerner, P., Westerholt, A., Cziupka, K., Rooijen, N. v. a. n., Heidecke, C. D., Maier, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+depletion+of+alveolar+macrophages+in+polymicrobial+sepsis+increases+lung+injury,+bacterial+load+and+mortality+but+does+not+affect+cytokine+release.">Selective depletion of alveolar macrophages in polymicrobial sepsis increases lung injury, bacterial load and mortality but does not affect cytokine release.</a> Respiration. 77, 203-213 (2009).</li><li>Traeger, T., Mikulcak, M., Eipel, C., Abshagen, K., Diedrich, S., Heidecke, C. D., Maier, S., Vollmar, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kupffer+cell+depletion+reduces+hepatic+inflammation+and+apoptosis+but+decreases+survival+in+abdominal+sepsis.">Kupffer cell depletion reduces hepatic inflammation and apoptosis but decreases survival in abdominal sepsis.</a> Eur J Gastroenterol Hepatol. , (2010).</li><li>Weighardt, H., Kaiser-Moore, S., Schlautkotter, S., Rossmann-Bloeck, T., Schleicher, U., Bogdan, C., Holzmann, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Type+I+IFN+modulates+host+defense+and+late+hyperinflammation+in+septic+peritonitis.">Type I IFN modulates host defense and late hyperinflammation in septic peritonitis.</a> J Immunol. 177, 5623-5630 (2006).</li><li>Zantl, N., Uebe, A., Neumann, B., Wagner, H., Siewert, J. R., Holzmann, B., Heidecke, C. D., Pfeffer, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Essential+role+of+gamma+interferon+in+survival+of+colon+ascendens+stent+peritonitis,+a+novel+murine+model+of+abdominal+sepsis.">Essential role of gamma interferon in survival of colon ascendens stent peritonitis, a novel murine model of abdominal sepsis.</a> Infect Immun. 66, 2300-2309 (1998).</li></ol>

Nessun conflitto di interessi dichiarati.

CASP è un modello di sepsi polimicrobica addominale che soddisfa più i criteri postulato per un modello di sepsi prezioso: CASP può essere effettuata in animali di piccola taglia, è altamente riproducibile, facilmente monitorare tramite parametri standard, offre una buona possibilità di leggere, e mima strettamente cliniche di sepsi addominale. In uno studio comparativo abbiamo potuto dimostrare che CASP porta alla peritonite diffusa con infezione precoce e in costante aumento e l&#39;infiammazione sistemica (sindrome da risposta infiammatoria sistemica), mentre la legatura del cieco e la puntura (CLP) rivela un modello di intra-addominale con formazione di ascessi sostenuti e minori segni di infiammazione sistemica (1). La tecnica di Caspi presenta una possibilità di simulare il decorso clinico di peritonite con attenzione chirurgica consecutivi servizi igienico-sanitari, che è il principio più importante terapeutico nell&#39;uomo. CASP può essere applicato per tutte le questioni intorno sepsi o peritonite ed è quindi utile per tutte le discipline si occupano di ricerca sepsi, ad esempio, l&#39;immunologia, la farmacologia, la chirurgia, terapia intensiva, ecc Una selezione di pubblicazioni riguardanti diversi soggetti della sepsi utilizzando il modello CASP è riportata qui sotto (1-14). Quando si inizia con CASP, si dovrebbe essere consapevoli che una certa pratica è necessaria per effettuare l&#39;operazione esattamente e rapidamente. Esperienza chirurgica può essere utile ma non è obbligatorio. Si consiglia di rilevamento di letality come parametro per la corretta esecuzione del CASP. Si dovrebbe iniziare con CASP 14G come uno stent di grandi dimensioni è più facile da gestire di una più sottile. Un chirurgo CASP addestrato è in grado di operare un mouse in 10 minuti. Prima di iniziare qualsiasi sperimentazione, è necessario assicurarsi che si sta vicino a quel periodo. Quando si acquisito una certa esperienza con la procedura chirurgica, si dovrebbe condurre una cinetica di sopravvivenza per verificare le vostre abilità. 14G CASP dovrebbe comportare una mortalità del 100%. I principianti nel nostro laboratorio devono dimostrare che sono in grado di generare una letalità del 100% con CASP 14G prima di iniziare con gli esperimenti. Inoltre, batteriologia e le misurazioni delle citochine deve essere effettuata per verificare sepsi. Se hai problemi all&#39;inizio con i passi di microchirurgia della CASP, l&#39;uso di lenti d&#39;ingrandimento o un microscopio chirurgico può essere utile. Ma in linea di principio, CASP può essere ben eseguita senza queste utilità. Per la riproduzione dei nostri tassi di sopravvivenza, è assolutamente necessario che gli stessi materiali, in particolare la stent (BD Venflon, vedi sotto), sono utilizzati. In caso contrario, variazioni sostanziali dei risultati sono possibili. Inoltre, ti suggeriamo che ci possono essere variazioni dei risultati a seconda, ad esempio, l&#39;individualità del chirurgo. Tuttavia, l&#39;influenza di fattori quali che dovrebbero essere di piccole dimensioni. In sintesi, CASP è un possibile modello di sepsi semplice, riproducibile e di valore che imita da vicino la situazione clinica di sepsi addominale. E &#39;quindi adatto per tutti i campi di ricerca sepsi.

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		<div>
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		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Narcotic fluid</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Mix 0.5 mL Rompun with 4.0 mL Ketanest, and add 5.5 mL of saline solution (0.9%). 
For complete anesthesia, inject intraperitoneally 10 &mu;L/g body weight</td>
</tr>
<tr>
<td>Rompun (20 mg/ml Xylazine)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bayer AG 51368 Leverkusen, Germany</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ketanest (25mg/ml Esketamine)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Pfizer Pharma GmbH, 10785 Berlin, Germany</td>
<td>647028001E</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>BD Venflon 18GA (1,2x45mm, 80ml/min)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ USA 07417</td>
<td>391457</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>BD Venflon 16GA (1,7x45mm, 180ml/min)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ USA 07417</td>
<td>391455</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>BD Venflon 14GA (2,0x45mm, 270ml/min)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ USA 07417</td>
<td>391456</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Catgut Polyester 4/0 white, non absorbable</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Catgut GmbH, 08258 Markneukirchen, Germany</td>
<td>17218113</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Mariderm black 7/0, non absorbable</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Catgut GmbH, 08258 Markneukirchen, Germany</td>
<td>18104900</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

colon ascendens stent peritonitis (casp) - a standardized model for polymicrobial abdominal sepsis

La sepsi è tuttora un problema persistente sulle unità di terapia intensiva in tutto il mondo. Comprendere i complessi meccanismi della sepsi è la precondizione per la creazione di nuovi approcci terapeutici in questo campo. Pertanto, i modelli animali sono tenuti in grado di imitare da vicino la malattia umana e anche sufficientemente trattare le questioni scientifiche. Il Colon Ascendens stent Peritonite (CASP) è un modello altamente standardizzato per polimicrobiche sepsi addominale nei roditori. In questo modello, uno stent piccolo è inserito chirurgicamente nel colon ascendente di topi o ratti portando ad una perdita continua di batteri intestinali nella cavità peritoneale. I risultati della procedura di peritonite, batteriemia sistemica, infezione d&#39;organo dai batteri intestinali, e il rilascio sistemico, ma anche locali di diverse citochine pro-e anti-infiammatori. La letalità della CASP può essere controllato dal diametro dello stent inseriti. Una variante di questo modello, la cosiddetta CASP con un intervento (Caspi), aumenta la possibilità di rimuovere il focus settico da un secondo intervento in base alle procedure comuni nella pratica clinica. CASP è un modello facilmente apprendibile e altamente riproducibile che imita da vicino il decorso clinico della sepsi addominale. Conduce modo per studiare su questioni scientifiche in diversi campi ad esempio immunologia, infettivologia, o interventi chirurgici.

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Colon Ascendens Stent Peritonitis CASP - a Standardized Model for Polymicrobial Abdominal Sepsis

Il Colon Ascendens stent Peritonite (CASP) è un modello altamente standardizzato per polimicrobiche sepsi addominale nei roditori. Questo articolo descrive la procedura chirurgica di CASP. Il modello CASP e le sue varianti permettono l&#39;indagine sistematica dei vari problemi che riguardano l&#39;interessato di sepsi.

Colon Ascendens stent Peritonite (CASP) - un modello standardizzato per polimicrobiche sepsi addominale

Sepsis remains a persistent problem on intensive care units all over the world. Understanding the complex mechanisms of sepsis is the precondition for ...

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Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Colon Ascendens Stent Peritonitis (CASP) - a Standardized Model for Polymicrobial Abdominal Sepsis

19.3K Views.  University of Greifswald. Il Colon Ascendens stent Peritonite (CASP) è un modello altamente standardizzato per polimicrobiche sepsi addominale nei roditori. Questo articolo descrive la procedura chirurgica di CASP. Il modello CASP e le sue varianti permettono l'indagine sistematica dei vari problemi che riguardano l'interessato di sepsi.

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Cecal Ligation and Puncture-induced Sepsis as a Model To Study Autophagy in Mice

Experimental sepsis can be induced in mice using the cecal ligation and puncture (CLP) method, which causes polymicrobial sepsis. Here, a protocol is provided to induce sepsis of varying severity in mice using the CLP technique. Autophagy is a fundamental tissue response to stress and pathogen invasion. Two current protocols to assess autophagy in vivo in the context of experimental sepsis are also presented here. (I) Transgenic mice expressing green fluorescence protein (GFP)-LC3 fusion protein are subjected to CLP. Localized enhancement of GFP signal (puncta), as assayed either by immunohistochemical or confocal assays, can be used to detect enhanced autophagosome formation and, thus, altered activation of the autophagy pathway. (II) Enhanced autophagic vacuole (autophagosome) formation per unit tissue area (as a marker of autophagy stimulation) can be quantified using electron microscopy. The study of autophagic responses to sepsis is a critical component of understanding the mechanisms by which tissues respond to infection. Research findings in this area may ultimately contribute towards understanding the pathogenesis of sepsis, which represents a major problem in critical care medicine.

Experimental sepsis can be induced in mice using the cecal ligation and puncture (CLP) method. Current protocols to assess autophagy in vivo in the context of CLP-induced sepsis are presented here: A protocol for measuring autophagy using (GFP)-LC3 mice, and a protocol for measuring autophagosome formation by electron microscopy.

Cecal legatura e la puntura indotta da sepsi come modello per studiare autofagia nei topi

Experimental sepsis can be induced in mice using the cecal ligation and puncture (CLP) method, which causes polymicrobial sepsis. Here, a protocol is ...

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Immunologia e infezioni

A Controlled Mouse Model for Neonatal Polymicrobial Sepsis

Neonatal sepsis remains a global burden. A preclinical model to screen effective prophylactic or therapeutic interventions is needed. Neonatal mouse polymicrobial sepsis can be induced by injecting cecal slurry intraperitoneally into day of life 7 mice and monitoring them for the following week. Presented here are the detailed steps necessary for the implementation of this neonatal sepsis model. This includes making a homogeneous cecal slurry stock, diluting it to a weight- and litter-adjusted dose, an outline of the monitoring schedule, and a definition of observed health categories used to define humane endpoints. The generation of a homogeneous cecal slurry stock from pooled donors allows for the administration into many litters over time, reducing the variation between donors, and preventing the use of potentially toxic glycerol. The monitoring strategy used allows for the anticipation of survival outcome and the identification of mice that would later progress to death, allowing for an earlier identification of the humane endpoint. Two main behavioral features are used to define the health scores, namely, the ability of the neonatal mice to right themselves when placed on their back and their level of mobility. These criteria could potentially be applied to address humane endpoints in other studies of neonatal disease in mice, as long as a pilot study is performed to confirm accuracy. In conclusion, this approach provides a standardized method to model newborn sepsis in mice, while providing resources to assess animal welfare used to define early humane endpoints for challenged animals.

This protocol provides the necessary steps to establish and evaluate neonatal sepsis in 7-day-old mice.

Un modello di Mouse controllata per sepsi polimicrobica neonatale

Neonatal sepsis remains a global burden. A preclinical model to screen effective prophylactic or therapeutic interventions is needed. Neonatal mouse ...

Design of Cecal Ligation and Puncture and Intranasal Infection Dual Model of Sepsis-Induced Immunosuppression

Sepsis, a severe and complicated life-threatening infection, is characterized by an imbalance between pro- and anti-inflammatory responses in multiple organs. With the development of therapies, most patients survive the hyperinflammatory phase but progress to an immunosuppressive phase, which increases the emergence of secondary infections. Therefore, improved understanding of the pathogenesis underlying secondary hospital-acquired infections in the immunosuppressive phase during sepsis is of tremendous importance. Reported here is a model to test infectious outcomes by creating double-hit infections in mice. A standard surgical procedure is used to induce polymicrobial peritonitis by cecal ligation and puncture (CLP) and followed by intranasal infection of Staphylococcus aureus to simulate pneumonia occurring in immune suppression that is frequently seen in septic patients. This dual model can reflect the immunosuppressive state occurring in patients with protracted sepsis and susceptibility to secondary infection from nosocomial pneumonia. Hence, this model provides a simple experimental approach to investigate the pathophysiology of sepsis-induced secondary bacterial pneumonia, which may be used for discovering novel treatments for sepsis and its complications.

This protocol describes techniques to measure infectious outcomes underlying secondary hospital-acquired infections in the immunosuppressive condition, first by establishing cecal ligation/puncture mice then challenging them with intranasal infection to create a clinically relevant model of immunosuppression sepsis.

Progettazione del doppio modello di legatura e puntura ceca dell'infezione intranasale dell'immunosoppressione indotta dalla sepsi

Sepsis, a severe and complicated life-threatening infection, is characterized by an imbalance between pro- and anti-inflammatory responses in multiple ...

Measurement of Pulse Propagation Velocity, Distensibility and Strain in an Abdominal Aortic Aneurysm Mouse Model

An abdominal aortic aneurysm (AAA) is defined as a localized dilation of the abdominal aorta that exceeds the maximal intraluminal diameter (MILD) by 1.5 times of its original size. Clinical and experimental studies have shown that small aneurysms may rupture, while a subpopulation of large aneurysms may remain stable. Thus, in addition to the measurement of intraluminal diameter of the aorta, knowledge of structural traits of the vessel wall may provide important information to assess the stability of the AAA. Aortic stiffening has recently emerged as a reliable tool to determine early changes in the vascular wall. Pulse propagation velocity (PPV) along with the distensibility and radial strain are highly useful ultrasound-based methods relevant for assessing aortic stiffness. The primary purpose of this protocol is to provide a comprehensive technique for the use of ultrasound imaging system to acquire images and analyze the structural and functional properties of the aorta as determined by MILD, PPV, distensibility and radial strain.

This manuscript describes a detailed protocol for using high frequency ultrasound imaging to measure luminal diameter, pulse propagation velocity, distensibility and radial strain on a mouse model of abdominal aortic aneurysm.

Misurazione della velocità di propagazione dell'impulso, distensiabilità e deformazione in un modello di topo abdominato di aneurisma aortico

An abdominal aortic aneurysm (AAA) is defined as a localized dilation of the abdominal aorta that exceeds the maximal intraluminal diameter (MILD) by 1.5 ...

A Neonatal Imaging Model of Gram-Negative Bacterial Sepsis

Neonates are at an increased risk of bacterial sepsis due to the unique immune profile they display in the first months of life. We have established a protocol for studying the pathogenesis of E. coli O1:K1:H7, a serotype responsible for high mortality rates in neonates. Our method utilizes intravital imaging of neonatal pups at different time points during the progression of infection. This imaging, paralleled by measurement of bacteria in the blood, inflammatory profiling, and tissue histopathology, signifies a rigorous approach to understanding infection dynamics during sepsis. In the current report, we model two infectious inoculums for comparison of bacterial burdens and severity of disease. We find that subscapular infection leads to disseminated infection by 10 h post-infection. By 24 h, infection of luminescent E. coli was abundant in the blood, lungs, and other peripheral tissues. Expression of inflammatory cytokines in the lungs is significant at 24 h, and this is followed by cellular infiltration and evidence of tissue damage that increases with infectious dose. Intravital imaging does have some limitations. This includes a luminescent signal threshold and some complications that can arise with neonates during anesthesia. Despite some limitations, we find that our infection model offers an insight for understanding longitudinal infection dynamics during neonatal murine sepsis, that has not been thoroughly examined to date. We expect this model can also be adapted to study other critical bacterial infections during early life.

Infection of neonatal mice with bioluminescent E. coli O1:K1:H7 results in a septic infection with significant pulmonary inflammation and lung pathology. Here, we describe procedures to model and further study neonatal sepsis using longitudinal intravital imaging in parallel with enumeration of systemic bacterial burdens, inflammatory profiling, and lung histopathology.

Un modello di imaging neonatale di sepsi batterica gram-negativa

Neonates are at an increased risk of bacterial sepsis due to the unique immune profile they display in the first months of life. We have established a ...

A Contemporary Warming/Restraining Device for Efficient Tail Vein Injections in a Murine Fungal Sepsis Model

In rodent models, tail vein injections are important methods for intravenous administration of experimental agents. Tail vein injections typically involve warming of the animal to promote vasodilation, which aids in both the identification of the blood vessels and positioning of the needle into the vessel lumen while securely restraining the animal. Although tail vein injections are common procedures in many protocols and are not considered highly technical if performed correctly, accurate and consistent injections are crucial to obtain reproducible results and minimize variability. Conventional methods for inducing vasodilation prior to tail vein injections generally depend on the use of a heat source such as a heat lamp, electrical/rechargeable heat pads, or pre-heated water at 37 &#176;C. Despite being readily accessible in a standard laboratory setting, these tools evidently suffer from poor/limited thermo-regulatory capacity. Similarly, although various forms of restraining devices are commercially available, they must be used carefully to avoid trauma to the animals. These limitations of the current methods create unnecessary variables in experiments or result in varying outcomes between experiments and/or laboratories.
In this article, we demonstrate an improved protocol using an innovative device that combines an independent, thermally regulated, warming device with an adjustable restraining unit into one system for efficient streamlined tail vein injection. The example we use is an intravenous model of fungal bloodstream infection that results in sepsis. The warming apparatus consists of a heat-reflective acrylic box installed with an adjustable automatic thermostat to maintain the internal temperature at a pre-set threshold. Likewise, the width and height of the cone restraining apparatus can be adjusted to safely accommodate various rodent sizes. With the advanced and versatile features of the device, the technique shown here could become a useful tool across a range of research areas involving rodent models that employ tail vein injections.

Here, we present an effective and efficient method for rodent tail vein injections using a uniquely designed warming/restraining device. By streamlining the initiation of vasodilation and restraining processes, this protocol allows accurate and timely intravenous injections of large groups of animals with minimal distress.

Un dispositivo di riscaldamento / contenimento contemporaneo per iniezioni efficienti della vena della coda in un modello di sepsi fungina murina

In rodent models, tail vein injections are important methods for intravenous administration of experimental agents. Tail vein injections typically involve ...

Functional Assessment of Intestinal Permeability and Neutrophil Transepithelial Migration in Mice using a Standardized Intestinal Loop Model

The intestinal mucosa is lined by a single layer of epithelial cells that forms a dynamic barrier allowing paracellular transport of nutrients and water while preventing passage of luminal bacteria and exogenous substances. A breach of this layer results in increased permeability to luminal contents and recruitment of immune cells, both of which are hallmarks of pathologic states in the gut including inflammatory bowel disease (IBD). 
Mechanisms regulating epithelial barrier function and transepithelial migration (TEpM) of polymorphonuclear neutrophils (PMN) are incompletely understood due to the lack of experimental in vivo methods allowing quantitative analyses. Here, we describe a robust murine experimental model that employs an exteriorized intestinal segment of either ileum or proximal colon. The exteriorized intestinal loop (iLoop) is fully vascularized and offers physiological advantages over ex vivo chamber-based approaches commonly used to study permeability and PMN migration across epithelial cell monolayers.
We demonstrate two applications of this model in detail: (1) quantitative measurement of intestinal permeability through detection of fluorescence-labeled dextrans in serum after intraluminal injection, (2) quantitative assessment of migrated PMN across the intestinal epithelium into the gut lumen after intraluminal introduction of chemoattractants. We demonstrate feasibility of this model and provide results utilizing the iLoop in mice lacking the epithelial tight junction-associated protein JAM-A compared to controls. JAM-A has been shown to regulate epithelial barrier function as well as PMN TEpM during inflammatory responses. Our results using the iLoop confirm previous studies and highlight the importance of JAM-A in regulation of intestinal permeability and PMN TEpM in vivo during homeostasis and disease. 
The iLoop model provides a highly standardized method for reproducible in vivo studies of intestinal homeostasis and inflammation and will significantly enhance understanding of intestinal barrier function and mucosal inflammation in diseases such as IBD.

Dysregulated intestinal epithelial barrier function and immune responses are hallmarks of inflammatory bowel disease that remain poorly investigated due to a lack of physiological models. Here, we describe a mouse intestinal loop model that employs a well-vascularized and exteriorized bowel segment to study mucosal permeability and leukocyte recruitment in vivo.

Valutazione funzionale della permeabilità intestinale e della migrazione transepiteliale neutrofila nei topi utilizzando un modello standardizzato di loop intestinale

The intestinal mucosa is lined by a single layer of epithelial cells that forms a dynamic barrier allowing paracellular transport of nutrients and water ...

Characterizing Salmonella Typhimurium-induced Septic Peritonitis in Mice

Sepsis is a dysregulated host immune response to microbial invasion or tissue damage, leading to organ injury at a site distant from that of the infection or damage. Currently, the widely used mice models of sepsis include lipopolysaccharide (LPS)-induced endotoxemia, cecal ligation and puncture (CLP), and monobacterial infection model systems. This protocol describes a method to study the host responses during Salmonella Typhimurium infection-induced septic peritonitis in mice. S. Typhimurium, a Gram-negative intracellular pathogen, causes typhoid-like disease in mice.
This protocol elaborates the culture preparation, induction of septic peritonitis in mice through intraperitoneal injection, and methods to study systemic host responses. Furthermore, the assessment of bacterial burden in different organs and the flow cytometric analysis of increased neutrophil numbers in the peritoneal lavage is presented. Salmonella Typhimurium-induced sepsis in mice leads to an increase in proinflammatory cytokines and rapid infiltration of neutrophils in the peritoneal cavity, leading to lower survival.
Every step in this protocol has been optimized, resulting in high reproducibility of the pathogenesis of septic peritonitis. This model is useful for studying immunological responses during bacterial sepsis, the roles of different genes in disease progression, and the effects of drugs to attenuate sepsis.

Characterizing Salmonella Typhimurium-induced Septic Peritonitis in Mice

This protocol describes the induction of Gram-negative monobacterial sepsis in a mouse model system. The model is useful in investigating the inflammatory and lethal host responses during sepsis.

Caratterizzazione della peritonite settica indotta da Salmonella Typhimurium nei topi

Sepsis is a dysregulated host immune response to microbial invasion or tissue damage, leading to organ injury at a site distant from that of the infection ...

Evaluation of a Reliable Biomarker in a Cecal Ligation and Puncture-Induced Mouse Model of Sepsis

Sepsis is a severe life-threatening and rapidly developing disease that causes millions of deaths annually worldwide. Researchers have made tremendous efforts to elucidate the pathophysiology of sepsis using various animal models; the mouse model of sepsis induced by cecal ligation and puncture (CLP) is widely used in laboratories. The three technical aspects that affect the severity and replicability of the CLP model are the percentage of cecum ligated, the size of the needle used for cecal puncture, and the volume of feces squeezed into the abdominal cavity. The rapid and specific diagnosis of sepsis is a crucial factor that affects the outcome. The gold standard for sepsis diagnosis is microbial culture; however, this process is time-consuming and sometimes inaccurate. The detection of sepsis-specific biomarkers is fast, but the existing biomarkers are unsatisfactory due to a short half-life, non-specificity, and insufficient sensitivity. Therefore, there is an urgent need for a reliable biomarker of sepsis in the early stages. Previous publications suggest that excessive neutrophil extracellular traps (NETs) occur in sepsis. Citrullinated histone H3 (CitH3), as a NET component, is elevated both in septic animals and patients, and the presence of CitH3 is a reliable diagnostic biomarker of sepsis. The present study aimed to describe a standardized mouse model of CLP-induced sepsis and establish a reliable blood biomarker of sepsis. Our work may contribute to the early and accurate diagnosis of sepsis in the future.

This protocol presents the operative details of cecal ligation and puncture (CLP) in a mouse model of sepsis. CLP is one of the most widely used techniques to create an animal model of sepsis. Therefore, a standardized CLP protocol is required for the attainment of reliable research results.

Valutazione di un biomarcatore affidabile in un modello murino di sepsi indotta da legatura cecale e puntura

Sepsis is a severe life-threatening and rapidly developing disease that causes millions of deaths annually worldwide. Researchers have made tremendous ...

Piattaforma Intestino su chip migliorata per informazioni immunologiche

Immunocompetent Intestine-on-Chip Model for Analyzing Gut Mucosal Immune Responses

An advanced intestine-on-chip model recreating epithelial 3D organotypic villus-like and crypt-like structures has been developed. The immunocompetent model includes Human Umbilical Vein Endothelial Cells (HUVEC), Caco-2 intestinal epithelial cells, tissue-resident macrophages, and dendritic cells, which self-organize within the tissue, mirroring characteristics of the human intestinal mucosa. A unique aspect of this platform is its capacity to integrate circulating human primary immune cells, enhancing physiological relevance. The model is designed to investigate the intestinal immune system&#39;s response to bacterial and fungal colonization and infection. Due to its enlarged cavity size, the model offers diverse functional readouts such as permeation assays, cytokine release, and immune cell infiltration, and is compatible with immunofluorescence measurement of 3D structures formed by the epithelial cell layer. It hereby provides comprehensive insights into cell differentiation and function. The intestine-on-chip platform has demonstrated its potential in elucidating complex interactions between surrogates of a living microbiota and human host tissue within a microphysiological perfused biochip platform.

Autore in primo piano: Sviluppo di modelli organo-on-chip immunocompetenti per la ricerca sulle malattie infettive

Our detailed protocol outlines the creation and use of the advanced intestine-on-chip model, which simulates human intestinal mucosa with 3D structures and various cell types, enabling in-depth analysis of immune responses and cellular functions in response to microbial colonization.

Modello immunocompetente Intestino-on-Chip per l'analisi delle risposte immunitarie della mucosa intestinale

An advanced intestine-on-chip model recreating epithelial 3D organotypic villus-like and crypt-like structures has been developed. The immunocompetent ...

Methods Article

Colon Ascendens stent Peritonite (CASP) - un modello standardizzato per polimicrobiche sepsi addominale