Questo lavoro è stato supportato dal lavoro, famiglia e Health Network (www.WorkFamilyHealthNetwork.org), che è finanziato da un accordo di cooperazione con il National Institutes of Health e il Centers for Disease Control and Prevention: Eunice Kennedy Shriver National Institute of Child Health e lo Sviluppo Umano (Grant # U01HD051217, U01HD051218, U01HD051256, U01HD051276), National Institute on Aging (Grant # U01AG027669), Office of Behavioral Sciences Research and Science, il National Heart, Lung and Blood Institute (R01HL107240) e Istituto Nazionale per la sicurezza e la salute (Grant # U01OH008788, U01HD059773). Le sovvenzioni da parte di William T. sovvenzione della Fondazione, Alfred P Sloan Foundation, e l&#39;Amministrazione per bambini e famiglie hanno fornito ulteriori finanziamenti. I contenuti di questa pubblicazione sono di esclusiva responsabilità degli autori e non necessariamente rappresentano le opinioni ufficiali di questi istituti e uffici.

<ol>
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W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+origins+of+inflammation:+microbial+exposures+in+infancy+predict+lower+levels+of+C-reactive+protein+in+adulthood.">Early origins of inflammation: microbial exposures in infancy predict lower levels of C-reactive protein in adulthood.</a> Proc. R Soc. B.. , (2009).</li><li>McDade, T. W., Ice, G. H., James, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Measuring Stress in Humans. A Practical Guide for the Field. , 181-207 (2007).</li><li>Tanner, S., McDade, T. 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Biol. , (2012).</li></ol>

Orfeu Buxton ha ricevuto una sovvenzione ricercatore-iniziato da Sepracor Inc (ora Sunovion; ESRC-0977, ClinicalTrials.gov Identifier NCT00900159), serve come consulente e perito per Dinsmore LLC, sulla Advisory Board di Matsutani dell&#39;America scientifico, e ha ricevuto consulenza tasse della Wake Forest University Medical Center.

Biomarcatori sono strumenti estremamente utili in più discipline, tra cui medicina, biologia cellulare, genetica, psicologia, sociologia, demografia, epidemiologia e sociale. All&#39;interno di ogni disciplina, la validità e l&#39;affidabilità fase iniziale di ricerca di biomarcatore è stato usato per scoprire sia il rischio di malattia nascosta e fornire la previsione longitudinale degli esiti di salute. In questi casi, i biomarcatori che sono precisi, durevoli (cioè possono sopravvivere al ritardo tra raccolta e l&#39;attuazione del test di laboratorio del campione di estrarre il biomarker) e versatile (cioè utile in una varietà di modelli) sono obbligatori. Mentre la raccolta DBS è una procedura relativamente semplice, diverse tecniche possono aiutare a massimizzare il volume di macchie raccolte. Comincia prima raccolta, garantendo la mano di una partecipante è caldo, e quindi che i vasi sanguigni si dilatano, aiuterà il flusso di sangue una volta il dito è forata. Utilizzando scaldamani o avere unpartecipante eseguire le loro mani sotto l&#39;acqua calda può aiutare con questo processo. Mungitura il dito prima collezione sarà tirare il sangue alla punta delle dita e scaldare la mano per aiutare il flusso di sangue. La mungitura è un processo che migliora con la pratica. Collezionisti dovrebbero usare qualsiasi tecnica che trovano più comodo ed efficace, ma l&#39;approccio più comune prevede la mungitura mano del partecipante con la mano opposta del collezionista. Questo metodo consente il pollice del collettore di lavorare in profondità nel palmo del partecipante mentre il lato opposto può stabilizzare polso del partecipante. Come esempio, se si dovesse raccolta di sangue di un dito della mano sinistra del partecipante, il collettore stabilizzerebbe polso del partecipante con la mano sinistra e latte con la mano destra. Gli errori più comuni commessi durante la mungitura non includere utilizzando una presa salda, tirando la pelle sopra la mano piuttosto lavorare nei muscoli per tirare il sangue verso la punta del dito. E &#39;anche importante evitare pinching il dito con la mano mungitura o strettamente presa polso del partecipante con la mano nonmilking, entrambi i quali impediscono il flusso di sangue. Quando la puntura del dito, fare la puntura il più profondamente possibile, premendo con forza la lancetta nel dito prima dello scarico. Una puntura superficiale risulta meno flusso sanguigno e veloce coagulazione. Dopo la puntura del dito, lavorando rapidamente è fondamentale. Sangue sottile porta alla facile raccolta e macchie più grandi. Dopo puntura, il sangue diventa più viscoso fino coagulazione. Meno tempo richiesto per raccogliere le gocce di sangue sulla carta maggiore il loro volume. Idealmente il sangue del partecipante sarà abbastanza sottile che scende cadrà del proprio peso, ma questo non sarà il caso per tutti i partecipanti, come il sangue di alcune persone è più spessa o coaguli più velocemente di altri. Se il sangue è troppo spesso a cadere dal dito, la carta filtro deve essere portato al sangue per la raccolta. When portando la scheda al sangue è importante tenere la carta a contatto con la goccia mentre è appeso dal dito a lungo possibile, non solo tamponando il sangue alla scheda. Ciò contribuirà sangue estraibile dal dito di massimizzare la dimensione del punto. Questa tecnica richiede mano ferma, per mantenere il contatto tra il sangue e la scheda. Con entrambe le mani, una per stabilizzare la mano partecipanti e uno per tenere la scheda, e mantenendo entrambe le mani a contatto uno con l&#39;altro aiuta a stabilizzare la carta e il sangue insieme. Aree di ricerca avanzate, quali la valutazione del rischio cardiometabolico, hanno a lungo invocato biomarcatori come la proteina C-reattiva (CRP), l&#39;insulina, e l&#39;emoglobina glicosilata (HbA1C) per la diagnosi precoce del rischio e gli sforzi di prevenzione, così come biomarcatori di &quot;endpoint duri&quot; per la malattia cardiovascolare (CVD) del rischio e mortalità cardiovascolare associata 12. Epidemiologia clinica valuta frequentemente biomarcatori per prospectively predire gli esiti di rischio cardiometabolico come le malattie cardiache e il diabete di tipo II. Forse il più usato di tutti i biomarcatori è il punteggio di rischio Framingham, un composito che include la pressione sanguigna, livelli di colesterolo HDL e livelli totali di colesterolo che ha dimostrato l&#39;utilità nel predire CVD 13. Tuttavia, il punteggio di Framingham ha sperimentato alcune controversie tecniche, e ha dei limiti in studi incentrati sul collegamento tra fattori sociali e ambientali per la salute, suggerendo la necessità di biomarcatori più precisi e specifici relativi alla ricerca cardiovascolare. Ci sono un certo numero di kit disponibili in commercio utilizzando ELISA o tecniche simili disponibili per l&#39;analisi di campioni DBS. Necessarie per il dosaggio di campioni DBS sono l&#39;uso di specifici e ottimizzati passi eluizione di portare i campioni essiccati in soluzione 2. Si tratta di una zona in espansione della ricerca come test per più analiti sono attualmente in fase di sviluppo 1. Tra the saggi già validati e ampiamente utilizzati sono il colesterolo 2, CRP 10,14,15, IgE16, EBV 9,15, la leptina 17, e cyotkines 18. Ci sono un certo numero di laboratori specializzati nel saggio di DBS, tra cui l&#39;Università di Washington, Dipartimento di Medicina di Laboratorio (UW Lab Med) Biomarker Laboratory (Direttore: Marco Wener). Tenendo presente che un pannello di biomarcatori, piuttosto che un biomarker lone, è più utile nel campo della ricerca cardiovascolare e diabete, biomarker devono essere considerati insieme a una varietà di fattori contestuali al fine di massimizzare la loro utilità. Ricerca di biomarcatori può essere costoso tuttavia, sia finanziariamente e in tempo per la raccolta dei dati. Così, mentre è di vitale importanza scegliere biomarcatori che siano accurati, resistente e versatile, il lavoro e la famiglia di ricerca biomarcatore deve essere radicato in praticità selezionando biomarcatori che sono poco costosi, appropriato e può essere raccolto rapidamente with facilità. Inoltre, considerazioni pratiche spesso sfociano in una incapacità di massimizzare contemporaneamente il prezzo, la qualità e la velocità all&#39;interno di una procedura. Qui si trovano le prossime fasi della ricerca di biomarker della salute all&#39;interno di studi sul campo e della popolazione. Il campo di ricerca biomarker è attualmente in un periodo di crescita drammatica, tuttavia, la maggior parte del lavoro deve ancora venire.

I biomarcatori possono fornire preziose informazioni sui processi biologici che vanno dal normale patogeni che possono contribuire alla malattia clinicamente identificabili 1. In contesti di ricerca, macchie di sangue essiccato (DBS) stanno diventando sempre preferito per l&#39;iniezione in vena come un metodo per la raccolta di biomarcatori nel sangue intero. Raccolta DBS semplice, di relativamente indolore, meno invasiva poi venipuntura, e richiede requisiti minimi di stoccaggio (cioè campioni non devono essere congelati immediatamente e può essere conservato per un lungo periodo di tempo in un ambiente freezer stabile prima del dosaggio). Campioni DBS possono essere testati per una varietà di diversi analiti, tra cui il colesterolo, proteina C-reattiva, emoglobina glicosilata, anticorpi contro il virus di Epstein-Barr, e diverse citochine. Venipuntura è stato a lungo il gold standard per la raccolta dei biomarcatori nel sangue. Tuttavia, ottenimento, archiviazione e trasporto dei campioni di sangue richiede aderenza deice ad una serie di protocolli e codici di salute, che non può essere possibile in alcuni protocolli di ricerca. Flebotomi devono essere certificati ufficialmente per prelievo venoso, mentre le procedure di campionamento DBS sono più semplici e non richiedono la certificazione ufficiale. Raccolta di sangue venoso richiede anche più apparecchi di quanto non faccia la raccolta DBS (ad esempio aghi, tubi, tornelli), e lo sforzo più post-raccolta. Campioni vena devono essere trattati (cioè siero o plasma estratto dal campione di sangue mediante centrifugazione o riposo a temperatura ambiente per un determinato periodo di tempo) e congelati tra -20 ° C e -70 ° C immediatamente al fine di impedire il degrado di analiti , mentre i campioni DBS devono semplicemente essere lasciati asciugare all&#39;aria e poi possono essere conservati a temperatura ambiente per una settimana o più a seconda dell&#39;analita, prima del trasferimento ad un congelatore 2. Campioni DBS sono meno costosi per raccogliere campioni di venipuntura per ragioni sopra descritte. Campioni DBS ancheoccupano meno spazio, riducendo i costi di trasporto e stoccaggio prima del dosaggio. L&#39;uso di saliva come biomarker è diventata la chiave in studi biobehavioral. Saliva offre un metodo semplice e non invasivo per raccogliere i biomarcatori ed è diventato lo standard per il lavoro sul campo finalizzato a misurare il cortisolo o cotinina 3-5. L&#39;urina è un altro campione che possono essere raccolti in modo non invasivo e può essere utilizzato in studi a livello di popolazione per i saggi di melatonina o tossicologia. Mentre sia urina e saliva offrono dritto in avanti le procedure di raccolta che sono in grado di essere completato dai partecipanti stessi, non tutti gli analiti possono essere misurati in questi media. DBS offre una semplice, conveniente, alternativo al prelievo venoso e stanno diventando uno strumento di ricerca sempre più attuate in campo e in studi di popolazione 6.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="573">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Asepti II Microbial Wipes</td>
			<td style="width:71px;">EcoLab</td>
			<td style="width:119px;">D12330345</td>
			<td style="width:167px;">3rd party shipping</td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:216px;">Bio-hazard waste bags</td>
			<td style="width:71px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">14220-092</td>
			<td style="width:167px;">High Strength Autoclavable Polypropylene Biohazard Bags, 2 mil</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;"></td>
			<td style="width:71px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Bio-hazard waste barrel</td>
			<td style="width:71px;">Tyco</td>
			<td style="width:119px;">58578-092</td>
			<td style="width:167px;">8g. Slide lid</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Sharps Container</td>
			<td style="width:71px;">BD Medical</td>
			<td style="width:119px;">BD305487</td>
			<td style="width:167px;">1.4 qt.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Chux</td>
			<td style="width:71px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">82020-845</td>
			<td style="width:167px;">Absorbent bench underpads&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Gloves</td>
			<td style="width:71px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">XSmall: 89038-267</td>
			<td style="width:167px;">Powder-free, latex-free nitrile gloves</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;"></td>
			<td style="width:71px;"></td>
			<td style="width:119px;">Small: 89038-268</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;"></td>
			<td style="width:71px;"></td>
			<td style="width:119px;">Medium: 89038-270</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;"></td>
			<td style="width:71px;"></td>
			<td style="width:119px;">Large: 89038-272</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;"></td>
			<td style="width:71px;"></td>
			<td style="width:119px;">XLarge: 89038-274</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Hand sanitizer (e.g., Purell)</td>
			<td style="width:71px;">Johnson &#38; Johnson</td>
			<td style="width:119px;">89040-210</td>
			<td style="width:167px;">3rd party shipping</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Alcohol wipes</td>
			<td style="width:71px;">WEBCOL and CURITY</td>
			<td style="width:119px;">82003-856</td>
			<td style="width:167px;">Prep pads</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;"></td>
			<td style="width:71px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Gauze</td>
			<td style="width:71px;">VERSALON</td>
			<td style="width:119px;">82004-826</td>
			<td style="width:167px;">Non-woven sponges</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;"></td>
			<td style="width:71px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Band-Aids</td>
			<td style="width:71px;">Nutramax Stat Strips</td>
			<td style="width:119px;">15431-475</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Lancets</td>
			<td style="width:71px;">Owen Mumford</td>
			<td style="width:119px;">82028-060</td>
			<td style="width:167px;">3.0 mm, 21 ga.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Protein paper collection cards</td>
			<td style="width:71px;">Whatman</td>
			<td style="width:119px;">Custom-build</td>
			<td style="width:167px;">903 Protein Saver Collection paper</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Desiccant</td>
			<td style="width:71px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">61161-319</td>
			<td style="width:167px;">Humidity sponges</td>
		</tr>
		<tr height="168">
			<td height="168" style="height:168px;width:216px;">Specimen bags</td>
			<td style="width:71px;">Lab Guard Reclosable Biohazard Bags, ITW Minigrip</td>
			<td style="width:119px;">56766-370</td>
			<td style="width:167px;">6&#8221; x 9&#8221;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;"></td>
			<td style="width:71px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Specimen storage cooler</td>
			<td style="width:71px;">Igloo</td>
			<td style="width:119px;">Playmate Mini</td>
			<td style="width:167px;">4 qt.; direct from manufacturer</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

dried blood spot collection of health biomarkers to maximize participation in population studies

I biomarcatori sono indicatori biologici direttamente-misurati di malattia, la salute, esposizioni o altre informazioni biologiche. Della popolazione e delle scienze sociali, biomarcatori devono essere facile da ottenere, i trasporti, e analizzare. Macchie di sangue secco rispondono a questa esigenza, e possono essere raccolti in campo con alti tassi di risposta. Questi elementi sono particolarmente importanti nei disegni di studio longitudinale tra cui interventi in cui l&#39;attrito è fondamentale per evitare, e alti tassi di risposta migliorano l&#39;interpretazione dei risultati. Secca raccolta dei campioni di sangue per il pranzo è semplice, veloce, relativamente indolore, meno invasiva poi prelievo venoso, e richiede minimi requisiti di storage di campo (cioè i campioni non devono essere immediatamente congelato e può essere conservato per un lungo periodo di tempo in un ambiente freezer stabile prima dosaggio). I campioni possono essere analizzati per una varietà di diversi analiti, tra cui il colesterolo, proteina C-reattiva, emoglobina glicosilata, numerose citochine, eoanaliti ther, così come forniscono materiale genetico. Raccolta DBS è raffigurato come impiegato in diversi studi recenti.

<img alt="Figura 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50973/50973fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50973/50973fig1.jpg" /> Figura 1. Secchi campione di macchia di sangue. Carta raccolta viene mostrato con quattro, validi punti raccolti nel processo di essiccazione. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50973/50973fig1highres.jpg" target="_blank">Clicca qui per vedere l&#39;immagine ingrandita.</a> <img alt="Figura 2" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50973/50973fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50973/50973fig2.jpg" /> Sono mostrati Figura 2. Buone e cattive secchi campioni blood spot. Risultati di successo (a destra) e fallimentare (a sinistra) raccolta DBS. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50973/50973fig2highres.jpg" target="_blank">Clicca qui per ingrandire im</a>età. <img alt="Figura 3" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50973/50973fig3highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50973/50973fig3.jpg" /> Figura 3. Atteggiamenti e pratiche associate con il rischio di malattia dipendente cardiometabolic 6 Managers &#39;. Questa cifra è stata modificata dal Berkman, LF, Buxton, OM, Ertel, K. &amp; Okechukwu, le pratiche di C. agenzia legate al lavoro-famiglia equilibrio prevedere cardiovascolare dipendente il rischio e la durata del sonno nelle impostazioni di cura estese. Journal of Occupational Health Psychology 115, 316-329 (2010). Lavoratori esposti ai dirigenti con i punteggi lavoro-famiglia media o bassa di apertura e creatività per aiutare con il lavoro dei loro dipendenti e la necessità della famiglia, hanno statisticamente significativo aumento delle probabilità di avere due o più rischi cardiovascolari (fumatore, obesità, alta pressione sanguigna o campagna pubblicitariartension, colesterolo alto e alto di emoglobina glicosilata (HbA1c) o la diagnosi di diabete). Superiore e pannelli centrali rappresentano valori medi ± deviazioni standard per il colesterolo totale valutata dalla macchia di sangue secco e Hb A1C valutati da punto di dispositivo di assistenza (che può anche essere determinato in modo attendibile da macchie di sangue essiccato). Pannello inferiore mostra il rischio di malattia cardiovascolare in base al punteggio manager. Analisi limitato a infermieri e altri dipendenti che prestano assistenza diretta indicano che l&#39;esposizione ai dirigenti con bassa creatività e apertura relativi problemi di lavoro e famiglia può essere particolarmente importante per questi individui (OR per basso punteggio WF = 6.4, p = 0,01). Tutti i modelli di controllo per età, sesso, salario, istruzione, razza / etnia, e cantiere. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50973/50973fig3highres.jpg" target="_blank">Clicca qui per vedere l&#39;immagine ingrandita.</a>

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Dried Blood Spot Collection of Health Biomarkers to Maximize Participation in Population Studies

I biomarcatori sono indicatori biologici direttamente-misurate di malattia o di salute. Della popolazione e delle scienze sociali, biomarcatori devono essere facile da ottenere, i trasporti, e analizzare. Secchi di sangue Spot (DBS) collezione risponde a questa esigenza, possono essere raccolti in campo con alti tassi di risposta e analizzato per una serie di biomarcatori.

Sangue secco Spot Raccolta di salute biomarcatori per massimizzare la partecipazione negli studi di popolazione

Biomarkers are directly-measured biological indicators of disease, health, exposures, or other biological information. In population and social sciences, ...

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Medicine

36.0K Views.  Harvard School of Public Health.  I biomarcatori sono indicatori biologici direttamente-misurate di malattia o di salute. Della popolazione e delle scienze sociali, biomarcatori devono essere facile da ottenere, i trasporti, e analizzare. Secchi di sangue Spot (DBS) collezione risponde a questa esigenza, possono essere raccolti in campo con alti tassi di risposta e analizzato per una serie di biomarcatori. 

Video: Dried Blood Spot Collection of Health Biomarkers to Maximize Participation in Population Studies

Biomarkers in an Animal Model for Revealing Neural, Hematologic, and Behavioral Correlates of PTSD

Identification of biomarkers representing the evolution of the pathophysiology of Post Traumatic Stress Disorder (PTSD) is vitally important, not only for objective diagnosis but also for the evaluation of therapeutic efficacy and resilience to trauma. Ongoing research is directed at identifying molecular biomarkers for PTSD, including traumatic stress induced proteins, transcriptomes, genomic variances and genetic modulators, using biologic samples from subjects' blood, saliva, urine, and postmortem brain tissues. However, the correlation of these biomarker molecules in peripheral or postmortem samples to altered brain functions associated with psychiatric symptoms in PTSD remains unresolved. Here, we present an animal model of PTSD in which both peripheral blood and central brain biomarkers, as well as behavioral phenotype, can be collected and measured, thus providing the needed correlation of the central biomarkers of PTSD, which are mechanistic and pathognomonic but cannot be collected from people, with the peripheral biomarkers and behavioral phenotypes, which can.
Our animal model of PTSD employs restraint and tail shocks repeated for three continuous days - the inescapable tail-shock model (ITS) in rats. This ITS model mimics the pathophysiology of PTSD 17, 7, 4, 10. We and others have verified that the ITS model induces behavioral and neurobiological alterations similar to those found in PTSD subjects 17, 7, 10, 9. Specifically, these stressed rats exhibit (1) a delayed and exaggerated startle response appearing several days after stressor cessation, which given the compressed time scale of the rat's life compared to a humans, corresponds to the one to three months delay of symptoms in PTSD patients (DSM-IV-TR PTSD Criterian D/E 13), (2) enhanced plasma corticosterone (CORT) for several days, indicating compromise of the hypothalamopituitary axis (HPA), and (3) retarded body weight gain after stressor cessation, indicating dysfunction of metabolic regulation.
The experimental paradigms employed for this model are: (1) a learned helplessness paradigm in the rat assayed by measurement of acoustic startle response (ASR) and a charting of body mass; (2) microdissection of the rat brain into regions and nuclei; (3) enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for blood levels of CORT; (4) a gene expression microarray plus related bioinformatics tools 18. This microarray, dubbed rMNChip, focuses on mitochondrial and mitochondria-related nuclear genes in the rat so as to specifically address the neuronal bioenergetics hypothesized to be involved in PTSD.

We describe a rat model of post traumatic stress disorder (PTSD) that reveals the persistent alterations in neuroendocrine function and the delayed long-term, exaggerated fear response, characteristic of PTSD patients. The animal model and methods described here are useful for correlating biomarkers in brain nuclei, which are mechanistic but cannot be measured in patients, with biomarkers in peripheral white blood cells, which can.

Biomarcatori in un modello animale per Rivelare correlati neurali, ematologiche, e comportamentali di PTSD

Identification of biomarkers representing the evolution of the pathophysiology of Post Traumatic Stress Disorder (PTSD) is vitally important, not only for ...

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Medicina

High Throughput Sequential ELISA for Validation of Biomarkers of Acute Graft-Versus-Host Disease

Unbiased discovery proteomics strategies have the potential to identify large numbers of novel biomarkers that can improve diagnostic and prognostic testing in a clinical setting and may help guide therapeutic interventions. When large numbers of candidate proteins are identified, it may be difficult to validate candidate biomarkers in a timely and efficient fashion from patient plasma samples that are event-driven, of finite volume and irreplaceable, such as at the onset of acute graft-versus-host disease (GVHD), a potentially life-threatening complication of allogeneic hematopoietic stem cell transplantation (HSCT).
Here we describe the process of performing commercially available ELISAs for six validated GVHD proteins: IL-2R&alpha;5, TNFR16, HGF7, IL-88, elafin2, and REG3&alpha;3 (also known as PAP1) in a sequential fashion to minimize freeze-thaw cycles, thawed plasma time and plasma usage. For this procedure we perform the ELISAs in sequential order as determined by sample dilution factor as established in our laboratory using manufacturer ELISA kits and protocols with minor adjustments to facilitate optimal sequential ELISA performance. The resulting plasma biomarker concentrations can then be compiled and analyzed for significant findings within a patient cohort. While these biomarkers are currently for research purposes only, their incorporation into clinical care is currently being investigated in clinical trials.
This technique can be applied to perform ELISAs for multiple proteins/cytokines of interest on the same sample(s) provided the samples do not need to be mixed with other reagents. If ELISA kits do not come with pre-coated plates, 96-well half-well plates or 384-well plates can be used to further minimize use of samples/reagents.

High throughput validation of multiple candidate biomarkers can be performed by sequential ELISA in order to minimize freeze/thaw cycles and use of precious plasma samples. Here, we demonstrate how to sequentially perform ELISAs for six different validated plasma biomarkers1-3 of graft-versus-host disease (GVHD)4 on the same plasma sample.

High Throughput sequenziale ELISA per la convalida dei biomarcatori di acuta Graft-versus-host disease

Unbiased discovery proteomics strategies have  the potential to identify large numbers of novel biomarkers that can improve  diagnostic and prognostic ...

An Affordable HIV-1 Drug Resistance Monitoring Method for Resource Limited Settings

HIV-1 drug resistance has the potential to seriously compromise the effectiveness and impact of antiretroviral therapy (ART). As ART programs in sub-Saharan Africa continue to expand, individuals on ART should be closely monitored for the emergence of drug resistance. Surveillance of transmitted drug resistance to track transmission of viral strains already resistant to ART is also critical. Unfortunately, drug resistance testing is still not readily accessible in resource limited settings, because genotyping is expensive and requires sophisticated laboratory and data management infrastructure. An open access genotypic drug resistance monitoring method to manage individuals and assess transmitted drug resistance is described. The method uses free open source software for the interpretation of drug resistance patterns and the generation of individual patient reports. The genotyping protocol has an amplification rate of greater than 95% for plasma samples with a viral load &#62;1,000 HIV-1 RNA copies/ml. The sensitivity decreases significantly for viral loads &#60;1,000 HIV-1 RNA copies/ml. The method described here was validated against a method of HIV-1 drug resistance testing approved by the United States Food and Drug Administration (FDA), the Viroseq genotyping method. Limitations of the method described here include the fact that it is not automated and that it also failed to amplify the circulating recombinant form CRF02_AG from a validation panel of samples, although it amplified subtypes A and B from the same panel.

Drug resistance testing for HIV-1 infected individuals failing antiretroviral therapy (ART) can guide future therapies and improve treatment outcomes. Optimizing individual and population health outcomes in high HIV prevalence but resource-limited settings will ultimately require affordable and accessible drug resistance genotyping and interpretation methods.

Un metodo di monitoraggio Affordable HIV-1 resistenza ai farmaci per le impostazioni limitate risorse

HIV-1 drug resistance has the potential to seriously compromise the effectiveness and impact of antiretroviral therapy (ART). As ART programs in ...

Quantification of the Immunosuppressant Tacrolimus on Dried Blood Spots Using LC-MS/MS

The calcineurin inhibitor tacrolimus is the cornerstone of most immunosuppressive treatment protocols after solid organ transplantation in the United States. Tacrolimus is a narrow therapeutic index drug and as such requires therapeutic drug monitoring and dose adjustment based on its whole blood trough concentrations. To facilitate home therapeutic drug and adherence monitoring, the collection of dried blood spots is an attractive concept. After a finger stick, the patient collects a blood drop on filter paper at home. After the blood is dried, it is mailed to the analytical laboratory where tacrolimus is quantified using high-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry (HPLC-MS/MS) in combination with a simple manual protein precipitation step and online column extraction.
For tacrolimus analysis, a 6-mm disc is punched from the saturated center of the blood spot. The blood spot is homogenized using a bullet blender and then proteins are precipitated with methanol/0.2 M ZnSO4 containing the internal standard D2,13C-tacrolimus. After vortexing and centrifugation, 100 &#181;l of supernatant is injected into an online extraction column and washed with 5 ml/min of 0.1 formic acid/acetonitrile (7:3, v:v) for 1 min. Hereafter, the switching valve is activated and the analytes are back-flushed onto the analytical column (and separated using a 0.1% formic acid/acetonitrile gradient). Tacrolimus is quantified in the positive multi reaction mode (MRM) using a tandem mass spectrometer.
The assay is linear from 1 to 50 ng/ml. Inter-assay variability (3.6%-6.1%) and accuracy (91.7%-101.6%) as assessed over 20 days meet acceptance criteria. Average extraction recovery is 95.5%. There are no relevant carry-over, matrix interferences and matrix effects. Tacrolimus is stable in dried blood spots at RT and at +4 &#176;C for 1 week. Extracted samples in the autosampler are stable at +4 &#176;C for at least 72 hr.

Here we describe a high-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry (HPLC-MS/MS) assay to quantify the immunosuppressant tacrolimus in dried blood spots using a simple manual protein precipitation step and online column extraction.

Quantificazione del immunosoppressore Tacrolimus su macchie di sangue secco Uso LC-MS / MS

The calcineurin inhibitor tacrolimus is the cornerstone of most immunosuppressive treatment protocols after solid organ transplantation in the United ...

In Vivo and Ex Vivo Approaches to Study Ovarian Cancer Metastatic Colonization of Milky Spot Structures in Peritoneal Adipose

High-grade serous ovarian cancer (HGSC), the cause of widespread peritoneal metastases, continues to have an extremely poor prognosis; fewer than 30% of women are alive 5 years after diagnosis. The omentum is a preferred site of HGSC metastasis formation. Despite the clinical importance of this microenvironment, the contribution of omental adipose tissue to ovarian cancer progression remains understudied. Omental adipose is unusual in that it contains structures known as milky spots, which are comprised of B, T, and NK cells, macrophages, and progenitor cells surrounding dense nests of vasculature. Milky spots play a key role in the physiologic functions of the omentum, which are required for peritoneal homeostasis. We have shown that milky spots also promote ovarian cancer metastatic colonization of peritoneal adipose, a key step in the development of peritoneal metastases. Here we describe the approaches we developed to evaluate and quantify milky spots in peritoneal adipose and study their functional contribution to ovarian cancer cell metastatic colonization of omental tissues both in vivo and ex vivo. These approaches are generalizable to additional mouse models and cell lines, thus enabling the study of ovarian cancer metastasis formation from initial localization of cells to milky spot structures to the development of widespread peritoneal metastases.

In Vivo and Ex Vivo Approaches to Study Ovarian Cancer Metastatic Colonization of Milky Spot Structures in Peritoneal Adipose

We outline a protocol that implements both in vivo and ex vivo approaches to study ovarian cancer colonization of peritoneal adipose tissues, particularly the omentum. Furthermore, we present a protocol to quantitate and analyze immune cell-structures in the omentum known as milky spots, which promote metastases of peritoneal adipose.

In vivo ed ex vivo approcci per studiare il cancro ovarico metastatico colonizzazione delle strutture Lattea Spot in peritoneale adiposo

High-grade serous ovarian cancer (HGSC), the cause of widespread peritoneal metastases, continues to have an extremely poor prognosis; fewer than 30% of ...

A Method of Trigonometric Modelling of Seasonal Variation Demonstrated with Multiple Sclerosis Relapse Data

This report describes a novel Stata-based application of trigonometric regression modelling to 55 years of multiple sclerosis relapse data from 46 clinical centers across 20 countries located in both hemispheres. Central to the success of this method was the strategic use of plot analysis to guide and corroborate the statistical regression modelling. Initial plot analysis was necessary for establishing realistic hypotheses regarding the presence and structural form of seasonal and latitudinal influences on relapse probability and then testing the performance of the resultant models. Trigonometric regression was then necessary to quantify these relationships, adjust for important confounders and provide a measure of certainty as to how plausible these associations were. Synchronization of graphing techniques with regression modelling permitted a systematic refinement of models until best-fit convergence was achieved, enabling novel inferences to be made regarding the independent influence of both season and latitude in predicting relapse onset timing in MS. These methods have the potential for application across other complex disease and epidemiological phenomena suspected or known to vary systematically with season and/or geographic location.

Combining plot analysis with trigonometric regression is a robust method for exploring complex, cyclical phenomena such as relapse onset timing in multiple sclerosis (MS). This method enabled unbiased characterisation of seasonal trends in relapse onset permitting novel inferences around the influence of seasonal variation, ultraviolet radiation (UVR) and latitude.

Un metodo di trigonometrica Modellazione di variazione stagionale dimostrata con sclerosi multipla recidiva dati

This report describes a novel Stata-based application of trigonometric regression modelling to  55 years of multiple sclerosis relapse data from 46 ...

Apical Resection Mouse Model to Study Early Mammalian Heart Regeneration

Cardiovascular disease plagues the whole world due to intensive lifestyle changes. Heart regeneration holds great promise for repairing and restoring cardiomyocytes lost due to injury and disease. In contrast to the robust cardiac regeneration of certain lower vertebrates, adult mammalian hearts typically show minimal capacity for heart regeneration and repair. However, recent studies have sparked considerable scientific interest with the finding that, between postnatal day 1 to 7 (P1 to P7), the neonatal mouse heart retains significant regenerative potential after apical resection (i.e., surgical amputation and exposure of left ventricular apex). One major controversy over this finding might be due to the diverse surgery-related procedures used in efforts to replicate or expand upon this important finding. These instructions dynamically present the materials and methodology for apical resection in a mouse model. The salient steps of this rodent survival surgery involve hypothermia anesthesia, thoracotomy, surgical amputation of heart ventricular apex, and suture and recovery of mice. The approach described could expand the application of the apical resection mouse model for cardiovascular research.

A step-by-step video protocol of apical resection is demonstrated in this study. Apical resection is a recently highlighted surgical approach in mammalian heart regeneration research. This study may promote the application of apical resection as a standard methodology in research into the mechanism underlying heart regeneration.

Modello apicale resezione mouse per primo studio Mammalian rigenerazione cardiaca

Cardiovascular disease plagues the whole world due to intensive lifestyle changes. Heart regeneration holds great promise for repairing and restoring ...

Assessment of Child Anthropometry in a Large Epidemiologic Study

A high proportion of children have overweight and obesity in the United States and other countries. Accurate assessment of anthropometry is essential to understand health effects of child growth and adiposity. Gold standard methods of measuring adiposity, such as dual X-ray absorptiometry (DXA), may not be feasible in large field studies. Research staff can, however, complete anthropometric measurements, such as body circumferences and skinfold measurements, using inexpensive portable equipment. In this protocol we detail how to obtain manual anthropometric measurements from children, including standing and sitting height, weight, waist circumference, hip circumference, mid-upper arm circumference, triceps skinfold thickness, and subscapular skinfold thickness, and procedures to assess the quality of these measurements. To demonstrate accuracy of these measurements, among 1,110 school-aged children in the pre-birth cohort Project Viva we calculated Spearman correlation coefficients comparing manual anthropometric measurements with a gold standard measure of body fat, DXA fat mass1. To address reliability, we evaluate intra-rater technical error of measurement at a quality control session conducted on adult female volunteers.

In epidemiologic studies of children, well-trained research staff can accurately and precisely assess weight, height, sitting height, skinfold thicknesses, and body circumferences.

La valutazione del bambino Antropometria In un ampio studio epidemiologico

A high proportion of children have overweight and obesity in the United States and other countries. Accurate assessment of anthropometry is essential to ...

Repeated Blood Collection from Tail Vein of Non-Anesthetized Rats with a Vacuum Blood Collection System

Blood can be collected from rats in a number of sampling locations. For instance, the tail vein is a superior location for blood sampling. However, the tail vein is thin so that it is sometimes hard to puncture. In addition, the tail vein has low blood flow and requires a long sampling time to get sufficient blood. The present report describes a simple blood sampling method, the vacuum blood collection method, which is usually used to obtain blood samples from patients, here used for non-anesthetized rats. The 22 G butterfly needle tip was inserted into one of the lateral tail veins approximately 2-3 cm from the tip of the tail at an angle of approximately 20&#176;, and blood was collected in the vacuum collection tube by inserting the rubber end of the butterfly needle into the vacuum blood collection tube. The present experimental results show that the success rate was 95% in the experimental group and 90% in the beginner group. The success rate and puncture times were similar between two groups. The sampling duration was significantly shorter in the experimental group compared to beginner group. In conclusion, this vacuum blood collection method for sequential blood sampling from the tail vein of non- anesthetized rats is feasible and easy-to-learn, which might serve as a reliable alternative to other conventionally used blood sampling techniques for rats.

Here, we describe a simple tail vein blood sampling method in non-anesthetized rats using a vacuum extraction tube system. This method reduces the risk of direct exposure to blood and simplifies taking multiple samples from a single venipuncture.

Ripetuto il prelievo di sangue dalla vena di coda dei ratti Non anestetizzati con un sistema di raccolta di sangue sotto vuoto

Blood can be collected from rats in a number of sampling locations. For instance, the tail vein is a superior location for blood sampling. However, the ...

Subclavian Vein Puncture As an Alternative Method of Blood Sample Collection in Rats

Blood collection with enough blood volume is essential in animal experiments. Blood collection from the tail vein of rats is popular and less stressful compared to other more aggressive methods such as retro-orbital plexus sample collection. However, this blood collection method is sometimes limited by an unsatisfactory success rate. Here, we introduce a method for blood collection through the subclavian vein puncture. The subclavian vein is located just under the clavicle and this vein is large enough to fulfill the volume requirements of blood collection. Our results show that this method is safe and applicable for blood collection sampling with the required blood volume. Blood collection through the subclavian vein puncture could serve as an alternative blood collection method in case of failed tail vein blood sampling in rats.

Here, we present a protocol to collect blood samples from the rat subclavian vein.

Puntura della vena succlavia come metodo alternativo di raccolta del campione di sangue in ratti

Blood collection with enough blood volume is essential in animal experiments. Blood collection from the tail vein of rats is popular and less stressful ...