TGK riconosce la Scuola Internazionale di Dottorato in Scienza e Ingegneria (IGGSE) della Technische Universität München per il loro sostegno finanziario. HK riconosce il Centro per la Proteina Integrated Science Monaco di Baviera (CIPSM) per il loro sostegno.

Nota: Tutti i reagenti e solventi sono stati ottenuti da fornitori commerciali e sono stati utilizzati senza ulteriore purificazione. Attenzione: Si prega di consultare tutte le schede di sicurezza pertinenti (MSDS) prima dell&#39;uso. Utilizzare tutti i dispositivi di sicurezza appropriata quando si esegue sintesi chimiche (ad esempio, cappa aspirante, occhiali, guanti, camici, pantaloni full-length, e scarpe chiuse). 1. Sintesi dei precursori Guanidinylation <ol><li> specie alchilati <ol><li> specie denaturato <ol><li> Sciogliere 1,0 g di N, N &#39;-di-Boc-1H-pirazolo-1-carboxamidine (3,2 mmol, 1 eq.) E 1,0 g di trifenilfosfina (PPh 3, 3,8 mmoli, 1,2 eq.) In 10 mL di secca tetraidrofurano (THF) in 50 mL pallone a fondo tondo in atmosfera inerte con un setto di gomma a temperatura ambiente (RT). Aggiungere 194 ml di metanolo secco utilizzando una siringa (4,8 mmoli, 1,5 eq.) E let si mescolare a temperatura ambiente. </li><li> Separatamente, preparare una soluzione con 747 ml di diisopropil azodicarbossilato (DIAD, 3,8 mmoli, 1,2 eq.) In 2 mL di THF anidro in una piccola fiala di vetro. In agitazione, aggiungere la soluzione di DIAD in THF a gocce alla soluzione di N, N &#39;-di-Boc-1H-pirazolo-1-carboxamidine, PPh 3, e metanolo usando una siringa (oltre 15 min). Lasciate che la soluzione di agitazione per 2 ore a temperatura ambiente. </li><li> Rimuovere il solvente sotto pressione ridotta in evaporatore rotante e sciogliere il prodotto grezzo in 1 mL di diclorometano (DCM). Caricare un flash su colonna (2,5 cm x 20 cm) con 100 g di silice 10% acetato di etile (EtOAc) in una soluzione pentano. Caricare il prodotto grezzo disciolto nella colonna e aggiungere il solvente sotto pressione (1,5 bar). </li><li> Raccogliere le frazioni (sistema solvente: isocratico 10% EtOAc in pentano), identificare il punto composto desiderato cromatografia su strato sottile (TLC), e raccoglierlo (R f = 0,4, EtOAc / pentano 1: 9, UV). Unire il desideratofrazioni ed evaporare il solvente sotto pressione ridotta utilizzando un evaporatore rotante per ottenere 0,85 g del composto del titolo come un olio viscoso giallo (2,6 mmol, 81% di resa). Conservare il composto ceduto a temperatura ambiente per un ulteriore uso. </li></ol></li><li> Specie esilammina modificati <ol><li> Sciogliere 1,0 g di N, N &#39;-di-BOC-1H-pirazolo-1-carboxamidine (3,2 mmoli, 1,0 eq.), 0,9 g di Dde-6-aminohexanol (3,8 mmoli, 1,2 eq.), E 1,0 g di PPh 3 (3,8 mmoli, 1,2 eq.) in 10 mL di THF anidro in un pallone da 50 ml a fondo tondo in atmosfera inerte con un setto di gomma a RT. </li><li> Separatamente, preparare una soluzione con 747 ml di DIAD (3,8 mmoli, 1,2 eq.) In 2 mL di THF anidro in una piccola fiala di vetro. In agitazione, aggiungere la soluzione di DIAD in THF a gocce alla soluzione di N, N &#39;-di-Boc-1H-pirazolo-1-carboxamidine, PPh 3 e Dde-6-aminohexanol utilizzando una siringa (oltre 15 min) . Lasciate che la soluzione di agitazione per 2 ore a temperatura ambiente. </li><li>Rimuovere il solvente sotto pressione ridotta in evaporatore rotante e prendere il prodotto grezzo in 1 mL di DCM. Caricare un flash su colonna (2,5 cm x 20 cm) con 100 g di silice in una soluzione di pentano / EtOAc (2: 1). Applicare il prodotto grezzo disciolto in colonna ed aggiungere solvente a pressione (1,5 bar). </li><li> Raccogliere le frazioni (sistema solvente: isocratica 2: 1 pentano / EtOAc), identificare le frazioni desiderati con TLC, e raccoglierli (R f = 0,66, 2: 1 pentano / EtOAc, UV). Combinare le frazioni desiderate ed evaporare il solvente sotto pressione ridotta utilizzando un evaporatore rotante per ottenere 1,6 g del composto del titolo come un olio viscoso giallo (2,8 mmol, 88% di resa). Conservare il composto ceduto a temperatura ambiente per un ulteriore uso. </li></ol></li></ol></li><li> Specie acilati (2 fasi di reazione) <ol><li> Sciogliere 1.4 g di S -methylisothiuronium emisolfato (10 mmol, 1,0 eq.) E 2,2 g di di (terz-butil) dicarbonato (10 mmol, 1,0 eq.) In una vigorosamente agitareanello soluzione bifasica di DCM / sat. aq. NaHCO 3 e lasciare mescolare per 24 ore a temperatura ambiente. </li><li> Separare gli strati in un imbuto separatore ed estrarre la fase acquosa tre volte con DCM. Combinare le fasi organiche, asciugarle con Na 2 SO 4, e rimuovere il solvente sotto pressione ridotta utilizzando un evaporatore rotante. Prendere il prodotto grezzo in 1 ml di esano. </li><li> Caricare un flash su colonna (2,5 cm x 20 cm) con 100 g di silice in una soluzione di 4: 1 esano / EtOAc. Caricare il prodotto grezzo disciolto nella colonna. Aggiungere solvente a pressione. Identificare le frazioni desiderate con TLC (sistema solvente: 4: 1 esano isocratica / EtOAc (rilevamento UV: 254 nm), e alla loro raccolta (R f = 0,30). </li><li> Combinare le frazioni desiderate ed evaporare il solvente sotto pressione ridotta utilizzando un evaporatore rotante per ottenere 1,1 g del composto del titolo come un olio viscoso giallo (5,8 mmol, 58% di resa). Conservare il reagente, N - (terz -butoxycarbonyl) - S -methylisothiourea, a TA per ulteriore uso. </li><li> Sciogliere 250 mg di N - (terz -butoxycarbonyl) - S -methylisothiourea (1,3 mmoli, 1,0 eq.) In 10 mL di secca N, N-dimetilformammide (DMF) in un pallone a fondo tondo da 50 ml in atmosfera inerte a RT. Aggiungere 440 ml di N, N-diisopropiletilammina (DIPEA) (2,6 mmol, 2 eq.) Utilizzando una siringa. Mentre mescolando, aggiungere 245 ml di Ac 2 O (5,2 mmol, 4,0 eq.) Goccia a goccia con una siringa e lasciare mescolare per 1 ora a temperatura ambiente. </li><li> Aggiungere un eccesso di metanolo (2 mL) alla miscela con una siringa e lasciare mescolare per 15 minuti a temperatura ambiente. Rimuovere il solvente sotto pressione ridotta utilizzando un evaporatore rotante. Prendere il prodotto grezzo in 1 ml di DCM. </li><li> Caricare un flash su colonna (2,5 cm x 20 cm) con 60 g di silice in una soluzione di 3: 1 esano / EtOAc 3: 1. Applicare il prodotto grezzo disciolto alla colonna. Aggiungere solvente (3: 1 esano / EtOAc) e pressione (1,5 bar). Identificare le frazioni desiderate con TLC (3: 1 esano / EtOAc, UV 220 nm), e colli (R f = 0,62) Lect. </li><li> Combinare le frazioni desiderate ed evaporare il solvente sotto pressione ridotta utilizzando un evaporatore rotante per ottenere 210 mg del composto del titolo come un solido bianco (0,9 mmol, 70% di resa). Conservare il composto a temperatura ambiente per un ulteriore uso. </li></ol></li></ol> 2. Sintesi del peptide ciclico Precursori <ol><li> Carico e tappatura resina TCP <ol><li> Aggiungere 1,00 g di resina 2-chlortriyl cloruro (CTC) (0,9 mmol / g) e 320 mg di Fmoc-Gly-OH (1,2 eq.) In una plastica siringa da 20 mL con una fritta. Preparare una soluzione di 313 ml di DIPEA (2 eq.) In 5 mL di DCM secca e aggiungerlo alla siringa. Lasciandolo ruotare per 1 h a temperatura ambiente usando un corpo rotante. </li><li> Nel frattempo, preparare una soluzione di 2-mL di 5: 1 metanolo / DIPEA (v / v; soluzione capping). Aggiungere la soluzione di tappatura alla siringa e lasciar ruotare per altri 15 min. Lavare la resina con DCM (5x) e DMF (3x). </li></ol></li><li> On-resina Fmoc deprotezione<ol><li> Trattare la resina Fmoc-bound-Gly con 20% piperidina in DMF per 10 minuti e poi per 5 min. Lavare la resina con DMF (3x). </li></ol></li><li> On-resina accoppiamento di Fmoc-Orn (Dde) -OH <ol><li> Aggiungere 934 mg di Fmoc-L-Orn (Dde) -OH (2 eq.), 684 mg di 1- [bis (dimetilammino) metilen] -1H -1,2,3-triazolo [4,5-b] piridinio 3-ossido esafluorofosfato (HATU) (2 eq.), e 245 mg di 1-idrossi-7-azabenzotriazolo (HOAt) (2 eq.) ad una piccola fiala di vetro e sciogliere in 5 ml di DMF. Aggiungere 814 ml di DIPEA. </li><li> Aggiungere questa soluzione alla Fmoc-deprotetto, lavato, e resina legata Gly e lasciandolo ruotare per 1 h. Lavare la resina con DMF (3x). </li></ol></li><li> On-resina Fmoc deprotezione <ol><li> Trattare la resina Fmoc-bound-Orn (Dde) -Gly con 20% piperidina in DMF per 10 minuti e poi per 5 min. Lavare la resina con DMF (3x). </li></ol></li><li> Accoppiamento in resina Fmoc-Val-OH <ol><li> Aggiungere 610 mg di Fmoc-Val-OH (2 eq.), 684 mg di HATU (2 eq.), E 245 mg di HOAt (2 eq.) Di una piccola fiala di vetro e sciogliere in 5 ml di DMF. Aggiungere 814 ml di DIPEA. </li><li> Aggiungere questa soluzione alla Fmoc-deprotetto, lavato, e resina-bound Orn (Dde) -Gly e farlo ruotare per 1 h. </li></ol></li><li> On-resina Fmoc deprotezione <ol><li> Trattare la resina Fmoc-bound-Val-Orn (Dde) -Gly con 20% piperidina in DMF per 10 minuti e poi per 5 min. Lavare la resina con DMF (3x). </li></ol></li><li> On-resina N- metilazione <ol><li> Lavare la resina con DCM (3x). Sciogliere 887 mg di 2-nitrobenzenesulfonylchloride (o NBS-Cl, 4 eq.) In DCM e aggiungere 1,2 ml di 2,4,6-collidina (10 eq.). </li><li> Aggiungere la soluzione al resinopeptide-bound e lasciarlo incubare per 20 minuti a temperatura ambiente. </li><li> Lavare la resina con CH 2 Cl 2 (3x) e THF (5x). Preparare una soluzione con 1,18 g di PPh 3 (5 eq.) E 365 ml di metanolo in THF. Aggiungere questa soluzione allasiringa. </li><li> Preparare una soluzione con 883 ml di DIAD in 2 ml di THF e aggiungerlo alla siringa. Lasciate incubare per 15 min. Lavare la resina con THF (5x) e DMF (5x). </li></ol></li><li> o -Ns deprotezione <ol><li> Preparare una soluzione con 570 ml di mercaptoetanolo (10,0 eq.) E 672 ml di diazabicycloundecen (DBU) in 2 mL di DMF. Aggiungere questa soluzione alla siringa e lasciarlo incubare per 5 min. </li><li> Ripetere la fase di deprotezione e quindi lavare la resina con DMF (5x). </li></ol></li><li> Accoppiamento in resina Fmoc- d-Phe-OH <ol><li> Aggiungere 697 mg di Fmoc-D-Phe-OH (2 eq.), 684 mg di HATU (2 eq.), E 245 mg di HOAt (2 eq.) Di una piccola fiala di vetro e sciogliere in 5 mL di DMF . Aggiungere 814 ml di DIPEA. </li><li> Aggiungere questa soluzione al peptide Fmoc-deprotetto, lavato, e resina-bound e lasciandolo ruotare per 1 h. </li></ol></li><li> On-resina Fmoc deprotezione <ol><li> Trattare la resina-bound peptide con 20% piperidina in DMF per 10 minuti e poi per 5 min. Lavare la resina con DMF (3x). </li></ol></li><li> Accoppiamento in resina Fmoc-Asp (Ot Bu) -OH <ol><li> Aggiungere 741 mg di Fmoc- Asp (Ot Bu) -OH (2 eq.), 684 mg di HATU (2 eq.), E 245 mg di HOAt (2 eq.) Di una piccola fiala di vetro e sciogliere in 5 ml di DMF. Aggiungere 814 ml di DIPEA. </li><li> Aggiungere questa soluzione al peptide Fmoc-deprotetto, lavato, e resina-bound e lasciandolo ruotare per 1 h. </li></ol></li><li> Clivaggio del peptide lineare dalla resina <ol><li> Lavare la resina con DCM (3x) e successivamente preparare 10 mL di una soluzione di esafluoroisopropanolo (HFIP) in DCM (1: 4; v / v). </li><li> Aggiungere la soluzione alla resina e lasciar ruotare per 15 min. Raccogliere la soluzione in un pallone a fondo tondo. Ripetere la fenditura e si evapora il solvente usando un evaporatore rotante. </li></ol></li><li> Ciclizzazione del peptide lineare <ol><li> dissolve 384 mg di NaHCO 3 (5.0 eq.) e 582 ml di difenilfosforil azide (DPPA) (3,0 eq.) in 50 mL di DMF e aggiungere al prodotto grezzo. Lasciarlo agitazione per una notte o fino a quando non peptide lineare è osservata con ESI-MS (10 h) 17. </li><li> Sotto pressione ridotta, ridurre il solvente a piccolo volume usando un evaporatore rotante. Preparare una soluzione acquosa satura di NaCl (salamoia). Usando una pipetta Pasteur, aggiungere goccia a goccia peptide ciclizzato a 40 mL di soluzione acquosa satura di NaCl in un tubo da centrifuga. </li><li> Centrifugare la sospensione (5.000 xg, 5 min) e lavare il precipitato con acqua grado HPLC (2x). Liofilizzato il prodotto. </li></ol></li></ol> 3. Guanidinylation e deprotezione in Solution <ol><li> Guanidinylation con i precursori su misura <ol><li> Sciogliere una piccola quantità (ad esempio, 25 mg) del peptide ciclico ortogonalmente deprotetto in un piccolo volume di DMF (ad esempio, 2 mL). Aggiungere 2 eq. del precursore guanidinylation e 2 eq. di DIPEA alla soluzione e lasciare mescolare per 2 ore a RT. </li><li> Monitorare l&#39;andamento della reazione con HPLC-MS. Dopo che la reazione è completa, rimuovere il solvente, ri-sciogliere il peptide ciclico guanidinylated in acetonitrile, ed eseguire la purificazione HPLC semipreparativa 16. </li></ol></li><li> Rimozione dei gruppi acido catena laterale labile proteggere <ol><li> Preparare 2 mL di una soluzione contenente acido trifluoroacetico (TFA), acqua, e triisopropilsilano (TIPS) (95 / 2,5 / 2,5; v / v / v). Aggiungere questa soluzione al prodotto purificato in una piccola fiala di vetro e lasciate agitare a temperatura ambiente per almeno 1 ora. Osservare la deprotezione completa di ESI-MS 17. </li><li> Evaporare il solvente sotto pressione ridotta a piccolo volume. Preparare etere ghiacciata e aggiungere 10 ml in una provetta da centrifuga da 50 mL. Precipitare il peptide deprotetto in etere ghiacciata con una pipetta Pasteur aggiungendologoccia a goccia. Centrifugare la sospensione (5.000 xg, 5 min) per ottenere un pellet. </li><li> Lavare il precipitato con etere ghiacciata e centrifugare esso (5.000 xg, 5 min, 2x). Sciogliere il prodotto in 2 ml di acqua per HPLC e purificarlo con HPLC semipreparativa 16. </li></ol></li></ol> 4. Dati analitici e parametri per la purificazione <ol><li> Analytical HPLC-ESI-MS <ol><li> Eseguire analisi HPLC-ESI-MS con uno spettrometro di massa LCQ usando una colonna C18 (dimensione 12-nm pori, dimensione delle particelle di 3 micron 125 mm x 2,1 millimetri) o una colonna C8 (20-nm dimensione dei pori, 5 micron particelle dimensioni, 250 mm × 2,1 millimetri), con H 2 O (0,1% v / v di acido formico) / acetonitrile (0,1% v / v di acido formico) come eluenti. </li></ol></li><li> HPLC semi-preparativa <ol><li> Eseguire HPLC semi-preparativa utilizzando uno strumento HPLC preparativa con un ODS-A colonna (20 x 250 mm, 5 um), una velocità di flusso di 8 ml / min, e gradienti linearidi H 2 O (0,1% v / v TFA) e acetonitrile (0,1% v / v TFA). </li></ol></li></ol>

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Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Il precursore per guanidinylation è un ortogonalmente deprotetto derivato peptide ciclico, (c (OrnD (Ot Bu) Gf (N Me) V)), che è sintetizzato da un protocollo Fmoc standard sintesi peptidica in fase solida (SPSS). Ornitina è stato utilizzato come derivato ortogonalmente protetto, (Fmoc-Orn (Dde) -OH), che può essere deprotetto con idrazina in DMF dopo la ciclizzazione del peptide ponteggio. Il precursore peptide viene purificato mediante precipitazione del composto e dalla successiva liofi...

Tra i più abbondanti gruppi farmacoforici a ligandi naturali è il gruppo guanidinico, che è coinvolto in molteplici interazioni 1, 2. Ad esempio, serve come un potenziale quadruplice donatore di idrogeno nelle interazioni legami idrogeno e si occupa di interazioni elettrostatiche, come ponti salini o interazioni catione-π. In chimica farmaceutica, questo gruppo si trova spesso in droghe e farmaci candidati 4, anche se molto spesso mimetici guanidina 5, 6. La ragione per lo sviluppo di mimetici guanidina è la rimozione del gruppo guanidinico caricato positivamente onnipresente, nonché la regolazione della lipofilia del ligando. In ligandi peptidici, l&#39;unico aminoacido contenente gruppi guanidina è arginina, che è quindi spesso trovato nella regione bioattiva di ligandi peptidici. Un prEsempio ominent per una famiglia ligando arginina contenente la sottofamiglia delle integrine RGD vincolanti. In generale, le integrine sono una classe di recettori di adesione cellulare che riprendono funzioni importanti in tutti gli organismi superiori. Alcune di queste funzioni implicano l&#39;adesione cellulare, la migrazione e la sopravvivenza cellulare. Pertanto, esse sono anche coinvolti in indicazioni patologiche, come il cancro e la fibrosi. Le integrine sono proteine ​​transmembrana eterodimeriche costituiti da un α- e β-subunità che formano 24 attualmente noti sottotipi integrine; 8 di loro riconoscono la sequenza tripeptide Arg-Gly-Asp (RGD =) nei loro ligandi 7. La regione di legame è situato in corrispondenza dell&#39;interfaccia tra questi due sottotipi nella parte extracellulare, il cosiddetto gruppo testa integrina 8. RGD è riconosciuto da due interazioni comuni: regione sito adesione metallo-ione-dipendente (MIDAS), che si trova nella subunità beta e che lega l&#39;acido carbossilico nei leganti (cha lateraliin di Asp); ed il gruppo guanidinico nei ligandi, che si trova nella subunità alfa. La maggior parte dei sottotipi integrine sono promiscui e condividere almeno una parte del loro naturale matrice extracellulare (ECM) ligandi 9. Così, per lo sviluppo di ligandi delle integrine artificiali, l&#39;obiettivo principale è, oltre ad una elevata affinità di legame, la selettività sottotipo. Recentemente, siamo stati in grado di svelare un elemento chiave per la generazione di ligandi selettivi del sottotipo: il gruppo guanidinico. Attraverso modifiche distinte, ligandi biselective per la αv- e α5 contenenti i sottotipi di integrina possono essere trasformati in composti selettivi per semplici modifiche sul gruppo guanidinico, che può discriminare la diversa α-subunità 10. Nella tasca del αv, il gruppo guanidinico interagisce side-on tramite un ponte salino bidentato con Asp218 11, 12. Questa interazione cun anche essere osservata in α5β1 (qui, con Asp227 in α5), ma in aggiunta, un fine-on interazione del gruppo guanidinico con un residuo Gln (Gln221) si osserva lì 13. Così, abbiamo modificato il gruppo guanidinico in due modi opposti: in un caso, bloccando il lato-sull&#39;interazione con la metilazione del δ N del gruppo guanidinico, e nell&#39;altro caso, con la metilazione del ω guanidina N, bloccando l&#39;interazione dall&#39;estremità. Sorprendentemente, questa piccola modifica ha portato ad uno spostamento completo selettività nei ligandi. Oltre alla alchilazione, un nuovo metodo di funzionalizzazione è stato introdotto in questa pubblicazione. Il metodo classico funzionalizzazione per questo tipo di legante pentapeptidic è attraverso la coniugazione catena laterale di un amminoacido non coinvolti nel legame (ad esempio, K c (RGDfK)) 14, 15. Qui,mostriamo che funzionalizzazione è possibile modificando la guanidina - che è cruciale per il legame - con un acile o linker alchilati. La carica positiva che è essenziale per il legame viene mantenuto e modelli suggeriscono che i punti catena lunga fuori della tasca di legame, fornendo così una possibilità ideale per il fissaggio di ulteriori linker e unità etichettatura (ad esempio, un marcatore fluorescente o un chelante per molecolare di imaging). In questo lavoro, ci concentriamo sui gradini di preparazione per la modifica del gruppo guanidinico in ligandi arginina contenenti. Ciò comporta la sintesi di specie -methylated N ω, nonché guanidine con unità linker più lunghi. Le varie modifiche comprendono acile e gruppi alchilici.

<table><tbody><tr><td>&lt;em&gt;N,N&amp;prime;&lt;/em&gt;-Di-Boc-1H-pyrazole-1-carboxamidine, 98%&amp;nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>434167&amp;nbsp;ALDRICH</td><td></td></tr><tr><td>Triphenylphosphine, 99%</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T84409&amp;nbsp;SIGMA-ALDRICH</td><td></td></tr><tr><td>Tetrahydrofuran, &gt;99.5%</td><td>Carl Roth</td><td>4745</td><td></td></tr><tr><td>Tetrahydrofuran anhydrous, 99.8%</td><td>Carl Roth</td><td>5182</td><td></td></tr><tr><td>Methanol anhydrous, 99.8%</td><td>Sigma Aldrich</td><td>322415&amp;nbsp;SIGMA-ALDRICH</td><td></td></tr><tr><td>Diisopropyl azodicarboxylate, 98%</td><td>Sigma Aldrich</td><td>225541&amp;nbsp;ALDRICH</td><td></td></tr><tr><td>Dichlormethan, for synthesis, 99.5%</td><td>Carl Roth</td><td>8424</td><td></td></tr><tr><td>Silica gel for flash chromtaography</td><td>Sigma Aldrich</td><td>60738&amp;nbsp;SIGMA-ALDRICH</td><td></td></tr><tr><td>n-Pentane, 99%</td><td>Carl Roth</td><td>8720</td><td></td></tr><tr><td>n-Hexane, 99%</td><td>Carl Roth</td><td>CP47</td><td></td></tr><tr><td>Ethylacetate, 99.5%</td><td>Carl Roth</td><td>7338</td><td></td></tr><tr><td>Aminohexanol, 95%</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A56353&amp;nbsp;ALDRICH</td><td></td></tr><tr><td>&lt;em&gt;S&lt;/em&gt;-Methylisothiourea hemisulfate, 98%</td><td>Sigma Aldrich</td><td>M84445 ALDRICH</td><td></td></tr><tr><td>Di-&lt;em&gt;tert&lt;/em&gt;-butyl dicarbonate, 99%</td><td>Sigma Aldrich</td><td>205249&amp;nbsp;ALDRICH</td><td></td></tr><tr><td>&lt;em&gt;N,N&lt;/em&gt;-Dimethylformamid, 99.8%</td><td>Carl Roth</td><td>A529</td><td></td></tr><tr><td>&lt;em&gt;N,N&lt;/em&gt;-Diisopropylethylamin, 99.5%</td><td>Carl Roth</td><td>2474</td><td></td></tr><tr><td>Acetic anhydrid, 99%</td><td>Carl Roth</td><td>4483</td><td></td></tr><tr><td>Chlortrityl resin</td><td>Carbolution</td><td>CC11006</td><td></td></tr><tr><td>Fmoc-Gly-OH, 98%</td><td>Carbolution</td><td>CC05014</td><td></td></tr><tr><td>Piperidin, 99%</td><td>Sigma Aldrich</td><td>104094&amp;nbsp;SIGMA-ALDRICH</td><td></td></tr><tr><td>Fmoc-Orn(Dde)-OH</td><td>Iris-Biotech</td><td>FAA1502</td><td></td></tr><tr><td>HATU, 99%</td><td>Carbolution</td><td>CC01011</td><td></td></tr><tr><td>HOAt, 99%</td><td>Carbolution</td><td>CC01004</td><td></td></tr><tr><td>Fmoc-Val-OH</td><td>Carbolution</td><td>CC05028</td><td></td></tr><tr><td>2-Nitrobenzenesulfonyl chloride, 97%</td><td>Sigma Aldrich</td><td>N11507&amp;nbsp;ALDRICH</td><td></td></tr><tr><td>2,4,6-Collidine, 99%</td><td>Sigma Aldrich</td><td>27690&amp;nbsp;SIGMA-ALDRICH</td><td></td></tr><tr><td>Mercaptoethanol, 99%&amp;nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>M6250&amp;nbsp;ALDRICH</td><td></td></tr><tr><td>Diazabicycloundecen, 98%</td><td>Sigma Aldrich</td><td>139009&amp;nbsp;ALDRICH</td><td></td></tr><tr><td>Fmoc-D-Phe-OH, 98%</td><td>Sigma Aldrich</td><td>47378&amp;nbsp;ALDRICH</td><td></td></tr><tr><td>Fmoc-Asp(OtBu)-OH, 98%</td><td>Carbolution</td><td>CC05008</td><td></td></tr><tr><td>Hexafluoroisopropanol</td><td>Carbolution</td><td>CC03056</td><td></td></tr><tr><td>Diphenylphosphoryl azide, 97%</td><td>Sigma Aldrich</td><td>178756&amp;nbsp;ALDRICH</td><td></td></tr><tr><td>TFA, 99.9%</td><td>Carl Roth</td><td>P088</td><td></td></tr><tr><td>Triisopropylsilan, 98%</td><td>Sigma Aldrich</td><td>233781&amp;nbsp;ALDRICH</td><td></td></tr><tr><td>Acetonitrile, HPLC grade</td><td>Carl Roth</td><td>HN44</td><td></td></tr></tbody></table>

modification and functionalization of the guanidine group by tailor-made precursors

Il gruppo guanidina è uno dei più importanti gruppi farmacoforici in chimica farmaceutica. L&#39;unico aminoacido che trasporta un gruppo di guanidina è arginina. In questo articolo, un metodo semplice per la modifica del gruppo guanidinico di ligandi peptidici è fornita, con un esempio di ligandi delle integrine RGD vincolante. È stato recentemente dimostrato che la modifica distinta del gruppo guanidinico in questi ligandi consente la modulazione selettiva del sottotipo (ad esempio, tra i sottotipi αv e α5). Inoltre, è stata dimostrata una strategia precedentemente sconosciuta per la funzionalizzazione attraverso il gruppo guanidinico, e l&#39;approccio sintetico è rivisto in questo documento. Le modifiche qui descritti comportano terminale (N ω) gruppi guanidina alchilati e acetilati. Per la sintesi, molecole precursori misura sono sintetizzati, che vengono quindi sottoposto ad una reazione con un&#39;ammina ortogonalmente deprotetto per trasferire il pregruppo guanidina -Modified. Per la sintesi di guanidine alchilati, precursori basati su N, N &#39;-di-Boc-1H-pirazolo-1-carboxamidine vengono utilizzati per sintetizzare composti acilati, il precursore di scelta essendo un derivato acilato di corrispondentemente N -Boc- S - metilisotiourea, che può essere ottenuto in reazioni di una o due fasi.

Il peptide precursore ciclico è stato sintetizzato come peptide lineare, ciclizzato e ortogonalmente Dde-deprotetto. Dopo la precipitazione, la purezza del composto è stato analizzato con HPLC-MS (Figura 1). Per monitorare l&#39;avanzamento della reazione, l&#39;analisi HPLC è stata eseguita dopo il tempo di reazione di 2 ore (Figura 2). Per i residui più grandi sul gruppo guanidinico, il ...

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Modification and Functionalization of the Guanidine Group by Tailor-made Precursors

Un protocollo per la sintesi di guanidine alchil-modificato basate sull&#39;uso dei precursori corrispondenti è presentato.

La modifica e funzionalizzazione del gruppo Guanidine da precursori su misura

The guanidine group is one of the most important pharmacophoric groups in medicinal chemistry. The only amino acid carrying a guanidine group is arginine. ...

modification-functionalization-guanidine-group-tailor-made

Research

JoVE Journal

Biochemistry

10.6K Views.  Technische Universität München.  Un protocollo per la sintesi di guanidine alchil-modificato basate sull'uso dei precursori corrispondenti è presentato. 

Video: Modification and Functionalization of the Guanidine Group by Tailor-made Precursors

Microwave-assisted Functionalization of Poly(ethylene glycol) and On-resin Peptides for Use in Chain Polymerizations and Hydrogel Formation

One of the main benefits to using poly(ethylene glycol) (PEG) macromers in hydrogel formation is synthetic versatility. The ability to draw from a large variety of PEG molecular weights and configurations (arm number, arm length, and branching pattern) affords researchers tight control over resulting hydrogel structures and properties, including Young&#8217;s modulus and mesh size. This video will illustrate a rapid, efficient, solvent-free, microwave-assisted method to methacrylate PEG precursors into poly(ethylene glycol) dimethacrylate (PEGDM). This synthetic method provides much-needed starting materials for applications in drug delivery and regenerative medicine. The demonstrated method is superior to traditional methacrylation methods as it is significantly faster and simpler, as well as more economical and environmentally friendly, using smaller amounts of reagents and solvents. We will also demonstrate an adaptation of this technique for on-resin methacrylamide functionalization of peptides. This on-resin method allows the N-terminus of peptides to be functionalized with methacrylamide groups prior to deprotection and cleavage from resin. This allows for selective addition of methacrylamide groups to the N-termini of the peptides while amino acids with reactive side groups (e.g.&#160;primary amine of lysine, primary alcohol of serine, secondary alcohols of threonine, and phenol of tyrosine) remain protected, preventing functionalization at multiple sites. This article will detail common analytical methods (proton Nuclear Magnetic Resonance spectroscopy (;H-NMR) and Matrix Assisted Laser Desorption Ionization Time of Flight mass spectrometry (MALDI-ToF)) to assess the efficiency of the functionalizations. Common pitfalls and suggested troubleshooting methods will be addressed, as will modifications of the technique which can be used to further tune macromer functionality and resulting hydrogel physical and chemical properties. Use of synthesized products for the formation of hydrogels for drug delivery and cell-material interaction studies will be demonstrated, with particular attention paid to modifying hydrogel composition to affect mesh size, controlling hydrogel stiffness and drug release.

Microwave-assisted Functionalization of Polyethylene glycol and On-resin Peptides for Use in Chain Polymerizations and Hydrogel Formation

This video will illustrate a rapid, efficient method to methacrylate poly(ethylene glycol), enabling chain polymerizations and hydrogel synthesis. It will demonstrate how to similarly introduce methacrylamide functionalities into peptides, detail common analytical methods to assess functionalization efficiency, provide suggestions for troubleshooting and advanced modifications, and demonstrate typical hydrogel characterization techniques.

Forno a microonde assistita Funzionalizzazione di poli (etilene glicole) e On-resina Peptidi per l&#39;uso a polimerizzazione a catena ed idrogel Formazione

One of the main benefits to using poly(ethylene glycol) (PEG) macromers in hydrogel formation is synthetic versatility. The ability to draw from a large ...

Ricerca

Chimica

Nucleoside Triphosphates - From Synthesis to Biochemical Characterization

The traditional strategy for the introduction of chemical functionalities is the use of solid-phase synthesis by appending suitably modified phosphoramidite precursors to the nascent chain. However, the conditions used during the synthesis and the restriction to rather short sequences hamper the applicability of this methodology. On the other hand, modified nucleoside triphosphates are activated building blocks that have been employed for the mild introduction of numerous functional groups into nucleic acids, a strategy that paves the way for the use of modified nucleic acids in a wide-ranging palette of practical applications such as functional tagging and generation of ribozymes and DNAzymes. One of the major challenges resides in the intricacy of the methodology leading to the isolation and characterization of these nucleoside analogues.
	
	In this video article, we present a detailed protocol for the synthesis of these modified analogues using phosphorous(III)-based reagents. In addition, the procedure for their biochemical characterization is divulged, with a special emphasis on primer extension reactions and TdT tailing polymerization. This detailed protocol will be of use for the crafting of modified dNTPs and their further use in chemical biology.

The protocol described herein aims to explain and abridge the numerous obstacles in the way of the intricate route leading to modified nucleoside triphosphates. Consequently, this protocol facilitates both the synthesis of these activated building-blocks and their availability for practical applications.

Nucleosidi trifosfati - Dalla sintesi di biochimica Caratterizzazione

The  traditional strategy for the introduction of chemical functionalities is the  use of solid-phase synthesis by appending suitably modified ...

High-throughput Synthesis of Carbohydrates and Functionalization of Polyanhydride Nanoparticles

Transdisciplinary approaches involving areas such as material design, nanotechnology, chemistry, and immunology have to be utilized to rationally design efficacious vaccines carriers. Nanoparticle-based platforms can prolong the persistence of vaccine antigens, which could improve vaccine immunogenicity1. Several biodegradable polymers have been studied as vaccine delivery vehicles1; in particular, polyanhydride particles have demonstrated the ability to provide sustained release of stable protein antigens and to activate antigen presenting cells and modulate immune responses2-12.
The molecular design of these vaccine carriers needs to integrate the rational selection of polymer properties as well as the incorporation of appropriate targeting agents. High throughput automated fabrication of targeting ligands and functionalized particles is a powerful tool that will enhance the ability to study a wide range of properties and will lead to the design of reproducible vaccine delivery devices.
The addition of targeting ligands capable of being recognized by specific receptors on immune cells has been shown to modulate and tailor immune responses10,11,13 C-type lectin receptors (CLRs) are pattern recognition receptors (PRRs) that recognize carbohydrates present on the surface of pathogens. The stimulation of immune cells via CLRs allows for enhanced internalization of antigen and subsequent presentation for further T cell activation14,15. Therefore, carbohydrate molecules play an important role in the study of immune responses; however, the use of these biomolecules often suffers from the lack of availability of structurally well-defined and pure carbohydrates. An automation platform based on iterative solution-phase reactions can enable rapid and controlled synthesis of these synthetically challenging molecules using significantly lower building block quantities than traditional solid-phase methods16,17.
Herein we report a protocol for the automated solution-phase synthesis of oligosaccharides such as mannose-based targeting ligands with fluorous solid-phase extraction for intermediate purification. After development of automated methods to make the carbohydrate-based targeting agent, we describe methods for their attachment on the surface of polyanhydride nanoparticles employing an automated robotic set up operated by LabVIEW as previously described10. Surface functionalization with carbohydrates has shown efficacy in targeting CLRs10,11 and increasing the throughput of the fabrication method to unearth the complexities associated with a multi-parametric system will be of great value (Figure 1a).

In this article, a high throughput method is presented for the synthesis of oligosaccharides and their attachment to the surface of polyanhydride nanoparticles for further use in targeting specific receptors on antigen presenting cells.

High-throughput sintesi dei carboidrati e funzionalizzazione di nanoparticelle polianidride

Transdisciplinary approaches involving areas such as material design, nanotechnology, chemistry, and immunology have to be utilized to rationally design ...

Bioingegneria

A Direct, Early Stage Guanidinylation Protocol for the Synthesis of Complex Aminoguanidine-containing Natural Products

The guanidine functional group, displayed most prominently in the amino acid arginine, one of the fundamental building blocks of life, is an important structural element found in many complex natural products and pharmaceuticals. Owing to the continual discovery of new guanidine-containing natural products and designed small molecules, rapid and efficient guanidinylation methods are of keen interest to synthetic and medicinal organic chemists. Because the nucleophilicity and basicity of guanidines can affect subsequent chemical transformations, traditional, indirect guanidinylation is typically pursued. Indirect methods commonly employ multiple protection steps involving a latent amine precursor, such as an azide, phthalimide, or carbamate. By circumventing these circuitous methods and employing a direct guanidinylation reaction early in the synthetic sequence, it was possible to forge the linear terminal guanidine containing backbone of clavatadine A to realize a short and streamlined synthesis of this potent factor XIa inhibitor. In practice, guanidine hydrochloride is elaborated with a carefully constructed protecting array that is optimized to survive the synthetic steps to come. In the preparation of clavatadine A, direct guanidinylation of a commercially available diamine eliminated two unnecessary steps from its synthesis. Coupled with the wide variety of known guanidine protecting groups, direct guanidinylation evinces a succinct and efficient practicality inherent to methods that find a home in a synthetic chemist&#39;s toolbox.

Here, we present a protocol for direct, early stage guanidinylation that enables rapid total synthesis of aminoguanidine-containing small organic molecules. An advanced synthetic intermediate used in the synthesis of a blood coagulation factor XIa inhibitor was prepared using this protocol.

Un diretto, Early Stage Guanidinylation protocollo per la sintesi di complessi Aminoguanidine contenenti prodotti naturali

The guanidine functional group, displayed most prominently in the amino acid arginine, one of the fundamental building blocks of life, is an important ...

Facile Preparation of 4-Substituted Quinazoline Derivatives

Reported in this paper is a very simple method for direct preparation of 4-substituted quinazoline derivatives from a reaction between substituted 2-aminobenzophenones and thiourea in the presence of dimethyl sulfoxide (DMSO). This is a unique complementary reaction system in which thiourea undergoes thermal decomposition to form carbodiimide and hydrogen sulfide, where the former reacts with 2-aminobenzophenone to form 4-phenylquinazolin-2(1H)-imine intermediate, whilst hydrogen sulfide reacts with DMSO to give methanethiol or other sulfur-containing molecule which then functions as a complementary reducing agent to reduce 4-phenylquinazolin-2(1H)-imine intermediate into 4-phenyl-1,2-dihydroquinazolin-2-amine. Subsequently, the elimination of ammonia from 4-phenyl-1,2-dihydroquinazolin-2-amine affords substituted quinazoline derivative. This reaction usually gives quinazoline derivative as a single product arising from 2-aminobenzophenone as monitored by GC/MS analysis, along with small amount of sulfur-containing molecules such as dimethyl disulfide, dimethyl trisulfide, etc. The reaction usually completes in 4-6 hr at 160 &#186;C in small scale but may last over 24 hr when carried out in large scale. The reaction product can be easily purified by means of washing off DMSO with water followed by column chromatography or thin layer chromatography.

A protocol for facile preparation of 4-substituted quinazoline derivatives from 2-aminobenzophenones, thiourea and dimethyl sulfoxide is presented.

Preparazione facile dei derivati ​​quinazoline 4-sostituito

Reported in this paper is a very simple method for direct preparation of 4-substituted quinazoline derivatives from a reaction between substituted ...

Chemoselective Modification of Viral Surfaces via Bioorthogonal Click Chemistry

The modification of virus particles has received a significant amount of attention for its tremendous potential for impacting gene therapy, oncolytic applications and vaccine development.1,2,3 Current approaches to modifying viral surfaces, which are mostly genetics-based, often suffer from attenuation of virus production, infectivity and cellular transduction.4,5 Using chemoselective click chemistry, we have developed a straightforward alternative approach which sidesteps these issues while remaining both highly flexible and accessible.1,2
The goal of this protocol is to demonstrate the effectiveness of using bioorthogonal click chemistry to modify the surface of adenovirus type 5 particles. This two-step process can be used both therapeutically1 or analytically,2,6 as it allows for chemoselective ligation of targeting molecules, dyes or other molecules of interest onto proteins pre-labeled with azide tags. The three major advantages of this method are that (1) metabolic labeling demonstrates little to no impact on viral fitness,1,7 (2) a wide array of effector ligands can be utilized, and (3) it is remarkably fast, reliable and easy to access.1,2,7
In the first step of this procedure, adenovirus particles are produced bearing either azidohomoalanine (Aha, a methionine surrogate) or the unnatural sugar O-linked N-azidoacetylglucosamine (O-GlcNAz), both of which contain the azide (-N3) functional group. After purification of the azide-modified virus particles, an alkyne probe containing the fluorescent TAMRA moiety is ligated in a chemoselective manner to the pre-labeled proteins or glycoproteins. Finally, an SDS-PAGE analysis is performed to demonstrate the successful ligation of the probe onto the viral capsid proteins. Aha incorporation is shown to label all viral capsid proteins (Hexon, Penton and Fiber), while O-GlcNAz incorporation results in labeling of Fiber only.
In this evolving field, multiple methods for azide-alkyne ligation have been successfully developed; however only the two we have found to be most convenient are demonstrated herein &#x2013; strain-promoted azide-alkyne cycloaddition (SPAAC) and copper-catalyzed azide-alkyne cycloaddition (CuAAC) under deoxygenated atmosphere.

Adenovirus particles are engineered to contain either the unnatural amino acid analogue azidohomoalanine or the azido sugar O-GlcNAz. The azide group of each is chemoselectively ligated via "click" chemistry reactions as a means of viral surface modification.

Modifica Chemoselective delle superfici virali tramite Chimica Click Bioorthogonal

The modification of virus particles has received a significant amount of attention for its tremendous potential for impacting gene therapy, oncolytic ...

Immunologia e infezioni

Preparation of N-(2-alkoxyvinyl)sulfonamides from N-tosyl-1,2,3-triazoles and Subsequent Conversion to Substituted Phthalans and Phenethylamines

Decomposition of N-tosyl-1,2,3-triazoles with rhodium(II) acetate dimer in the presence of alcohols forms synthetically versatile N-(2-alkoxyvinyl)sulfonamides, which react under a variety of conditions to afford useful N- and O-containing compounds. Acid-catalyzed addition of alcohols or thiols to N-(2-alkoxyvinyl)sulfonamide-containing phthalans provides access to ketals and thioketals, respectively. Selective reduction of the vinyl group in N-(2-alkoxyvinyl)sulfonamide-containing phthalans via hydrogenation yields the corresponding phthalan in good yield, whereas reduction with sodium bis(2-methoxyethoxy)aluminumhydride generates a ring-opened phenethylamine analogue. Because the N-(2-alkoxyvinyl)sulfonamide functional group is synthetically versatile, but often hydrolytically unstable, this protocol emphasizes key techniques in preparing, handling, and reacting these pivotal substrates in several useful transformations.

Preparation of N-2-alkoxyvinylsulfonamides from N-tosyl-1,2,3-triazoles and Subsequent Conversion to Substituted Phthalans and Phenethylamines

Representative experimental procedures for the synthesis of N-(2-alkoxyvinyl)sulfonamides and subsequent conversion to phthalan and phenethylamine derivatives are presented in detail.

Preparazione di N-(2-alkoxyvinyl) sulfamidici da N- tosyl-1, 2,3-triazoli e successiva conversione di Phthalans sostituito e fenetilamine

Decomposition of N-tosyl-1,2,3-triazoles with rhodium(II) acetate dimer in the presence of alcohols forms synthetically versatile ...

Regioselective O-Glycosylation of Nucleosides via the Temporary 2',3'-Diol Protection by a Boronic Ester for the Synthesis of Disaccharide Nucleosides

Disaccharide nucleosides, which consist of disaccharide and nucleobase moieties, have been known as a valuable group of natural products having multifarious bioactivities. Although chemical O-glycosylation is a commonly beneficial strategy to synthesize disaccharide nucleosides, the preparation of substrates such as glycosyl donors and acceptors requires&#160;tedious protecting&#160;group manipulations and a purification at each synthetic step. Meanwhile, several research groups have reported that boronic and borinic esters serve as a protecting or activating group of carbohydrate derivatives to achieve the regio- and/or stereoselective acylation, alkylation, silylation, and glycosylation. In this article, we demonstrate the procedure for the regioselective O-glycosylation of unprotected ribonucleosides utilizing boronic acid. The esterification of 2&#39;,3&#39;-diol of ribonucleosides with boronic acid makes the temporary protection of diol, and, following O-glycosylation with a glycosyl donor in the presence of p-toluenesulfenyl chloride and silver triflate, permits the regioselective reaction of the 5&#39;-hydroxyl group to afford the disaccharide nucleosides. This method could be applied to various nucleosides, such as guanosine, adenosine, cytidine, uridine, 5-metyluridine, and 5-fluorouridine. This article and the accompanying video represent&#160;useful (visual) information for the O-glycosylation of unprotected nucleosides and their analogs for the synthesis of not only disaccharide nucleosides, but also a variety of biologically relevant derivatives.

Regioselective O-Glycosylation of Nucleosides via the Temporary 2',3'-Diol Protection by a Boronic Ester for the Synthesis of Disaccharide Nucleosides

Here, we present protocols for the synthesis of disaccharide nucleosides by the regioselective O-glycosylation of ribonucleosides via a temporary protection of their 2&#39;,3&#39;-diol moieties utilizing a cyclic boronic ester. This method applies to several unprotected nucleosides such as adenosine, guanosine, cytidine, uridine, 5-methyluridine, and 5-fluorouridine to give corresponding disaccharide nucleosides.

Regioselettiva O- glicosilazione dei nucleosidi tramite il temporaneo 2', 3'-diolo protezione da boronico per la sintesi di disaccaride nucleosidi

Disaccharide nucleosides, which consist of disaccharide and nucleobase moieties, have been known as a valuable group of natural products having ...

Preparation of 6-aminocyclohepta-2,4-dien-1-one Derivatives via Tricarbonyl(tropone)iron

aza-Michael adducts of tricarbonyl(tropone)iron are synthesized by two different methods. Primary aliphatic amines and cyclic secondary amines participate in a direct aza-Michael reaction with tricarbonyl(tropone)iron under solvent-free conditions. Less nucleophilic aniline derivatives and more hindered secondary amines add efficiently to the cationic tropone complex formed by protonation of tricarbonyl(tropone)iron. While the protocol utilizing the cationic complex is less efficient overall for accessing the aza-Michael adducts than the direct, solvent-free addition to the neutral complex, it allows the use of a broader range of amine nucleophiles. Following protection of the amine of the aza-Michael adduct as a tert-butyl carbamate, the diene is decomplexed from the iron tricarbonyl fragment upon treatment with cerium(IV) ammonium nitrate to provide derivatives of 6-aminocyclohepta-2,4-dien-1-one. These products can serve as precursors to diverse compounds containing a seven-membered carbocyclic ring. Because the demetallation requires protection of the amine as a carbamate, the aza-Michael adducts of secondary amines cannot be decomplexed using the protocol described here.

Preparation of 6-aminocyclohepta-2,4-dien-1-one Derivatives via Tricarbonyltroponeiron

Representative experimental procedures for the addition of amine nucleophiles to tricarbonyl(tropone)iron and subsequent demetallation of the resulting complexes are presented in detail.

Preparazione di 6-aminociclohepta-2,4-dien-1-one Derivati via Tricarbonyl(tropone)iron

aza-Michael adducts of tricarbonyl(tropone)iron are synthesized by two different methods. Primary aliphatic amines and cyclic secondary amines participate ...

The Synthesis of RGD-functionalized Hydrogels as a Tool for Therapeutic Applications

The use of polymers as biomaterials has provided significant advantages in therapeutic applications. In particular, the possibility to modify and functionalize polymer chains with compounds that are able to improve biocompatibility, mechanical properties, or cell viability allows the design of novel materials to meet new challenges in the biomedical field. With the polymer functionalization strategies, click chemistry is a powerful tool to improve cell-compatibility and drug delivery properties of polymeric devices. Similarly, the fundamental need of biomedicine to use sterile tools to avoid potential adverse-side effects, such as toxicity or contamination of the biological environment, gives rise to increasing interest in the microwave-assisted strategy.
The combination of click chemistry and the microwave-assisted method is suitable to produce biocompatible hydrogels with desired functionalities and improved performances in biomedical applications. This work aims to synthesize RGD-functionalized hydrogels. RGD (arginylglycylaspartic acid) is a tripeptide that can mimic cell adhesion proteins and bind to cell-surface receptors, creating a hospitable microenvironment for cells within the 3D polymeric network of the hydrogels. RGD functionalization occurs through Huisgen 1,3-dipolar cycloaddition. Some PAA carboxyl groups are modified with an alkyne moiety, whereas RGD is functionalized with azido acid as the terminal residue of the peptide sequence. Finally, both products are used in a copper catalyzed click reaction to permanently link the peptide to PAA. This modified polymer is used with carbomer, agarose and polyethylene glycol (PEG) to synthesize a hydrogel matrix. The 3D structure is formed due to an esterification reaction involving carboxyl groups from PAA and carbomer and hydroxyl groups from agarose and PEG through microwave-assisted polycondensation. The efficiency of the gelation mechanism ensures a high degree of RGD functionalization. In addition, the procedure to load therapeutic compounds or biological tools within this functionalized network is very simple and reproducible.

We present a protocol for the synthesis of RGD-functionalized hydrogels as devices for cell and drug delivery. The procedure involves copper catalyzed alkyne-azide cycloaddition (CuAAC) between alkyne-modified polyacrylic acid (PAA) and a RGD-azide derivative. The hydrogels are formed using microwave-assisted polycondensation and their physicochemical properties are investigated.

La modifica e funzionalizzazione del gruppo Guanidine da precursori su misura

Riepilogo

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Forno a microonde assistita Funzionalizzazione di poli (etilene glicole) e On-resina Peptidi per l'uso a polimerizzazione a catena ed idrogel Formazione

Nucleosidi trifosfati - Dalla sintesi di biochimica Caratterizzazione

High-throughput sintesi dei carboidrati e funzionalizzazione di nanoparticelle polianidride

Un diretto, Early Stage Guanidinylation protocollo per la sintesi di complessi Aminoguanidine contenenti prodotti naturali

Preparazione facile dei derivati quinazoline 4-sostituito

Modifica Chemoselective delle superfici virali tramite Chimica Click Bioorthogonal

Preparazione di N-(2-alkoxyvinyl) sulfamidici da N- tosyl-1, 2,3-triazoli e successiva conversione di Phthalans sostituito e fenetilamine

Regioselettiva O- glicosilazione dei nucleosidi tramite il temporaneo 2', 3'-diolo protezione da boronico per la sintesi di disaccaride nucleosidi

Preparazione di 6-aminociclohepta-2,4-dien-1-one Derivati via Tricarbonyl(tropone)iron

La sintesi di RGD-funzionalizzati idrogeli come strumento per applicazioni terapeutiche

La modifica e funzionalizzazione del gruppo Guanidine da precursori su misura

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