Name: the ex vivo colon organ culture and its use in antimicrobial host defense studies
Uploaded: 2017-02-13T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 40 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about The Ex Vivo Colon Organ Culture and Its Use in Antimicrobial Host Defense Studies at JoVE.com

Questo lavoro è stato sostenuto da un finanziamento di Crohn e Colite Foundation of America, (CCFA; 3711) la prevenzione del cancro e Research Institute del Texas (CPRIT; RP160169), e UT Southwestern Medical Center dati a MHZ

Tutti gli esperimenti descritti qui sono stati effettuati utilizzando 6-8 settimane di età topi maschi wild-type (C57BL6 / J) mantenuto in libera una struttura specifica patogeno (SPF) presso il Centro risorse animali (ARC), UT Southwestern Medical Center. Tutti gli studi sono stati approvati dalla cura e l&#39;uso degli animali Comitato Istituzionale (IACUC) e sono state condotte in conformità con le linee guida IACUC e il National Institutes of Health Guide per la cura e l&#39;uso di animali da laboratorio. 1. Raccolta e preparazione del colon <ol><li> Euthanize topi con CO 2 asfissia seguita da dislocazione cervicale. </li><li> Spray topi con il 70% di etanolo e il pin arti per una scheda di pinning mantenendo il lato del mouse dorsale verso il basso sul tabellone. </li><li> Utilizzando forbici e pinze pre-sterilizzati dissezione, fare una incisione linea mediana nel peritoneo dell&#39;addome. Aprire l&#39;addome piegando il peritoneo con una pinza. </li><li> Rimuovere l&#39;intestino dalla cavità addominale wiesimo dissezione pinze e forbici. Separare il colon dal piccolo intestino tagliando al fondo cieco e l&#39;altra estremità al retto. </li><li> Posizionare i due punti in una capsula di Petri sterile contenente ghiacciata PBS. Lavare il contenuto del lume del colon con PBS freddo utilizzando una siringa da 20 ml in possesso di un ago G 20 o un ago sonda gastrica fino feci nel lume del colon è completamente rimosso. </li><li> Tagliare i due punti con le forbici in senso longitudinale. Lavare il colon agitando vigorosamente in PBS ghiacciato in una piastra di Petri sterile. </li><li> Tagliare il tessuto del colon in pezzi lunghi circa 1 cm con un bisturi sterile o forbici. </li><li> Registrare il peso dei pezzi colon. NOTA: tutti i passaggi della sezione 1 possono essere eseguite sia all&#39;interno che all&#39;esterno di una cappa di sicurezza biologica. Una volta che i due punti sono pronti per la cultura, tutti i passaggi devono essere eseguiti all&#39;interno di una cappa di sicurezza biologica per mantenere la sterilità. </li></ol> 2. Colon Orguna cultura <ol><li> Inserire un filtro cella (100 micron) su una piastra di coltura cellulare 6 pozzetti. Trasferire tutti i pezzi colon raccolti da un topo nel filtro cella. </li><li> Aggiungere 5 ml di terreno DMEM / F12 contenente il 5% di FBS, penicillina-streptomicina (1x), e Gentamicina (20 mg / ml). coprire completamente i pezzi del colon con i media. </li><li> Incubare per 2 ore a 37 ° C in un incubatore con 5% di CO 2 e dell&#39;aria 95%. </li><li> Sollevare il filtro delle cellule e aspirare i media. </li><li> Posizionare il filtro delle cellule di nuovo sul bene e aggiungere 5 ml di mezzi freschi senza antibiotici. Sollevare il filtro delle cellule e aspirare i media. </li><li> Ripetere la stessa operazione di lavaggio (passo 2,5) altre due volte (3x totale) per rimuovere tutti i residui antibiotici. </li><li> Trasferire i pezzi colon da una singola colino cellula in un singolo pozzetto di una piastra di coltura cellulare sterile 12 pozzetti. </li><li> Aggiungere DMEM medio / F12 contenente 5% FBS (senza antibiotici). Regolare il volume del mezzo con il weight dei pezzi colon, ad esempio, 1 medio ml per 100 mg di tessuto. Incubare per 12 ore a 37 ° C in un incubatore iniezione 5% di CO 2 e dell&#39;aria 95%. </li><li> Raccogliere il supernatante della coltura in una provetta sterile da 1,5 ml. </li><li> Centrifugare a 12.000 xga 4 ° C per 5 min. Separare il surnatante in una nuova provetta da 1,5 ml per uso nei batteri uccidendo dosaggio e / o altri saggi immunitari. Il supernatante può essere conservato a -80 ° C fino alla dosaggio. </li><li> Raccogliere i pezzi del colon in un tubo per l&#39;isolamento di RNA. </li></ol> 3. E. coli Analisi Uccidere <ol><li> Seminare E. coli in 5 mL Luria-Bertani (LB) brodo in una provetta da 15 ml e incubare a 37 ° C con agitazione a 200 rpm durante la notte. Mantenere il tappo della provetta leggermente allentato. </li><li> Centrifugare la provetta di coltura batterica a 1.200 xg per 10 minuti a 4 ° C. Rimuovere il surnatante e risospendere il pellet batterico in 5 ml di PBS ghiacciato. </li><li> Trasferire 1 ml della bactsospensione erial nella cuvetta e misurare OD a 600 nm. Utilizzare PBS come bianco. </li><li> Calcolare l&#39;unità formanti colonia (cfu) utilizzando una curva standard prestabilito. Qui, si supponga che 1 OD = 2 x 10 9 CFU / ml (circa). </li><li> Diluire la sospensione batterica per rendere la sospensione madre 1 x 10 5 CFU / ml. </li><li> Trasferire il surnatante cultura colon organo (500 microlitri / pozzetto) raccolte nella sezione 2.10 nei pozzetti duplicati di una piastra di coltura cellulare di 24 pozzetti. </li><li> Aggiungere 10 ml cultura coli E. (1.000 ufc) in un pozzetto contenente 500 microlitri colon organo cultura surnatante. Lasciare l&#39;altra e senza alcun coli inoculazione E. per confermare che la cultura surnatante colon organo non contiene alcuna contaminazione. </li><li> Incubare lo stesso numero di batteri (1000 cfu) nei mezzi di coltura (DMEM / F12 più 5% FBS) senza antibiotici come controllo. </li><li> Incubare a 37 ° C per 1 h. </li><li> Mettere 50 ml di ogni campione drop-wiSE su piastre di agar MacConkey. Incubare le piastre MacConkey agar a 37 ° C durante la notte. </li><li> Contare il numero di colonie e calcolare la ufc / ml. </li></ol> 4. L&#39;effetto di fattori estrinseci ed intrinseci sul colon antimicrobici Host Difesa Risposte NOTA: Il saggio uccisione antimicrobico come descritto qui può essere adottato per esaminare l&#39;effetto dei modelli patogeni associati molecolari (PAMPs) e citochine sull&#39;attività battericida della cultura d&#39;organo surnatante. Un esempio di tale esperimento utilizzando IL-1β e IL-18 è descritta di seguito. <ol><li> Raccogliere i due punti di topi come descritto nella Sezione 1. </li><li> Posizionare i due punti su un tovagliolo di carta sterile. Tagliare il colon longitudinalmente in tre parti con le forbici (Figura 2). </li><li> Lavare ogni parte del colon in ghiaccio freddo PBS come descritto nella Sezione 1. </li><li> Tagliare ogni parte del colon in piccoli pezzi e pesare in modo asettico. Trasferire i pezzi di ogni partedel colon in tre filtri di cellule separate (100 micron) disposte su tre pozzetti di una piastra di coltura cellulare 6 pozzetti (Figura 2). </li><li> Aggiungere 2 ml di DMEM medio / F12 contenente il 5% di FBS, penicillina-streptomicina (1x), e Gentamicina (20 mg / ml). </li><li> Incubare per 2 ore a 37 ° C in un incubatore iniezione 5% di CO 2 e dell&#39;aria 95%. </li><li> Lavare i pezzi del colon, come descritto nella 2,4-2,6. Trasferire i pezzi colon di un singolo colino cellula in un singolo pozzetto di una piastra di coltura cellulare sterile 12 pozzetti. I tre pozzetti contenenti tre parti del colon da un singolo mouse dovrebbero essere designati come greggia, IL-1β e IL-18 (Figura 2). </li><li> Aggiungere DMEM medio / F12 contenente 5% FBS (senza antibiotici). Regolare il volume del mezzo con il peso dei pezzi colon, ad esempio, 1 ml di mezzo per 100 mg di tessuto. </li><li> Stimolare la cultura organo colon con IL-1β (20 ng / ml) o IL-18 (20 ng / ml) per 12 h. I due punti non trattati<html> cultura organo serve come controllo. </li><li> Dopo 12 h di incubazione a 37 ° C in un incubatore iniezione 5% di CO 2 e il 95% di aria, raccogliere il supernatante della coltura in una sterile 1,5 mL provetta. </li><li> Trasferire 500 microlitri cultura surnatante in pozzetti duplicati di un 24-pozzetti. </li><li> Seminare E. coli (1.000 CFU) nel colon organo cultura surnatante come descritto nella Sezione 3. Per ogni condizione, inoculare E. coli in un singolo pozzo. L&#39;altro pozzetto contenente stesso organo cultura surnatante senza E. coli servirà come controllo per la contaminazione batterica. </li><li> Incubare la stessa quantità di batteri in terreni di coltura senza antibiotici come controllo. </li><li> Incubare a 37 ° C per 1 h. </li><li> Mettere 50 ml di ogni campione goccia a goccia su piastre di agar MacConkey. Incubare le piastre MacConkey agar per una notte a 37 ° C. </li><li> Contare il numero di colonie e calcolare la ufc / ml (Figura 4). </li></ol>e_title &quot;&gt; 5. Misurazione della espressione dei geni antimicrobici <ol><li> Dopo incubazione per una notte (12 ore) di cultura d&#39;organo del colon, come descritto nelle sezioni 2 e 4, lavare i pezzi del colon con 2 ml ghiacciata PBS (2x). </li><li> Raccogliere i pezzi del colon in una provetta libera tappo a vite 2 ml RNasi / DNasi. Mettere i tubi in ghiaccio. </li><li> Aggiungere 1 ml di reagente Trizol commerciale e lisi perline matrice nel tubo. </li><li> Lyse il tessuto utilizzando un omogeneizzatore tessuto automatizzato. </li><li> Raccogliere il lisato di tessuto in una nuova provetta. </li><li> Isolare RNA utilizzando il protocollo standard. </li><li> Misurare la concentrazione di RNA. </li><li> Diluire RNA opportunamente con acqua deionizzata e utilizzando 500 ng di RNA per sintetizzare cDNA. </li><li> Utilizzare il cDNA per real-time RT-PCR dei geni mirati antimicrobici, citochine, chemochine, e altri geni di interesse. </li></ol>

<ol>
	<li>Maloy, K. J., Powrie, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intestinal+homeostasis+and+its+breakdown+in+inflammatory+bowel+disease.">Intestinal homeostasis and its breakdown in inflammatory bowel disease.</a> Nature. 474, 298-306 (2011).</li><li>Hooper, L. V., Macpherson, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+adaptations+that+maintain+homeostasis+with+the+intestinal+microbiota.">Immune adaptations that maintain homeostasis with the intestinal microbiota.</a> Nat Rev Immunol. 10, 159-169 (2010).</li><li>Vaishnava, S., Behrendt, C. L., Ismail, A. S., Eckmann, L., Hooper, L. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paneth+cells+directly+sense+gut+commensals+and+maintain+homeostasis+at+the+intestinal+host-microbial+interface.">Paneth cells directly sense gut commensals and maintain homeostasis at the intestinal host-microbial interface.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 105, 20858-20863 (2008).</li><li>Kamada, N., Chen, G. Y., Inohara, N., Nunez, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+pathogens+and+pathobionts+by+the+gut+microbiota.">Control of pathogens and pathobionts by the gut microbiota.</a> Nat Immunol. 14, 685-690 (2013).</li><li>Wu, H. J., Wu, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+gut+microbiota+in+immune+homeostasis+and+autoimmunity.">The role of gut microbiota in immune homeostasis and autoimmunity.</a> Gut Microbes. 3, 4-14 (2012).</li><li>Zimmerman, N. P., Vongsa, R. A., Wendt, M. K., Dwinell, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemokines+and+chemokine+receptors+in+mucosal+homeostasis+at+the+intestinal+epithelial+barrier+in+inflammatory+bowel+disease.">Chemokines and chemokine receptors in mucosal homeostasis at the intestinal epithelial barrier in inflammatory bowel disease.</a> Inflamm Bowel Dis. 14, 1000-1011 (2008).</li><li>Elliott, D. E., Siddique, S. S., Weinstock, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Innate+immunity+in+disease.">Innate immunity in disease.</a> Clin Gastroenterol Hepatol. 12, 749-755 (2014).</li><li>Chopra, D. P., Dombkowski, A. A., Stemmer, P. M., Parker, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intestinal+epithelial+cells+in+vitro.">Intestinal epithelial cells in vitro.</a> Stem Cells Dev. 19, 131-142 (2010).</li><li>Autrup, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Explant+culture+of+human+colon.">Explant culture of human colon.</a> Methods Cell Biol. 21, 385-401 (1980).</li><li>Qin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+human+gut+microbial+gene+catalogue+established+by+metagenomic+sequencing.">A human gut microbial gene catalogue established by metagenomic sequencing.</a> Nature. 464, 59-65 (2010).</li><li>Wildenberg, M. E., vanden Brink, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+major+advance+in+ex+vivo+intestinal+organ+culture.">A major advance in ex vivo intestinal organ culture.</a> Gut. 61, 961-962 (2012).</li><li>Leushacke, M., Barker, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+vivo+culture+of+the+intestinal+epithelium:+strategies+and+applications.">Ex vivo culture of the intestinal epithelium: strategies and applications.</a> Gut. 63, 1345-1354 (2014).</li><li>Sato, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+Lgr5+stem+cells+build+crypt-villus+structures+in+vitro+without+a+mesenchymal+niche.">Single Lgr5 stem cells build crypt-villus structures in vitro without a mesenchymal niche.</a> Nature. 459, 262-265 (2009).</li><li>Tsilingiri, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Probiotic+and+postbiotic+activity+in+health+and+disease:+comparison+on+a+novel+polarised+ex-vivo+organ+culture+model.">Probiotic and postbiotic activity in health and disease: comparison on a novel polarised ex-vivo organ culture model.</a> Gut. 61, 1007-1015 (2012).</li><li>Haque, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+interactions+of+Salmonella+enterica+serovar+typhimurium+with+human+small+intestinal+epithelial+explants.">Early interactions of Salmonella enterica serovar typhimurium with human small intestinal epithelial explants.</a> Gut. 53, 1424-1430 (2004).</li><li>Hicks, S., Candy, D. C., Phillips, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adhesion+of+enteroaggregative+Escherichia+coli+to+pediatric+intestinal+mucosa+in+vitro.">Adhesion of enteroaggregative Escherichia coli to pediatric intestinal mucosa in vitro.</a> Infect Immun. 64, 4751-4760 (1996).</li><li>Knutton, S., Lloyd, D. R., Candy, D. C., McNeish, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+adhesion+of+enterotoxigenic+Escherichia+coli+to+human+intestinal+epithelial+cells+from+mucosal+biopsies.">In vitro adhesion of enterotoxigenic Escherichia coli to human intestinal epithelial cells from mucosal biopsies.</a> Infect Immun. 44, 514-518 (1984).</li><li>Senior, P. V., Pritchett, C. J., Sunter, J. P., Appleton, D. R., Watson, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crypt+regeneration+in+adult+human+colonic+mucosa+during+prolonged+organ+culture.">Crypt regeneration in adult human colonic mucosa during prolonged organ culture.</a> J Anat. 134, 459-469 (1982).</li><li>Smollett, K., Shaw, R. K., Garmendia, J., Knutton, S., Frankel, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Function+and+distribution+of+EspG2,+a+type+III+secretion+system+effector+of+enteropathogenic+Escherichia+coli.">Function and distribution of EspG2, a type III secretion system effector of enteropathogenic Escherichia coli.</a> Microbes Infect. 8, 2220-2227 (2006).</li><li>Bareiss, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organotypical+tissue+cultures+from+adult+murine+colon+as+an+in+vitro+model+of+intestinal+mucosa.">Organotypical tissue cultures from adult murine colon as an in vitro model of intestinal mucosa.</a> Histochem Cell Biol. 129, 795-804 (2008).</li><li>Tsilingiri, K., Sonzogni, A., Caprioli, F., Rescigno, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+method+for+the+culture+and+polarized+stimulation+of+human+intestinal+mucosa+explants.">A novel method for the culture and polarized stimulation of human intestinal mucosa explants.</a> J Vis Exp. , e4368 (2013).</li><li>Hu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+DNA+Sensor+AIM2+Maintains+Intestinal+Homeostasis+via+Regulation+of+Epithelial+Antimicrobial+Host+Defense.">The DNA Sensor AIM2 Maintains Intestinal Homeostasis via Regulation of Epithelial Antimicrobial Host Defense.</a> Cell Rep. 13, 1922-1936 (2015).</li><li>Moorghen, M., Chapman, M., Appleton, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+organ-culture+method+for+human+colorectal+mucosa+using+serum-free+medium.">An organ-culture method for human colorectal mucosa using serum-free medium.</a> J Pathol. 180, 102-105 (1996).</li><li>Dame, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+colon+tissue+in+organ+culture:+preservation+of+normal+and+neoplastic+characteristics.">Human colon tissue in organ culture: preservation of normal and neoplastic characteristics.</a> In Vitro Cell Dev Biol Anim. 46, 114-122 (2010).</li><li>Grant, A. J., Woodward, J., Maskell, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+an+ex+vivo+organ+culture+model+using+human+gastro-intestinal+tissue+and+Campylobacter+jejuni.">Development of an ex vivo organ culture model using human gastro-intestinal tissue and Campylobacter jejuni.</a> FEMS Microbiol Lett. 263, 240-243 (2006).</li></ol>

The authors have no competing financial interests.

Le cellule epiteliali intestinali sono molto sensibili in termini di requisiti di crescita e quindi difficile da coltura. Le cellule epiteliali isolate mediante trattamento EDTA non sopravvivono in mezzi di coltura cellulare convenzionali come DMEM 8. Pertanto, studi di interazione ospite-patogeno utilizzando cripta isolata o cellule epiteliali primarie sono molto impegnativo. Recentemente, Sato et al. descritto un sistema di coltura organoide cripta che è molto promettente e utile per gli studi...

L&#39;intestino rappresenta un sistema dinamico che agisce come una barriera per i microrganismi commensali, combatte contro patogeni, e regola la composizione microbica 1. Le cellule epiteliali intestinali, composto da enterociti, cellule caliciformi, le cellule e le cellule Paneth enteroendocrine, sono le principali popolazioni di cellule che forniscono accoglienza risposte di difesa contro microbiota intestinale. Le cellule caliciformi producono mucine che creano una zona smilitarizzata sulla parte superiore dello strato epiteliale 2. Le cellule Paneth e enterociti producono peptidi antimicrobici, citochine, e specie di ossigeno e di azoto reattivo che costituiscono antimicrobici risposte di difesa dell&#39;ospite e contribuiscano a dare forma alla composizione microbica intestinale 3, 4. In aggiunta alle cellule epiteliali, le cellule immunitarie compresi macrofagi, cellule dendritiche, neutrofili, cellule natural killer, linfociti e inna<html> cellule linfoidi te nella lamina propria e sottomucosa giocano un ruolo critico nella intestinali risposte di difesa ospite antimicrobici da citochine, chemochine, che producono e altri mediatori 5 - 7. Per comprendere come il sistema immunitario mucosale regola microflora e fornisce protezione contro l&#39;infezione microbica, è importante considerare la complessa interazione delle popolazioni cellulari eterogenee dell&#39;intestino. Tuttavia, un modello in vitro che comprende tutte le caratteristiche dell&#39;intestino non è disponibile. Pertanto, gli studi molecolari sulla interazione ospite-patogeno a livello intestinale sono altamente impegnativo. Nel corso degli ultimi anni, diversi sistemi modello che imitano gli aspetti della mucosa intestinale sono stati sviluppati per indagare i processi fisiopatologici coinvolti nelle malattie infiammatorie croniche intestinali (IBD) e altri disturbi gastrointestinali 8 -= &quot;xref&quot;&gt; 14. linee di cellule epiteliali intestinali immortalati sono spesso usati per studiare le risposte specifiche delle cellule epiteliali. Tuttavia, a causa di espressione genica differenziale e funzione in cellule immortalizzate, i dati ottenuti dal usando tali cellule non coincidono spesso con quelli osservati negli studi in vivo. Cripta intestinale organoide cultura è emerso recentemente come un potenziale strumento per valutare la risposta del epitelio intestinale a stimoli diversi 13. In questo sistema, le cellule staminali cripta sono autorizzati a crescere e sviluppare una struttura organoide 3D. Mentre il sistema di coltura organoide è molto utile per studiare molti aspetti dell&#39;epitelio intestinale, che non imita la complessa interazione di cellule immuni, cellule epiteliali e prodotti microbici. La cultura ex vivo del tessuto intestinale offre una migliore rappresentazione in vivo ospitanti risposte di difesa. In questo metodo, una parte dell&#39;intestino è coltivato in un piatto bianco coltura cellulareh mezzi appropriati che offrano i diversi tipi di popolazioni cellulari nell&#39;intestino di essere metabolicamente attivi per almeno 48 ore. Così, un ex vivo coltura dell&#39;organo può essere usato per misurare l&#39;espressione di geni antimicrobici e l&#39;host risposte di difesa dell&#39;intestino ad uno stimolo particolare. Gli investigatori hanno utilizzato il sistema d&#39;organo ex vivo della cultura per studiare ospitanti risposte di difesa contro l&#39;infezione microbica nell&#39;intestino 15-21. Recentemente abbiamo adottato il sistema di coltura di organi per studiare il ruolo del inflammasome nelle risposte di difesa antimicrobici ospitanti in due punti di topo 22. Il inflammasome è una piattaforma molecolare per l&#39;attivazione della caspasi-1, che è richiesto per la produzione di IL-1β maturato e IL-18. Abbiamo dimostrato che IL-1β e IL-18 inducono peptidi antimicrobici che uccidono efficacemente pathobionts commensali come E. coli </em&gt;. Questa osservazione è coerente con un aumento coli onere E. in due punti del mouse inflammasome-difettoso 22. Questo sistema può quindi essere utilizzato per studiare il ruolo dei recettori pattern recognition (PRR) e di altre molecole immunitarie innate in intestinali risposte di difesa ospite antimicrobici nonché patogenesi dei disturbi intestinali come la malattia infiammatoria intestinale (IBD) e il cancro del colon-retto (CRC). Ci sono più di 200 geni di suscettibilità IBD, e mutazioni in molti di questi geni sono associati con alterata composizione microbica nell&#39;intestino. E &#39;di grande importanza clinica per determinare il meccanismo preciso attraverso il quale i geni IBD-suscettibilità regolano flora intestinale. L&#39;obiettivo generale di questo metodo è quello di introdurre un protocollo di base di ex vivo della cultura d&#39;organo del colon e dimostrare come questo metodo di coltura può essere usato per studiare antimicrobici risposte di difesa ospite dell &#39;intestino.

<table><tbody><tr><td>Advanced DMEM/ F12</td><td>Life Technologies</td><td>12634-010</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco&#039;s phosphate buffered saline, modified, w/o Calcium chloride &amp;amp; Magnesium chloride</td><td>Sigma</td><td>5634</td><td></td></tr><tr><td>FBS, heat inactivated</td><td>Sigma</td><td>F4135</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin</td><td>Life Technologies</td><td>15070063</td><td></td></tr><tr><td>Gentamicin solution</td><td>Sigma</td><td>G1272</td><td></td></tr><tr><td>Mouse IL-1b recombinan</td><td>Reprokine</td><td>RKP10749</td><td></td></tr><tr><td>Mouse IL-18 recombinant</td><td>Reprokine</td><td>RKP70380</td><td></td></tr><tr><td>TRIzol Reagent</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15596018</td><td></td></tr><tr><td>Difco Luria-Bertani Broth&amp;nbsp;</td><td>BD Bioscience</td><td>244620</td><td></td></tr><tr><td>BD&amp;nbsp;Difco Dehydrated Culture Media: MacConkey Agar</td><td>Fisher Scientific</td><td>DF0075-17-1</td><td></td></tr><tr><td>NanoDrop 1000 Spectrophotometer</td><td>Thermo Scientific</td><td></td><td>Uded to measure RNA concentration</td></tr><tr><td>UV/Vis Spectrophotometer</td><td>BECKMAN</td><td>DU 530</td><td>Used to determine E. coli count</td></tr><tr><td>iScript RT Supermix, 100 rxns</td><td>Bio-Rad</td><td>1708841</td><td></td></tr><tr><td>iTaq Univer SYBR Green Supermix&amp;nbsp;</td><td>Bio-Rad</td><td>1725125&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Lysing Matrix S (1/8&quot;), 2 ml Tube</td><td>MP Biomedicals</td><td>116925500</td><td>Used to homgenize colon organ for RNA isolation</td></tr><tr><td>FastPrep-24 5G System</td><td>Bio-Rad</td><td>116005500</td><td></td></tr><tr><td>100 mm x 15 mm Petri Dish</td><td>Falcon</td><td>5687</td><td></td></tr><tr><td>Plate 6 well ps TC CS100, Cellstar, 6w, tc, F-bottom (Flat), w/lid, sterile</td><td>Cellstar</td><td>5085</td><td></td></tr><tr><td>100 &amp;mu;m cell strainer</td><td>Falcon</td><td>5698</td><td></td></tr><tr><td>Sorvall Legend Micro 21R Centrifuge</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sorvall ST40R Centrifuge</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Forma Scientific orbital shaker</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

the ex vivo colon organ culture and its use in antimicrobial host defense studies

L&#39;intestino mostra un&#39;architettura di strutture cripta ripetitive costituite da diversi tipi di cellule epiteliali, propia lamina contenente cellule immunitarie, e stroma. Tutte queste cellule eterogenei contribuiscono a omeostasi intestinale e partecipare a difesa ospite antimicrobica. Pertanto, l&#39;identificazione di un modello di surrogato per studiare la risposta immunitaria e attività antimicrobica dell&#39;intestino in un ambiente in vitro è estremamente impegnativo. Gli studi in vitro utilizzando linee cellulari epiteliali intestinali immortalato o cripta addirittura primario organoide cultura non rappresentano l&#39;esatta fisiologia intestinale normale e del suo microambiente. Qui, si discute un metodo di tessuto del colon coltura del mouse in un piatto di cultura e di come questo organo ex vivo sistema di coltura può essere implementato in studi relativi a risposte di difesa antimicrobici ospitanti. In esperimenti di rappresentanza, abbiamo dimostrato che i due punti nella cultura d&#39;organo esprimono peptidi antimicrobici in response per esogena IL-1β e IL-18. Inoltre, le molecole effettrici antimicrobiche prodotte dai tessuti del colon nella cultura organo uccidono efficacemente Escherichia coli in vitro. Questo approccio, pertanto, può essere utilizzato per analizzare il ruolo dei modelli molecolari di patogeni e pericolo associati ed i loro recettori cellulari nella regolazione intestinale risposte immunitarie innate e risposte di difesa antimicrobiche dell&#39;ospite.

Un quadro rappresentativo di due punti nella cultura d&#39;organo è mostrato in Figura 1. I pezzi del colon nella cultura rimangono metabolicamente e fisiologicamente attiva. Essi rispondono in modo efficace agli stimoli esogeni aggiunti al mezzo di coltura. Un flusso di lavoro schematica della preparazione del tessuto colon per coltura ex vivo e stimolazione con stimoli esogeni, per esempio IL-1β e IL-18, è mostrata in figura 2. I d...

Watch this Scientific Journal Video about The Ex Vivo Colon Organ Culture and Its Use in Antimicrobial Host Defense Studies at JoVE.com

The Ex Vivo Colon Organ Culture and Its Use in Antimicrobial Host Defense Studies

The ex vivo organ culture allows investigation of biological processes in the context of the intact tissue architecture. Here, we introduce a method of ex vivo culture of the mouse colon, which can be used to study innate immunity and antimicrobial host defense in the intestine.

Il<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Colon Organ Culture e il suo uso in Antimicrobial Host Defense Studies

The intestine displays an architecture of repetitive crypt structures consisting of different types of epithelial cells, lamina propia containing immune ...

the-ex-vivo-colon-organ-culture-its-use-antimicrobial-host-defense

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

The Ex Vivo Colon Organ Culture and Its Use in Antimicrobial Host Defense Studies

14.0K Views.  UT Southwestern Medical Center. The ex vivo organ culture allows investigation of biological processes in the context of the intact tissue architecture. Here, we introduce a method of ex vivo culture of the mouse colon, which can be used to study innate immunity and antimicrobial host defense in the intestine. 

Video: The Ex Vivo Colon Organ Culture and Its Use in Antimicrobial Host Defense Studies

Assessing the Viability of a Synthetic Bacterial Consortium on the In Vitro Gut Host-microbe Interface

The interplay between host and microbiota has been long recognized and extensively described. The mouth is similar to other sections of the gastrointestinal tract, as resident microbiota occurs and prevents colonisation by exogenous bacteria. Indeed, more than 600 species of bacteria are found in the oral cavity, and a single individual may carry around 100 different at any time. Oral bacteria possess the ability to adhere to the various niches in the oral ecosystem, thus becoming integrated within the resident microbial communities, and favouring growth and survival. However, the flow of bacteria into the gut during swallowing has been proposed to disturb the balance of the gut microbiota. In fact, oral administration of P. gingivalis shifted bacterial composition in the ileal microflora. We used a synthetic community as a simplified representation of the natural oral ecosystem, to elucidate the survival and viability of oral bacteria subjected to simulated gastrointestinal transit conditions. Fourteen species were selected, subjected to in vitro salivary, gastric, and intestinal digestion processes, and presented to a multicompartment cell model containing Caco-2 and HT29-MTX cells to simulate the gut mucosal epithelium. This model served to unravel the impact of swallowed bacteria on cells involved in the enterohepatic circulation. Using synthetic communities allows for controllability and reproducibility. Thus, this methodology can be adapted to assess pathogen viability and subsequent inflammation-associated changes, colonization capacity of probiotic mixtures, and ultimately, potential bacterial impact on the presystemic circulation.

Assessing the Viability of a Synthetic Bacterial Consortium on the In Vitro Gut Host-microbe Interface

Gut host-microbe interactions were assessed using a novel approach combining a synthetic oral community, in vitro gastrointestinal digestion, and a model of the small intestine epithelium. We present a method that can be adapted to evaluate cell invasion of pathogens and multi-species biofilms, or even to test probiotic formulations&#39; survivability.

Valutare la fattibilità di un consorzio batterico sintetico sull'interfaccia ospite-microbo In Vitro Gut

The interplay between host and microbiota has been long recognized and extensively described. The mouth is similar to other sections of the ...

Ricerca

Biochimica

In vitro Organoid Culture of Primary Mouse Colon Tumors

Several human and murine colon cancer cell lines have been established, physiologic integrity of colon tumors such as multiple cell layers, basal-apical polarity, ability to differentiate, and anoikis are not maintained in colon cancer derived cell lines. The present study demonstrates a method for culturing primary mouse colon tumor organoids adapted from Sato T et al. 1, which retains important physiologic features of colon tumors. This method consists of mouse colon tumor tissue collection, adjacent normal colon epithelium dissociation, colon tumor cells digestion into single cells, embedding colon tumor cells into matrigel, and selective culture based on the principle that tumor cells maintain growth on limiting nutrient conditions compared to normal epithelial cells.
The primary tumor organoids if isolated from genetically modified mice provide a very useful system to assess tumor autonomous function of specific genes. Moreover, the tumor organoids are amenable to genetic manipulation by virus meditated gene delivery; therefore signaling pathways involved in the colon tumorigenesis could also be extensively investigated by overexpression or knockdown. Primary tumor organoids culture provides a physiologic relevant and feasible means to study the mechanisms and therapeutic modalities for colon tumorigenesis.

In vitro Organoid Culture of Primary Mouse Colon Tumors

A simple method to establish primary murine colon tumor organoid is described. This method utilizes the feature that colon tumor cells survive and grow into organoids in media containing limited growth factors, whereas normal colon epithelial do not.

In vitro organoide Cultura di primari tumori del colon mouse

Several  human and murine colon cancer cell lines have been established, physiologic  integrity of colon tumors such as multiple cell layers, basal-apical ...

Medicina

Three-Dimensional Culture of Murine Colonic Crypts to Study Intestinal Stem Cell Function Ex Vivo

The intestinal epithelium regenerates every 5-7 days, and is controlled by the intestinal epithelial stem cell (IESC) population located at the bottom of the crypt region. IESCs include active stem cells, which self-renew and differentiate into various epithelial cell types, and quiescent stem cells, which serve as the reserve stem cells in the case of injury. Regeneration of the intestinal epithelium is controlled by the self-renewing and differentiating capabilities of these active IESCs. In addition, the balance of the crypt stem cell population and maintenance of the stem cell niche are essential for intestinal regeneration. Organoid culture is an important and attractive approach to studying proteins, signaling molecules, and environmental cues that regulate stem cell survival and functions. This model is less expensive, less time-consuming, and more manipulatable than animal models. Organoids also mimic the tissue microenvironment, providing in vivo relevance. The present protocol describes the isolation of colonic crypts, embedding these isolated crypt cells into a three-dimensional gel matrix system and culturing crypt cells to form colonic organoids capable of self-organization, proliferation, self-renewal, and differentiation. This model allows one to manipulate the environment-knocking out specific proteins such as claudin-7, activating/deactivating signaling pathways, etc.-to study how these effects influence the functioning of colonic stem cells. Specifically, the role of tight junction protein claudin-7 in colonic stem cell function was examined. Claudin-7 is vital for maintaining intestinal homeostasis and barrier function and integrity. Knockout of claudin-7 in mice induces an inflammatory bowel disease-like phenotype exhibiting intestinal inflammation, epithelial hyperplasia, weight loss, mucosal ulcerations, epithelial cell sloughing, and adenomas. Previously, it was reported that claudin-7 is required for intestinal epithelial stem cell functions in the small intestine. In this protocol, a colonic organoid culture system is established to study the role of claudin-7 in the large intestine.

Three-Dimensional Culture of Murine Colonic Crypts to Study Intestinal Stem Cell Function Ex Vivo

The present protocol describes establishing a murine colonic organoid system to study the activity and functioning of colonic stem cells in a claudin-7 knockout model.

Coltura tridimensionale di cripte coloniche murine per studiare ex vivo la funzione delle cellule staminali intestinali

The intestinal epithelium regenerates every 5-7 days, and is controlled by the intestinal epithelial stem cell (IESC) population located at the bottom of ...

Ricerca sul cancro

The Ex Vivo Culture and Pattern Recognition Receptor Stimulation of Mouse Intestinal Organoids

Primary intestinal organoids are a valuable model system that has the potential to significantly impact the field of mucosal immunology. However, the complexities of the organoid growth characteristics carry significant caveats for the investigator. Specifically, the growth patterns of each individual organoid are highly variable and create a heterogeneous population of epithelial cells in culture. With such caveats, common tissue culture practices cannot be simply applied to the organoid system due to the complexity of the cellular structure. Counting and plating based solely on cell number, which is common for individually separated cells, such as cell lines, is not a reliable method for organoids unless some normalization technique is applied. Normalizing to total protein content is made complex due to the resident protein matrix. These characteristics in terms of cell number, shape and cell type should be taken into consideration when evaluating secreted contents from the organoid mass. This protocol has been generated to outline a simple procedure to culture and treat small intestinal organoids with microbial pathogens and pathogen associated molecular patterns (PAMPs). It also emphasizes the normalization techniques that should be applied when protein analysis are conducted after such a challenge.

The Ex Vivo Culture and Pattern Recognition Receptor Stimulation of Mouse Intestinal Organoids

Here, a protocol to harvest, maintain, and treat mouse small intestinal organoids with pathogen associated molecular patterns (PAMPs) and Listeria monocytogenes is described, as well as emphasis on gene expression and proper normalization techniques for protein.

Il<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Cultura e Pattern Recognition recettore stimolazione del mouse intestinale organoidi

Primary intestinal organoids are a valuable model system that has the potential to significantly impact the field of mucosal immunology. However, the ...

Immunologia e infezioni

Human Colonoid Monolayers to Study Interactions Between Pathogens, Commensals, and Host Intestinal Epithelium

Human 3-dimensional (3D) enteroid or colonoid cultures derived from crypt base stem cells are currently the most advanced ex vivo model of the intestinal epithelium. Due to their closed structures and significant supporting extracellular matrix, 3D cultures are not ideal for host-pathogen studies. Enteroids or colonoids can be grown as epithelial monolayers on permeable tissue culture membranes to allow manipulation of both luminal and basolateral cell surfaces and accompanying fluids. This enhanced luminal surface accessibility facilitates modeling bacterial-host epithelial interactions such as the mucus-degrading ability of enterohemorrhagic E. coli (EHEC) on colonic epithelium. A method for 3D culture fragmentation, monolayer seeding, and transepithelial electrical resistance (TER) measurements to monitor the progress towards confluency and differentiation are described. Colonoid monolayer differentiation yields secreted mucus that can be studied by the immunofluorescence or immunoblotting techniques. More generally, enteroid or colonoid monolayers enable a physiologically-relevant platform to evaluate specific cell populations that may be targeted by pathogenic or commensal microbiota.

Here, we present a protocol to culture human enteroid or colonoid monolayers that have intact barrier function to study host epithelial-microbiota interactions at the cellular and biochemical level.

Monostrati Colonoid umana per studiare le interazioni tra gli agenti patogeni, Commensals ed epitelio intestinale Host

Human 3-dimensional (3D) enteroid or colonoid cultures derived from crypt base stem cells are currently the most advanced ex vivo model of the intestinal ...

A Novel Method for the Culture and Polarized Stimulation of Human Intestinal Mucosa Explants

Few models currently exist to realistically simulate the complex human intestine's micro-environment, where a variety of interactions take place. Proper homeostasis directly depends on these interactions, as they shape an entire immunological response inducing tolerance against food antigens while at the same time mounting effective immune responses against pathogenic microbes accidentally ingested with food.
Intestinal homeostasis is preserved also through various complex interactions between the microbiota (including food-associated beneficial bacterial strains) and the host, that regulate the attachment/degradation of mucus, the production of antimicrobial peptides by the epithelial barrier, and the "education" of epithelial cells' that controls the tolerogenic or immunogenic phenotype of unique, gut-resident lymphoid cells' populations. These interactions have been so far very difficult to reproduce with in vitro assays using either cultured cell lines or peripheral blood mononuclear cells. In addition, mouse models differ substantially in components of the intestinal mucosa (mucus layer organization, commensal bacteria community) with respect to the human gut. Thus, studies of a variety of treatments to be brought in the clinics for important stress-related or pathological conditions such as irritable bowel syndrome, inflammatory bowel disease or colorectal cancer have been difficult to carry out.
To address these issues, we developed a novel system that enables us to stimulate explants of human intestinal mucosa that retain their in situ conditioning by the host microbiota and immune response, in a polarized fashion. Polarized apical stimulation is of great importance for the outcome of the elicited immune response. It has been repeatedly shown that the same stimuli can produce completely different responses when they bypass the apical face of the intestinal epithelium, stimulating epithelial cells basolaterally or coming into direct contact with lamina propria components, switching the phenotype from tolerogenic to immunogenic and causing unnecessary and excessive inflammation in the area.
We achieved polarized stimulation by gluing a cave cylinder which delimited the area of stimulation on the apical face of the mucosa as will be described in the protocol. We used this model to examine, among others, differential effects of three different Lactobacilli strains. We show that this model system is very powerful to assess the immunomodulatory properties of probiotics in healthy and disease conditions.

We introduce a novel method for the maintenance of human intestinal mucosa in culture and monitoring of the response to various types of stimuli over at least 24 hrs. With our method, the polarity of the tissue is maintained, allowing for a physiological stimulation via the apical route.

Un nuovo metodo per la Cultura e polarizzata stimolazione umani espianti mucosa intestinale

Few models currently exist to realistically simulate the complex human intestine's micro-environment, where a variety of interactions take place. Proper ...

Biologia

An Intestinal Gut Organ Culture System for Analyzing Host-Microbiota Interactions

The structure of the gut tissue facilitates close and mutualistic interactions between the host and the gut microbiota. These cross-talks are crucial for maintaining local and systemic homeostasis; changes to gut microbiota composition (dysbiosis) associate with a wide array of human diseases. Methods for dissecting host-microbiota interactions encompass an inherent tradeoff among preservation of physiological tissue structure (when using in vivo animal models) and the level of control over the experiment factors (as in simple in vitro cell culture systems). To address this tradeoff, Yissachar et al. recently developed an intestinal organ culture system. The system preserves a naive colon tissue construction and cellular mechanisms and it also permits tight experimental control, facilitating experimentations that cannot be readily performed in vivo. It is optimal for dissecting short-term responses of various gut components (such as epithelial, immunological and neuronal elements) to luminal perturbations (including anaerobic or aerobic microbes, whole microbiota samples from mice or humans, drugs and metabolites). Here, we present a detailed description of an optimized protocol for organ culture of multiple gut fragments using a custom-made gut culture device. Host responses to luminal perturbations can be visualized by immunofluorescence staining of tissue sections or whole-mount tissue fragments, fluorescence in-situ hybridization (FISH), or time-lapse imaging. This system supports a wide array of readouts, including next-generation sequencing, flow cytometry, and various cellular and biochemical assays. Overall, this three-dimensional organ culture system supports the culture of large, intact intestinal tissues and has broad applications for high-resolution analysis and visualization of host-microbiota interactions in the local gut environment.

This article presents a unique method for analyzing host-microbiome interactions using a novel gut organ culture system for ex vivo experiments.

Un sistema di coltura di organi intestinali intestinali per l'analisi delle interazioni ospite-microbiota

The structure of the gut tissue facilitates close and mutualistic interactions between the host and the gut microbiota. These cross-talks are crucial for ...

Effetti epiteliali dell'infiammazione intestinale sui colonoidi murini stabiliti

Studying the Epithelial Effects of Intestinal Inflammation In Vitro on Established Murine Colonoids

The intestinal epithelium plays an essential role in human health, providing a barrier between the host and the external environment. This highly dynamic cell layer provides the first line of defense between microbial and immune populations and helps to modulate the intestinal immune response. Disruption of the epithelial barrier is a hallmark of inflammatory bowel disease (IBD) and is of interest for therapeutic targeting. The 3-dimensional colonoid culture system is an extremely useful in vitro model for studying intestinal stem cell dynamics and epithelial cell physiology in IBD pathogenesis. Ideally, establishing colonoids from the inflamed epithelial tissue of animals would be most beneficial in assessing the genetic and molecular influences on disease. However, we have shown that in vivo epithelial changes are not necessarily retained in colonoids established from mice with acute inflammation. To address this limitation, we have developed a protocol to treat colonoids with a cocktail of inflammatory mediators that are typically elevated during IBD. While this system can be applied ubiquitously to various culture conditions, this protocol emphasizes treatment on both differentiated colonoids and 2-dimensional monolayers derived from established colonoids. In a traditional culture setting, colonoids are enriched with intestinal stem cells, providing an ideal environment to study the stem cell niche. However, this system does not allow for an analysis of the features of intestinal physiology, such as barrier function. Further, traditional colonoids do not offer the opportunity to study the cellular response of terminally differentiated epithelial cells to proinflammatory stimuli. The methods presented here provide an alternative experimental framework to address these limitations. The 2-dimensional monolayer culture system also offers an opportunity for therapeutic drug screening ex vivo. This polarized layer of cells can be treated with inflammatory mediators on the basal side of the cell and concomitantly with putative therapeutics apically to determine their utility in IBD treatment.

Autore in primo piano: Studio degli effetti epiteliali dell'infiammazione intestinale in vitro su colonoidi murini consolidati  

We describe a protocol detailing the isolation of murine colonic crypts for the development of 3-dimensional colonoids. The established colonoids can then be terminally differentiated to reflect the cellular composition of the host epithelium prior to receiving an inflammatory challenge or being directed to establish an epithelial monolayer.

Studiare gli effetti epiteliali dell'infiammazione intestinale in vitro su colonoidi murini accertati

The intestinal epithelium plays an essential role in human health, providing a barrier between the host and the external environment. This highly dynamic ...

Il

Riepilogo

Esplora Altri Video

Capitoli in questo video

Valutare la fattibilità di un consorzio batterico sintetico sull'interfaccia ospite-microbo In Vitro Gut

In vitro organoide Cultura di primari tumori del colon mouse

Coltura tridimensionale di cripte coloniche murine per studiare ex vivo la funzione delle cellule staminali intestinali

Il

Monostrati Colonoid umana per studiare le interazioni tra gli agenti patogeni, Commensals ed epitelio intestinale Host

Un nuovo metodo per la Cultura e polarizzata stimolazione umani espianti mucosa intestinale

Un sistema di coltura di organi intestinali intestinali per l'analisi delle interazioni ospite-microbiota

Studiare gli effetti epiteliali dell'infiammazione intestinale in vitro su colonoidi murini accertati

Studiare gli effetti epiteliali dell'infiammazione intestinale in vitro su colonoidi murini accertati

Studiare gli effetti epiteliali dell'infiammazione intestinale in vitro su colonoidi murini accertati