Il protocollo combina un modello murino di aneurisma dell'aorta addominale simile alla malattia umana accertata e un trattamento ripetitivo tramite catetere endovenoso. Affrontare la necessità clinica di bloccare la progressione dell'aneurisma. Il protocollo fornisce un flusso di lavoro completo per testare i farmaci per ridurre la progressione dell'aneurisma nei topi, comprese informazioni complete sull'espansione del volume e della morfologia del diametro aortico.
Inoltre ultrasuoni 3D. L'ecografia 3D può essere adattata per misurare l'aorta infrarenale in cui gli aneurismi si sviluppano in modelli murini meno basati sul gusto. Il cateterismo della vena giugulare può essere utilizzato per qualsiasi serie di iniezioni endovenose che richiedono.
Dopo aver anestetizzato il topo di posta carente di APOE di 12-14 settimane radere la piccola area sul lato superiore sinistro della schiena, sopra la scapola, applicare una soluzione di iodio povidone al 10% per disinfettare l'area rasata. Fai un'incisione trasversale di un centimetro nella pelle della parte superiore della schiena con un bisturi tra la metà della colonna vertebrale e la linea scapolare sinistra. Tenere la pelle con una pinza e usare forbici curve smussate.
Fai una tasca sottocutanea spingendo verso l'arto posteriore sinistro. Apri le forbici e tira fuori le forbici aperte dal taglio per allargare la tasca. Inserire delicatamente la pompa nella tasca con il moderatore di flusso verso la coda per ridurre al minimo la potenziale interferenza dell'angiotensina due rilasciata dal sito di incisione.
Quindi chiudere la ferita con suture interrotte riassorbibili 4.0. Utilizzando il sistema di accesso vascolare. Preparare il catetere tagliando i tre lati francesi alla lunghezza desiderata e spingendo il catetere sul connettore metallico calibro 22 del sistema di accesso vascolare o VAS con almeno tre millimetri di sovrapposizione.
Posizionare il cappuccio in alluminio sul pulsante per proteggere la porta. Rasare la pelliccia dal lato destro del collo sul lato ventrale e sul lato destro della parte superiore della schiena di un topo anestetizzato. Quindi applicare la soluzione di iodio povidone per disinfettare l'area rasata.
Per la preparazione della vena giugulare, eseguire un'incisione cutanea superclavicolare trasversale di 0,5 centimetri sul lato destro del collo sopra la clavicola destra. Utilizzare pinzette microchirurgiche smussate per separare il tessuto connettivo e il grasso esponendo la vena giugulare esterna. Evitare di strappare piccoli vasi sanguigni nel grasso.
Isolare cinque millimetri della nave vicino ai muscoli pettorali. Quindi smussare il tessuto sotto la vena usando micro pinzette piegate e passare attraverso due o tre delle legature di seta 6.0. Infilare le legature e aggiungere una goccia di soluzione salina al sito.
Per l'impianto del pulsante, capovolgere il mouse e posizionarlo in posizione prona. Applicare la soluzione di iodio povidone per disinfettare l'area rasata. Fai un'incisione sagittale di un centimetro sulla parte superiore della schiena con un bisturi tra le linee scapolari medi e destro.
Quindi, utilizzare forbici curve smussate per creare una tasca circolare leggermente più grande della dimensione del VAS attorno al sito di incisione mediante dissezione smussata. Usa le forbici curve smussate per scavare un tunnel cranico sopra la spalla destra verso l'incisione ventrale al collo aprendo leggermente le forbici. Quindi estrarre le forbici aperte e ripetere l'azione mentre viene spinta più dentro.
Una volta che il tunnel ha raggiunto l'incisione ventrale passare attraverso morsetti chirurgici dall'incisione ventrale a quella dorsale. Attaccare tre estremità francesi del catetere al morsetto e tirare il catetere attraverso il tunnel in modo che sia fuori dall'incisione del collo ventrale e il VAS sia in posizione sull'incisione dorsale. Quindi inserire il disco di feltro chirurgico VAS per via sottocutanea all'incisione sul retro.
Sblocca il catetere per verificare la pervietà usando l'estremità della forcella dello strumento di manipolazione per rimuovere il cappuccio protettivo in alluminio e utilizzare l'estremità magnetica per tenere premuto il pulsante e iniettare soluzione salina o PBS con una siringa da un millilitro attaccata all'iniettore corrispondente fino a quando il liquido fuoriesce dall'unica estremità francese. Premere il pulsante caudalmente in tasca e chiudere la pelle sopra il disco di feltro dei VA sotto la flangia del VAS con due suture interrotte quattro oh cranialmente. Per il cateterismo venoso, capovolgere il mouse in posizione supina e aggiungere una goccia di soluzione salina sul lato tagliato.
Separare le legature e legare la prima legatura attorno al catetere e alla vena giugulare con due o tre nodi il più lontano possibile cranicamente per legare la vena e ancorare il catetere all'esterno. Spostare la seconda legatura il più vicino possibile ai muscoli pettorali. Usando micro forbici tagliare un angolo diagonale per creare un'estremità affilata in modo che da tre a cinque millimetri del catetere sia nella vena.
Quindi perforare un foro nella vena usando un ago da 27 gauge attaccato a una siringa da un millilitro piena di soluzione salina tirando la legatura cranica assicurata e spingendo l'ago parallelamente alla vena. Quindi, inserire il catetere nella vena allo stesso modo tirando la legatura cranica fissata e facendo scorrere il catetere nella vena usando le pinzette piegate. Spingere il catetere fino a quando non è allineato con la vena.
Legare la seconda legatura sulla regione inserita dal catetere con due o tre nodi e controllare che non vi siano perdite di sangue. Tagliare l'estremità in eccesso di entrambe le legature con micro forbici e aggiungere una goccia di soluzione salina. Quindi chiudere la pelle con suture interrotte riassorbibili 4.0.
Iniettare nel topo il volume desiderato di inibitore o soluzione salina PBS come dimostrato in precedenza. Mantenere una pressione positiva sullo stantuffo mentre si scollega la siringa dal VAS. Monitorare i topi dopo il recupero.
Utilizzando il software ad ultrasuoni regolare le impostazioni per guadagnare di 30 DB profondità dell'immagine a 9,0 millimetri e larghezza a 8,08 millimetri. Quindi, aggiungere una goccia di elettrogel a ciascuno dei quattro elettrocardiogrammi o elettrodi ECG sul palco e fissare le estremità del mouse su di esse. Stendere gel ecografico caldo sull'addome del topo e abbassare il trasmettitore per metterlo in contatto con l'addome.
Identificare l'aorta come un vaso circolare e pulsante veloce. Individuare l'arteria renale sinistra e rilevare manualmente l'area fino a 12 millimetri cranialmente per garantire che non vi siano interferenze nell'area di interesse. Ritorno all'arteria renale sinistra.
Quindi impostare la sonda a sei millimetri cranialmente dall'arteria. Per l'acquisizione di ultrasuoni 3D impostare il gating respiratorio al 25% di ritardo e una finestra del 50% e il trigger ECG a 50 millisecondi. Dalle opzioni 3D impostare la distanza di scansione su 11,96 millimetri con una dimensione del passo di 0,076 millimetri.
Dopo aver acquisito 157 fotogrammi, scorrere per verificare la qualità dell'immagine prima di salvare l'immagine. Per l'acquisizione del diametro 2D disattivare il gating respiratorio e il trigger ECG e individuare manualmente l'area con il diametro maggiore nel tratto di 12 millimetri dell'aorta surrenale. Premere la modalità B sullo schermo e acquisire un'immagine in modalità B.
Inoltre, per l'immagine EKV senza spostare il trasduttore, acquisire un'immagine EKV con le impostazioni standard del sistema nello stesso sito. Lo sviluppo e la progressione degli aneurismi superrenali sono stati monitorati mediante ultrasuoni all'ottavo giorno e al giorno 27 al basale. Una macchia tricroma dell'aorta del giorno 27 illustra la morfologia dell'aneurisma formato con dissezione della parete e trombo intramurale.
Il tasso di incidenza di aneurisma dell'aorta addominale o AAA all'ottavo giorno e le rotture aortiche entro i primi nove giorni hanno mostrato che il 9% dei topi non è riuscito a formare un AAA. Tuttavia, il 35% dei topi ha subito rotture aortiche prima dell'impianto del catetere, risultando così in un totale del 56% dei topi rimanenti con malattia AAA accertata che è minima per la stratificazione in gruppi di trattamento. È stata osservata una relazione inversa tra l'espansione iniziale e l'ulteriore progressione della malattia degli aneurismi inizialmente a formazione rapida rispetto agli aneurismi a crescita moderata nei topi trattati con controllo PBS.
I risultati ecografici esemplari hanno rivelato che il trattamento con GSK 4 84 ha inibito la progressione dell'AAA mentre gli aneurismi hanno continuato ad allargarsi e controllare i topi. La pervietà del catetere è essenziale poiché la disconnessione del catetere dalla vena o dal pulsante di accesso vascolare provoca la somministrazione del farmaco nello spazio sottocutaneo con concentrazioni di farmaco sconosciute nel sito dell'aneurisma. Quando i topi vengono sacrificati alla fine dell'esperimento, l'acqua e altri tessuti possono essere esaminati istologicamente e l'analisi del sangue condotta per caratterizzare gli effetti dei farmaci on e off target.
